本发明涉及白子菜侧芽培育领域，特别涉及一种白子菜的培育方法和该白子菜的黄酮提取方法。
背景技术：
白子菜别名接骨丹、茹童菜、大绿叶、土田七、散血姜、白子菜、鸡菜、大肥牛、叉花土三七、白背三七、百子菜、富贵菜、菊三七、鸡菜、白背菜、又闻又清。菊科菊三七属植物，以全草入药。夏秋采集，洗净切片，鲜用或晒干。味甘、淡，寒。可用于清热解毒，舒筋接骨，凉血止血。用于支气管肺炎，小儿高热，百日咳，目赤肿痛，风湿关节痛，崩漏；外用治跌打损伤，骨折，外伤出血，乳腺炎，疮疡疔肿，烧烫伤。
现有技术中，通过对白子菜的侧芽进行培养基培养，然后采用瓶接种外植体进行丛生芽形成和培养然后进行生根培养，再进行移植，在这个过程中，侧芽茎段需要经过多次的生存环境转移而且需要采用瓶进行培养，会造成茎段的损伤，实际应用中白子菜的侧芽成活率只有85％-92％左右，因此不利于实际生产时白子菜侧芽的培养使用，必须进行成活率的提高。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种白子菜的培育方法，通过对侧芽培养基的培养和增值栽培后的栽种方法改进，提高了白子菜的成活率。
为实现上述目的，本发明提供以下的技术方案，一种白子菜培育方法,所述方法包括如下步骤：
(1)培养基配制：配制改良ms诱导培养基：添加1.5mg/l的6-ba，0.1mg/l的naa，ph值为5.5-6.5；
(2)侧芽培养：取幼嫩白子菜幼嫩茎段流水冲洗并采用无菌处理后去除茎段水分，将每一个带侧芽的茎段切成0.8cm长，将切后的茎段放入ms培养基进行培养，保持培养基的ph值为5.5-6.5的范围内，将切后的茎段在培养基中先进行2天的暗培养，在此期间每天向培养基加入琼脂、蔗糖、维生素c，并保持培养基中的琼脂、蔗糖、维生素c的浓度分别在：4.5g/l、24g/l、15mg/l之间，温度为23℃，在通过强度为2100lx-2500lx的光照条件下培养22d。
增殖培养：将侧芽培养完成后的茎段放入培养基中，培养基中肌醇的浓度为86mg/l、吲哚丁酸的浓度为0.05mg/l，培养时间为5d；
栽种：清洗茎段后置于空气中锻炼2天，移栽至大棚中，用薄膜覆盖以保湿保温，保持湿度在70％-80％之间、温度在23摄氏度之间，并进行50％-60％的遮阴，20d后移除薄膜，侧芽成活率为96％，4-6个月后进行收割。另外，清洗茎段后置于空气温度为20-22℃的空气中锻炼2-3天，并保持90％的空气湿度。
本发明还公开了一种白子菜的黄酮提取方法,其特征在于，包括如步骤：
将白子菜全株自然风干，研碎成粉末，加入温度为42-70℃的石油醚，分别按照粉末和石油醚质量比为1:2.5-4和1:5-7进行提取，每次提取的时间为1.5-2h，获得提取粉末；在提取粉末中加入提取溶液，并采用60℃-70℃的水浴回流并过滤，获得过滤后粉末；对过滤后粉末采用蒸馏水对提取物进行浸泡，分别用0.3mol/l的naoh和0.3mol/l的hcl处理20-25分钟，并用蒸馏水清洗至ph为5.5-6.5之间；采用梯度乙醇进行洗脱，并别收集洗脱液进行合并浓缩。
最为上述方案的进一步优化，梯度乙醇的浓度分别为：35％乙醇、55％乙醇、75％乙醇、95％乙醇和无水乙醇，分别获得各个浓度的乙醇洗脱液进行合并浓缩后，采用30％乙醇进行定容。
最为上述方案的进一步优化，所述提取溶液分别为60％乙醇、60％甲醇和蒸馏水。
最为上述方案的进一步优化，将合并浓缩后的洗脱液一起放置于循环回流装置中进行回流提取，60-70℃条件下，回流提取3-4次，每次30-40min。
本发明提供的提高白子菜侧芽成活率的方法，具有如下有益效果：
1.应用本发明提供的一种白子菜培育方法，通过对白子菜的侧芽培养基中添加蔗糖、琼脂和维生素并保持在一定得浓度范围之间且过程为暗培养，然后进行增值培养和栽种，通过多次试验均可以提高侧芽的成活率。
2.应用本发明提供的一种白子菜的黄酮提取方法，先采用石油醚进行提取获得粉末，然后采用水浴回流并过滤获得粉末，分别用0.3mol/l的naoh和0.3mol/l的hcl处理20-25分钟，并用蒸馏水清洗至ph为5.5-6.5之间；采用梯度乙醇进行洗脱，并别收集洗脱液进行合并浓缩，可以使得白子菜的总黄酮含量提高了6％-10％。
3.应用本发明提供的一种白子菜培育方法，清洗茎段后置于空气温度为20-22℃的空气中锻炼2-3天，并保持90％的空气湿度，比以往直接将茎段置于空气中更能够锻炼茎段的生存。
具体实施方式
为使发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面通过实施例，对本发明技术方案进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明技术方案，并不用于限制本发明技术方案的范围。
实施例1：
本优选实施例提供的一种白子菜培育方法，包括如下步骤：
(1)培养基配制：配制改良ms诱导培养基：添加1.5mg/l的6-ba，0.1mg/l的naa，ph值为5.5-6.5；
(2)侧芽培养：取幼嫩白子菜幼嫩茎段流水冲洗并采用无菌处理后去除茎段水分，将每一个带侧芽的茎段切成0.8cm长，将切后的茎段放入ms培养基进行培养，保持培养基的ph值为5.5-6.5的范围内，将切后的茎段在培养基中先进行2天的暗培养，在此期间每天向培养基加入琼脂、蔗糖、维生素c，并保持培养基中的琼脂、蔗糖、维生素c的浓度分别在：4.5g/l、24g/l、15mg/l之间，温度为23℃，在通过强度为2100lx-2500lx的光照条件下培养22d。
增殖培养：将侧芽培养完成后的茎段放入培养基中，培养基中肌醇的浓度为86mg/l、吲哚丁酸的浓度为0.05mg/l，培养时间为5d；
栽种：清洗茎段后置于空气中锻炼2天，移栽至大棚中，用薄膜覆盖以保湿保温，保持湿度在70％-80％之间、温度在23摄氏度之间，并进行50％-60％的遮阴，20d后移除薄膜，侧芽成活率为96％，4-6个月后进行收割。另外，清洗茎段后置于空气温度为20-22℃的空气中锻炼2-3天，并保持90％的空气湿度。
实施例2：
本优选实施例提供的一种白子菜培育方法，包括如下步骤：
(1)培养基配制：配制改良ms诱导培养基：添加1.5mg/l的6-ba，0.1mg/l的naa，ph值为6.0-6.5；
侧芽培养：取幼嫩白子菜幼嫩茎段流水冲洗并采用无菌处理后去除茎段水分，将每一个带侧芽的茎段切成1.2cm长，将切后的茎段放入ms培养基进行培养，保持培养基的ph值为5.5-6.5的范围内，将切后的茎段在培养基中先进行3天的暗培养，在此期间每天向培养基加入琼脂、蔗糖、维生素c，并保持培养基中的琼脂、蔗糖、维生素c的浓度分别在：6.5g/l、32g/l、21mg/l之间，温度为23-26℃，在通过强度为3000lx的光照条件下培养30d；
增殖培养：将侧芽培养完成后的茎段放入培养基中，培养基中肌醇的浓度为110mg/l、吲哚丁酸的浓度为0.15mg/l，培养时间为7d；
栽种：清洗茎段后置于空气中锻炼3天，移栽至大棚中，用薄膜覆盖以保湿保温，保持湿度在70％-80％之间、温度在26摄氏度之间，并进行50％-60％的遮阴，20d后移除薄膜，侧芽成活率为96％，4-6个月后进行收割。
(2)组织培养：清洗茎段后置于空气中锻炼2-3天，移栽至大棚中，用薄膜覆盖以保湿保温，保持湿度在70％-80％之间、温度在23-26摄氏度之间，并进行50％-60％的遮阴，20d后移除薄膜，4-6个月后进行收割。ms培养基初基本培养基外还包括浓度为0.02-0.03mg/l的萘乙酸、浓度为0.02-0.03mg/l的苄氨基腺嘌呤。
如表1所示，通过增加肌醇、琼脂、蔗糖、维生素c并保持一定浓度，以及增加肌醇，获得的h1-h6，侧芽成活率分别为：94％、97％、94、97％、94、96％，在普通的ms培养基中没有肌醇、琼脂、蔗糖、维生素c的情况下侧芽成活率为85％-93％之间。
表1
实施例3：
本优选提供了白子菜的黄酮提取方法：
将白子菜全株自然风干，研碎成粉末，加入温度为42-70℃的石油醚，分别按照粉末和石油醚质量比为1:2.5-4和1:5-7进行提取，每次提取的时间为1.5-2h，获得提取粉末；在提取粉末中加入提取溶液，并采用60℃-70℃的水浴回流并过滤，获得过滤后粉末；对过滤后粉末采用蒸馏水对提取物进行浸泡，分别用0.3mol/l的naoh和0.3mol/l的hcl处理20-25分钟，并用蒸馏水清洗至ph为5.5-6.5之间；采用梯度乙醇进行洗脱，并别收集洗脱液进行合并浓缩。
采用石油醚为溶剂在索氏提取器中抽提，其中，粉末和石油醚质量比为1:2.5-4和1:5-7、提取溶液分别为60％乙醇、60％甲醇和蒸馏水，以去除叶绿素并脱蜡、脱脂，然后自会挥去石油醚，获得粉末备用。加入提取溶液后，采用水浴回流并过滤得到过滤后粉末，然后采用蒸馏水浸泡去除杂质，并采用naoh和hcl进行中和处理，然后再次进行蒸馏水清洗。然后采用梯度乙醇进行洗脱，并别收集洗脱液进行合并浓缩。将合并浓缩后的洗脱液一起放置于循环回流装置中进行回流提取，60-70℃条件下，回流提取3-4次，每次30-40min。
其中，梯度乙醇分别为：35％乙醇、55％乙醇、75％乙醇、95％乙醇和无水乙醇，分别获得各个浓度的乙醇洗脱液进行合并浓缩后，采用30％乙醇进行定容。另外，在采用梯度乙醇洗脱之前，加入聚酰胺粉并进行搅拌，并将粉末溶液加入聚酰胺粉的砂芯层析柱中，然后采用梯度乙醇进行洗脱。
可以知道，上述实施例仅为了说明发明原理而采用的示例性实施方式，然而本发明不仅限于此，本领域技术人员在不脱离本发明实质情况下，可以做出各种改进和变更，这些改进和变更也属于本发明的保护范围。