专利名称：从白子菜中提取多糖和黄酮的方法
技术领域：
本发明属于天然产物提取领域，涉及一种从白子菜中同时提取多糖和黄酮的方法。
背景技术：
白子菜(Gynura divaricata(L. )DC.)，又名白背土三七、叉花土三七，多年生草本 植物，菊科三七草属.高30 50cm，根茎块状，茎紫红色，被短毛，分布于我国南部和西 南部，福建各地均有，喜生于潮湿的阴地上。全草消热解毒，活血化淤，去风消肿，根入 药，有泻火、凉血、生津之功效，是民间治疗乳腺炎、关节炎、气管炎等各种炎症常见中草药。
近代科学研究表明白子菜中含有丰富的多糖及黄酮类生物活性物质，目前，有关白子 菜中活性成分含量测定研究较多，而对于白子菜中黄酮、多糖的提取工艺未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法。
本发明的技术方案概述如下
一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，包括如下步骤
(1) 以白子菜的叶或茎为原料除杂粉碎，加水恒温浸提1 3次，每次浸提时，水与原料
的质量比为5 30:1，浸提时间为2 10小时，温度为60 9(TC，过滤后得提取液；
(2) 将提取液浓縮，浓縮液体积为提取液体积的1/3 1/5;
(3) 向浓縮液中加入沉淀剂，静置2 24h，使多糖沉淀析出，分离沉淀和上清液；
(4) 将分离得到的沉淀干燥得到白子菜多糖提取物；
(5) 回收上清液中的溶剂，将底物加水溶解，所述加水量为所述原料质量的l-3倍，得黄 酮粗提液；
(6) 将黄酮粗提液用树脂柱纯化，所述黄酮粗提液上柱后控制流速为1 3ml/rain,先用5 IO倍黄酮粗提液体积的蒸馏水洗脱，再用体积百分浓度为60 80%的乙醇水溶液洗脱至流出 液中无黄酮检出(TLC检测无黄酮)，合并乙醇洗脱液；
(7) 减压回收乙醇，除净洗脱液中的乙醇，底物干燥得黄酮提取物。 所述白子菜为鲜白子菜、自然晾干白子菜或炒制白子菜。
所述沉淀剂为体积百分浓度为90%-100%的乙醇水溶液或体积百分浓度为90%_100%的丙 酮水溶液，所述沉淀剂的用量为浓縮液体积的1 5倍。
所述树脂柱的型号为AB-8、 D-lOl、 D-140、 DM-130、 LSA-IO、 LSA-20或HPD-600。 所述步骤(3)中所述分离为离心分离或过滤分离。 所述步骤(2)所述的浓縮为真空浓縮或膜浓縮。
所述步骤(4)或步骤(7)中所述干燥为冷冻干燥、真空干燥或喷雾干燥。
本发明的优点本发明公开了一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，通过一次提取 同时得到多糖、黄酮两种活性物质；将大孔树脂吸附分离法应用到黄酮精制工艺中，存在 分离效果好、黄酮含量高、不破坏黄酮原有结构与活性等优点；得到的多糖产品中多糖含 量》25% (以葡萄糖记)，得率》10%，黄酮产品中黄酮含量》44% (以芦丁记)，得率》1%。 本发明填补了白子菜多糖、黄酮提取方法的空白，具有快速、简便、成本低、收率高等优 点。
具体实施例方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。 实施例1
一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，步骤为-
(1) 取炒制白子菜叶50g，除杂粉碎，粉碎后加水搅拌均匀，在液料比25: 1、温度80 。C，时间4h条件下恒温浸提1次，然后经300目滤布过滤得提取液；
(2) 提取液用旋转蒸发器真空浓縮，得浓縮液体积为提取液体积的1/4;
(3) 向浓縮液中加入4倍于浓縮液体积的体积百分浓度为95%食用乙醇水溶液，然后静 置10h，使多糖沉淀析出，将醇沉液在3600r/min的条件下离心10rain，分别得到沉淀和 上清液；
(4) 将分离得到的沉淀加水溶解至500ml后冷冻干燥，得白子菜多糖提取物，得率为 10. 24%，以葡萄糖记，多糖含量为23. 05%;
(5) 将离心分离得到的上清液减压回收乙醇，然后加水溶解至100ml，得黄酮粗提液；
(6) 用AB-8型大孔吸附树脂进行纯化，将黄酮粗提液上柱，控制流速为2ml/min，待黄 酮被树脂充分吸附后，先用7倍黄酮粗提液体积的蒸馏水洗脱，再用体积百分浓度为8(F。 的乙醇水溶液洗脱至无黄酮检出(TLC检测无黄酮)，合并乙醇洗脱液；
(7) 将洗脱液中的乙醇减压回收，除净洗脱液中的乙醇，然后加水溶解至125ml，得精 制黄酮提取液，精制黄酮提取液经冷冻干燥得白子菜黄酮提取物，得率为1.04%，以卢丁 记，总黄酮含量为53.3%。
实施例2
一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，步骤为
(1) 取自然晾干白子菜叶50g，粉碎后加水搅拌均匀，在液料比20: 1、温度8(TC，时 间6h条件下恒温浸提1次，然后经300目滤布过滤得提取液；
(2) 将提取液用旋转蒸发器真空浓缩，得浓縮液体积为提取液体积的1/4;
(3) 向浓縮液中加入4倍于浓縮液体积的体积百分浓度为95%食用乙醇水溶液，然后静 置10h，使多糖沉淀析出，将醇沉液过滤，分别得到沉淀和滤液；
(4) 将分离得到的沉淀加水溶解至500ml后冷冻干燥，得白子菜多糖提取物，得率为10%, 以葡萄糖记，多糖含量为24. 87%;
(5) 回收上清液中的乙醇，然后加水溶解至100ml，得黄酮粗提液；
(6) 用AB-8型大孔吸附树脂进行纯化，将黄酮粗提液上柱，控制流速为2ml/min，待黄
酮被树脂充分吸附后，先用5倍黄酮粗提液体积的蒸馏水洗脱，再用体积百分浓度为6(F。 乙醇水溶液洗脱至无黄酮检出(TLC检测无黄酮)，合并乙醇洗脱液； (7)将洗脱液中的乙醇减压回收，然后加水溶解至125ml，得精制黄酮提取液；精制黄 酮提取液经冷冻干燥得白子菜黄酮提取物，得率为1. 31%,以戸丁记，总黄酮含量为44. 2%。 实施例3
一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，步骤为-
(1) 取炒制白子菜叶200g，粉碎后加水搅拌均匀，在液料比20: 1、温度8(TC、时间4h 条件下恒温浸提2次，经300目滤布过滤得提取液，合并提取液；
(2) 将提取液用旋转蒸发器真空浓縮，得浓缩液体积为提取液体积的1/3;
(3) 向浓縮液中加入4倍于浓縮液体积的体积百分浓度为95%的乙醇水溶液，然后静置8h， 使多糖沉淀析出，然后将醇沉液在3600r/min的条件下离心10min，分别得到沉淀和上清液；
(4) 将分离得互的沉淀真空干燥，得白子菜多糖提取物，得率为13.51以葡萄糖记，多 糖含量为21. 05%;
(5) 将离心分离得到的上清液减压回收乙醇，然后加水溶解至300ml，得黄酮粗提液；
(6) 用AB-8型大孔吸附树脂进行纯化，将黄酮粗提液上柱，控制流速为3ml/min，待黄酮 被树脂充分吸附后，先用5倍黄酮粗提液体积的蒸馏水洗脱，再用70%乙醇洗脱至无黄酮检 出(TLC检测无黄酮)，合并乙醇洗脱液；
(7) 将洗脱液中的乙醇减压回收，除净洗脱液中的乙醇，然后加水溶解至500ml，得精制 黄酮提取液；精制黄酮提取液经冷冻干燥得白子菜黄酮提取物，得率为1.41%，以戸丁记， 总黄酮含量为55. 31
实施例4
一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，步骤为-
(1) 取炒制白子菜叶200g，在液料比25: 1、温度80'C恒温浸提4h，时间3h条件下恒温 浸提2次，经300目滤布过滤得提取液，合并提取液；
(2) 将提取液用旋转蒸发器真空浓縮，得浓縮液体积为提取液体积的1/3;
(3) 向浓縮液中加入3倍于浓縮液体积的体积百分浓度为90%食用乙醇水溶液，然后静置 24h，使多糖沉淀析出，然后将醇沉液在3600r/min的条件下离心10min，分别得到沉淀和 上清液；
(4) 将上述沉淀真空干燥，得白子菜多糖提取物，得率为13.3%，以葡萄糖记，多糖含量 为21.08%;
(5) 将离心分离得到的上清液减压回收乙醇，将底物加水溶解至300ml，得黄酮粗提液；
(6) 用DM-130型大孔吸附树脂进行纯化，将黄酮粗提液上柱，控制流速为3ml/min，待黄 酮被树脂充分吸附后，先用5倍黄酮粗提液体积的蒸馏水洗脱，再用体积百分浓度为70% 乙醇水溶液洗脱至无黄酮检出(TLC检测无黄酮)，合并乙醇洗脱液；
(7) 将洗脱液中的乙醇减压回收，然后加水溶解至500ml，得精制黄酮提取液；精制黄酮 提取液经冷冻干燥得白子菜黄酮提取物，得率为1.01%，以芦丁记，总黄酮含量为54.9%。
实施例5
一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，步骤为
(1) 取鲜白子菜茎500g，粉碎后加水搅拌均匀，在液料比8: 1、温度80°C、时间4h条 件下恒温浸提l次，经300目滤布过滤得提取液，合并提取液；
(2) 将提取液用旋转蒸发器真空浓縮，得浓缩液体积为提取液体积的1/5;
(3) 向浓缩液中加入4倍于浓縮液体积的体积百分浓度为95。/。的乙醇水溶液，然后静置,12h， 使多糖沉淀析出，然后将醇沉液在3600r/min的条件下离心10min，分别得到沉淀和上清液；
(4) 将分离得到的沉淀真空干燥，得白子菜多糖提取物，得率为20%，以葡萄糖记，多糖 含量为20. 05%;
(5) 将离心分离得到的上清液减压回收乙醇，然后加水溶解至500ml，得黄酮粗提液；
(6) 用AB-8型大孔吸附树脂进行纯化，将黄酮粗提液上柱，控制流速为3ml/ndn，待黄酮 被树脂充分吸附后，先用5倍黄酮粗提液体积的蒸馏水洗脱，再用70%乙醇洗脱至无黄酮检 出(TLC检测无黄酮)，合并乙醇洗脱液；
(7) 将洗脱液中的乙醇减压回收，除净洗脱液中的乙醇，然后加水溶解至500ml，得精制 黄酮提取液；精制黄酮提取液经冷冻干燥得白子菜黄酮提取物，得率为1.01%，以芦丁记， 总黄酮含量为44. 3%。
实施例6
一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，包括如下步骤.-
(1) 以鲜白子菜叶为原料除杂切成粉碎，加水恒温浸提l次，每次浸提时，水与原料的质 量比为5:1，浸提时间为2小时，温度为6CTC，过滤后得提取液； '
(2) 将提取液膜浓缩，浓縮液体积为提取液体积的1/3;
(3) 向浓縮液中加入体积百分浓度为100%的乙醇为沉淀剂，沉淀剂的用量为浓縮液体积的 4倍，静置2h，使多糖沉淀析出，离心分离沉淀和上清液；
(4) 将分离得到的沉淀喷雾干燥得到白子菜多糖提取物；
(5) 回收上清液中的溶剂，将底物加水溶解，所述加水量为所述原料质量的l倍，得黄酮 粗提液；
(6) 将黄酮粗提液用D-101型大孔吸附树脂柱纯化，所述黄酮粗提液上柱后控制流速为 13ml/min,先用5倍黄酮粗提液体积的蒸馏水洗脱，再用体积百分浓度为70%的乙醇水溶液洗 脱至流出液中无黄酮检出(TLC检测无黄酮)，合并乙醇洗脱液；
(7) 减压回收乙醇，除净洗脱液中的乙醇，底物喷雾干燥得黄'酮提取物。 实施例7
一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，包括如下步骤-
(1) 将自然晾干白子菜茎为原料除杂粉碎，加水恒温浸提3次，每次浸提时，水与原料的 质量比为20:1，浸提时间为8小时，温度为90'C，过滤后得提取液；
(2) 将提取液真空浓缩，浓縮液体积为提取液体积的1/4;
(3) 向浓縮液中加入体积百分浓度为100%的丙酮为沉淀剂，沉淀剂的用量为浓縮液体积的
l倍，静置24h，使多糖沉淀析出，过滤分离沉淀和上清液；
(4) 将分离得到的沉淀真空干燥得到白子菜多糖提取物；
(5) 回收上清液中的溶剂，将底物加水溶解，所述加水量为所述原料质量的3倍，得黄酮 粗提液；
(6) 将黄酮粗提液用D-140型大孔吸附树脂柱纯化，所述黄酮粗提液上柱后控制流速为 lml/min,先用10倍黄酮粗提液体积的蒸馏水洗脱,再用体积百分浓度为80%的乙醇水溶液洗 脱至流出液中无黄酮检出，合并乙醇洗脱液；
(7) 减压回收乙醇，除净洗脱液中的乙醇，底物真空干燥得黄酮提取物。 实施例8
一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，包括如下步骤-
(1) 将炒制白子菜茎为原料除杂粉碎，加水恒温浸提l次，每次浸提时，水与原料的质量 比为30:1，浸提时间为10小时，温度为85'C，过滤后得提取液；
(2) 将提取液浓缩，浓縮液体积为提取液体积的1/5;
(3) 向浓缩液中加入体积百分浓度为90%的丙酮水溶液为沉淀剂，沉淀剂的用量为浓縮液 体积的5倍，静置10h，使多糖沉搾析出，分离沉淀和上清液；
(4) 将分离得到的沉淀干燥得到白子菜多糖提取物；
(5) 回收上清液中的溶剂，将底物加水溶解，所述加水量为所述原料质量的2倍，得黄酮 粗提液；
(6) 将黄酮粗提液用LSA-10型大孔吸附树脂柱纯化，所述黄酮粗提液上柱后控制流速为 2ml/min，先用8倍黄酮粗提液体积的蒸馏水洗脱，再用体积百分浓度为80%的乙醇水溶液洗 脱至流出液中无黄酮检出，合并乙醇洗脱液；
(7) 减压回收乙醇，除净洗脱液中的乙醇，底物干燥得黄酮提取物。 实施例9
一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，包括如下步骤
(1) 将炒制白子菜叶为原料除杂粉碎，加水恒温浸提l次，每次浸提时，水与原料的质量
比为30:1，浸提时间为10小时，温度为85'C，过滤后得提取液；
(2) 将提取液浓缩，浓縮液体积为提取液体积的1/5;
(3) 向浓縮液中加入体积百分浓度为95%的丙酮水溶液为沉淀剂，沉淀剂的用量为浓縮液 体积的3倍，静置12h，使多糖沉淀析出，分离沉淀和上清液；
(4) 将分离得到的沉淀干燥得到白子菜多糖提取物；
(5) 回收上清液中溶剂，底物加水溶解，加水量为所述原料质量的1倍，得黄酮粗提液；
(6) 将黄酮粗提液用LSA-20型大孔吸附树脂柱纯化，所述黄酮粗提液上柱后控制流速为 3ral/min,先用7倍黄酮粗提液体积的蒸馏水洗脱，再用体积百分浓度为75%的乙醇水溶液洗 脱至流出液中无黄酮检出，合并乙醇洗脱液；
(7) 减压回收乙醇，除净洗脱液中的乙醇，底物干燥得黄酮提取物。 本实施例中的大孔吸附树脂也可以选用HPD-600型，以组成新的实施例。
权利要求
1.一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，其特征是包括如下步骤(1)以白子菜的叶或茎为原料除杂粉碎，加水恒温浸提1～3次，每次浸提时，水与原料的质量比为5～30∶1，浸提时间为2～10小时，温度为60～90℃，过滤后得提取液；(2)将提取液浓缩，浓缩液体积为提取液体积的1/3～1/5；(3)向浓缩液中加入沉淀剂，静置2～24h，使多糖沉淀析出，分离沉淀和上清液；(4)将分离得到的沉淀干燥得到白子菜多糖提取物；(5)回收上清液中的溶剂，将底物加水溶解，所述加水量为所述原料质量的1-3倍，得黄酮粗提液；(6)将黄酮粗提液用树脂柱纯化，所述黄酮粗提液上柱后控制流速为1～3ml/min，先用5～10倍黄酮粗提液体积的蒸馏水洗脱，再用体积百分浓度为60～80％的乙醇水溶液洗脱至流出液中无黄酮检出，合并乙醇洗脱液；(7)减压回收乙醇，除净洗脱液中的乙醇，底物干燥得黄酮提取物。
2. 根据权利要求l所述的从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，其特征在于所述白子菜为鲜 白子菜、自然晾干白子菜或炒制白子菜。
3. 根据权利要求l所述的从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，其特征在于所述沉淀剂为体 积百分浓度为90%-100%的乙醇水溶液或体积百分浓度为90%-100%的丙酮水溶液，所述沉淀 剂的用量为浓缩液体积的1 5倍。
4. 根据权利要求l所述的从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，其特征在于所述树脂柱的型 号为AB-8、 D-皿、D-140、 DM-130、 LSA-IO、 LSA-20或HPD-600。
5. 根据权利要求1所述的从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，其特征在于所述步骤(3) 中所述分离为离心分离或过滤分离。
6. 根据权利要求1所述的从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，其特征在于所述步骤(2) 所述的浓縮为真空浓縮或膜浓縮。
7. 根据权利要求1所述的从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，其特征在于所述步骤(4) 或步骤(7)中所述干燥为冷冻干燥、真空干燥或喷雾干燥。
全文摘要
本发明公开了一种从白子菜中提取多糖和黄酮的方法，由如下步骤组成(1)以白子菜的叶或茎为原料除杂粉碎加水恒温浸提，过滤后得提取液；(2)将提取液浓缩；(3)向浓缩液中加入沉淀剂，使多糖沉淀析出，分离沉淀和上清液；(4)将分离得到的沉淀干燥得到白子菜多糖提取物；(5)回收上清液中的溶剂，将底物加水得黄酮粗提液；(6)将黄酮粗提液用树脂柱纯化，先用蒸馏水洗脱，再用乙醇水溶液洗脱至流出液中无黄酮检出，合并乙醇洗脱液；(7)减压回收乙醇，底物干燥得黄酮提取物。本发明的方法具有快速、简便、成本低、收率高等优点。
文档编号A61P15/14GK101336949SQ200810118639
公开日2009年1月7日 申请日期2008年8月21日 优先权日2008年8月21日
发明者凌 刘, 娜 吴, 明 周, 慧 孙, 崔明学 申请人:中国食品发酵工业研究院