本发明属于植物根结线虫接种方法技术领域，具体的提供了一种植物根结线虫盆栽3层病土接种法。
背景技术：
植物根结线虫病是植物的土传病害。近年来，随着感病寄主的连片种植、病苗的调运、保护地种植面积的扩大和复种指数增加，根结线虫病普遍发生，逐年加重，一般造成减产10％-15％，严重时达50％以上，甚至绝收，成为生产上的重要病害。
在根结线虫病防治研究中，要进行根结线虫病生物防治、化学防治、抗性鉴定、药剂筛选等盆栽试验，而这些盆栽试验能否顺利进行取决于根结线虫接种是否成功。目前，根结线虫接种技术主要有卵接种、2龄幼虫接种和单一病土接种3种技术。其中，卵接种技术是通过采集根结病根，在光学体视镜下挑取根结上的线虫卵囊放入清水中，用清水配成一定比例的卵液，接种到盆栽植物根部；2龄幼虫接种技术是在上述挑卵的基础上，将卵囊放入清水中静置一定时间后，挑取孵出的2龄幼虫放入清水中，用清水配成一定比例的幼虫液，接种到盆栽植物根部。这2种技术可以准确定量接种，但接种成功率低，挑虫的工作量大，费工费时；单一病土接种技术是把根结线虫病土混匀后装入花盆中，直接移栽幼苗进行接种。该接种技术接近自然接种，接种成功率高，省去了挑虫环节，工作量大大减轻，省工省时，因此该技术在根结线虫病盆栽试验中广泛应用。但现有的根结线虫单一病土接种技术还有以下问题需要解决：接种病土用量大，接种的盆栽苗发病早，有的试验还没完成，苗已病死了。
技术实现要素：
本发明的目的是克服上述缺陷，提供一种植物根结线虫盆栽3层病土接种法，在保证根结线虫接种成功的基础上，减少线虫病土的接种用量，防止接种苗过早病死。
本发明的技术方案：一种植物根结线虫盆栽3层病土接种法，包括如下步骤：
（1）无病土采集与处理
采集塘坭土、荒地土或植物根部未见根结症状的无根结线虫土，粉碎后加入腐熟的粪肥或农业废弃物等有机肥作为基肥，与无根结线虫土混匀后得到无病土备用，有机肥与无根结线虫土的体积用量比为1：10。
（2）病土采集与处理
采集植物根部有根结症状的病根及根际病土，将病根砍碎加入根际病土中混匀得到病土备用；若植物根部有根结症状的病根已腐烂，则直接采集根际病土混匀得到病土备用。
（3）病土扩繁培养
a、育苗：将市售专用育苗基质装入50孔育苗盆中，把根结线虫感病寄主的种子播入育苗基质中，每育苗孔1粒种子，待苗长到3-5真叶时移栽；
b、扩繁培养：把步骤（2）采集混匀备用的病土分装在花盆中，把步骤a育好的苗移栽在病土上，每盆1-3株，待苗长到30-60天后，线虫繁殖1-2代，土中的根结线虫得到扩繁，虫口密度增加。
（4）扩繁病土预处理
将步骤b扩繁培养的盆栽寄主地上部茎叶剪掉，把根和病土倒出，将有根结的病根砍碎加入病土中混匀得到预处理病土备用。
（5）3层病土接种
在接种花盆底部先加一层步骤（1）处理过的无病土，第二层加步骤（4）处理过的预处理病土，最上面再加一层步骤（1）处理过的无病土。装好盆后直接进行移栽接种，把寄主3-5真叶龄幼苗移栽在上层无病土中。
进一步的，步骤a中，所述根结线虫感病寄主为番茄、甜瓜或黄瓜。
进一步的，步骤（4）中，在扩繁病土预处理前，扩繁培养的盆栽提前4-7天停止淋水。
进一步的，步骤（5）中，3层土体积用量比：无病土：预处理病土：无病土为1：1：1。
进一步的，步骤（5）中，所述接种花盆内壁设有刻度线。便于装土操作。
进一步的，所述刻度线将花盆划分成体积相同的上中下3层。按上述3层土用量比例把花盆用刻度线划分为上中下3层，便于按用量比例分层装土。
本发明优点：1、与现有的根结线虫卵和幼虫接种技术相比，本发明接种成功率高，接种发病率达100%，发病病级在3-5级，符合根结线虫盆栽试验要求。且省去了挑虫环节，工作量大大减轻。
2、与现有的根结线虫单一病土接种技术相比，本发明提供的病土扩繁培养技术，能使采集到的病土中根结线虫得到扩繁，病土虫口密度增加，为接种成功提供了虫源保证。
3、本发明采用3层病土接种技术，每盆栽土上下2层为无线虫土，仅有中间一层为线虫病土，相比现有根结线虫单一病土接种技术的病土用量减少1/2-2/3，大大减少了病土采集、运输、扩繁培养等的工作量及成本。
4、本发明每盆栽线虫病土放在中层，上下层均为无线虫土，相比现有根结线虫单一病土接种技术，本发明能有效保护接种虫源不被流失、不受表面干燥和阳光照射的影响，减少接种虫源的流失和死亡。
5、本发明上层为无线虫土，在移栽时，幼苗种在上层的无病土中。相比现有根结线虫单一病土接种技术，本发明能有效保护刚移栽的幼苗不被线虫侵染，待幼苗定植成活后，根部正好生长到中层线虫土中，这样既能保证接种成功，又能避免幼苗过早病死。
6、本发明在无根结线虫土中，加入了一定比例的腐熟有机肥作为基肥，为盆栽植株的生长提供营养保证。
7、扩繁预处理后的病土虫口密度增加，接种成功率也增大，扩繁的病土经混匀预处理后按相同用量接种，使接种条件一致，确保试验的准确性和可比性。
8、接种花盆内壁用刻度线按3层土用量比例划分为上中下3层，方便按比例分层装土，使装土操作简单易行。
附图说明
图1为接种花盆的结构示意图。图2为第一实施例番茄根结线虫接种效果图。
图3为第一实施例番茄根结线虫接种盆栽试验图。
图4为第二实施例甜瓜根结线虫接种效果图。
图5为第二实施例甜瓜根结线虫接种盆栽试验图。
图中的附图标号为：1-花盆本体，2-刻度线。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
番茄根结线虫盆栽3层病土接种试验，包括如下步骤：
（1）无病土采集与处理
采集无根结线虫塘坭土，经粉碎后加入腐熟的猪粪有机肥，混匀后得到无病土备用，腐熟猪粪有机肥与无根结线虫塘坭土的体积用量比为1：10.。
（2）病土采集与处理
采集番茄根部有根结症状的病根及根际病土，将病根砍碎成约1cm的碎段，将病根碎段加入根际病土中混匀得到病土备用。
（3）病土扩繁培养
a、育苗：将市售专用育苗基质装入50孔育苗盆中，把市售红宝石番茄种播入育苗基质中，每育苗孔1粒种子，待番茄苗长到4-5真叶时移栽。
b、扩繁培养：把步骤（2）采集混匀备用的病土分装到花盆中，把步骤a育好的番茄苗移栽在病土上，每盆3株，待苗长到35天后，线虫完成1代繁殖，土中的根结线虫得到扩繁，虫口密度增加。
（4）扩繁病土预处理
在扩繁病土预处理前，扩繁培养的盆栽提前7天停止淋水。将步骤b扩繁培养的盆栽番茄茎叶剪掉，把病根和病土倒出，将有根结的病根砍碎成约1cm的碎段，加入病土中混匀得到预处理病土备用。
（5）3层病土接种
选用直径30cm高25cm的塑料花盆，接种花盆结构如图1所示，花盆本体1内壁设有刻度线2，按3层土用量比例把花盆用刻度线2划分为体积相同的上中下3层。分别在每个接种花盆底部先加一层步骤（1）处理过的无病土，第二层加步骤（4）处理过的预处理病土，最上面再加一层步骤（1）处理过的无病土，3层土体积用量比：无病土：预处理病土：无病土为1：1：1。
（6）移栽
装好盆后进行移栽接种，把番茄4-5真叶龄幼苗移栽在花盆上层无病土中，每盆1株，共40盆，移栽后不施肥、不施杀线剂，只进行常规淋水和地上部病虫管理。
（7）对照处理
设根结线虫单一病土接种为对照，把步骤（4）处理过的预处理病土直接装入同样规格的塑料花盆中，共40盆，番茄苗的移栽和管理同步骤（6）。
（8）试验结果与分析
移栽后60天调查番茄植株死亡率，并分别采集各盆栽番茄根部，调查根结线虫发病率及根结病级。表1试验结果表明，3层病土接种的40盆试验番茄，番茄死株数为0，死亡率为0，根结线虫发病率为100%，发病病级多为3-5级，其中以4级最多。用经扩繁的单一病土接种作对照，番茄死株数为6株，死亡率为15.0%，根结线虫发病率为100%，根结病级为3-5级，其中以5级最多。相比之下，在同样用扩繁病土接种时，单一病土接种较3层病土接种的番茄死亡率高，发病重。（试验结果详见表1，接种效果见图2，接种盆栽试验见图3）
根结分级标准：
0级：根系无根结
1级：根系的1%~5%有根结
2级：根系的6%~20%有根结
3级：根系的21%~40%有根结
4级：根系的41%~70%有根结
5级：根系的71%以上有根结。
实施例2
甜瓜根结线虫盆栽3层病土接种试验，包括如下步骤：
（1）无病土采集与处理
采集无根结线虫的荒地土粉碎后加入腐熟鸡粪有机肥，混匀后得到无病土备用，腐熟鸡粪有机肥与无根结线虫荒地土的体积用量比为1：10。
（2）病土采集与处理
采集甜瓜根部有根结症状的病根及根际病土，将病根砍碎成1-2cm碎段，将病根碎段加入根际病土中混匀得到根结线虫病土备用。
（3）病土扩繁培养
a、育苗：将市售专用育苗基质装入50孔育苗盆中，把市售北甜1号甜瓜种播入育苗基质中，每育苗孔1粒种子，待甜瓜苗长到3-4真叶时移栽。
b、扩繁培养：把步骤（2）采集混匀备用的病土分装到花盆中，把步骤a育好的甜瓜苗移栽在病土上，每盆3株，待苗长到30天后，线虫完成1代繁殖，土中的根结线虫得到扩繁，虫口密度增加。
（4）扩繁病土预处理
在扩繁病土预处理前，扩繁培养的盆栽提前5天停止淋水。将步骤b扩繁培养的盆栽甜瓜茎叶剪掉，把病根和病土倒出，将有根结的病根砍碎成1-2cm的碎段，将病根碎段加入病土中混匀得到预处理病土备用。
（5）3层病土接种
选用直径30cm高25cm的塑料花盆，接种花盆结构如图1所示，花盆本体1内壁设有刻度线2，按3层土用量比例把花盆用刻度线2划分为体积相同的上中下3层。分别在每个接种花盆底部先加一层步骤（1）处理过的无病土，第二层加步骤（4）处理过的预处理病土，最上面再加一层步骤（1）处理过的无病土，3层土体积用量比：无病土：预处理病土：无病土为1：1：1。
（6）移栽
装好盆后进行移栽接种，把甜瓜3-4真叶龄幼苗移栽在花盆上层无病土中，每盆2株，共40盆，移栽后不施肥、不施杀线剂，只进行常规淋水和地上部病虫管理。
（7）对照处理
设根结线虫单一病土接种为对照，把步骤（2）处理过的病土直接装入直径30cm高25cm的塑料花盆中（不进行扩繁处理），共40盆，甜瓜苗的移栽和管理同步骤（6）。
（8）试验结果与分析
移栽后55天调查甜瓜植株死亡率，并分别采集各盆栽甜瓜根部，调查根结线虫发病率及根结病级。表2试验结果表明，3层病土接种的40盆试验甜瓜，植株死亡率为0，根结线虫发病率为100%，发病病级多为3-5级，其中以4级最多。用未经扩繁的单一病土接种作对照，甜瓜死株数为9株，死亡率为11.25%，根部未见根结症状有5株，根结线虫发病率为93.75%，根结病级多为3-5级，其中以4级最多。相比之下，对照单一病土接种用不扩繁病土接种时，发病率较3层病土接种的轻，且还有少量未发病，可能与未扩繁病土的虫口密度偏低有关。（试验结果详见表2，接种效果见图4，接种盆栽试验见图5，根结分级标准同实例1）
应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种修改或改动，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。