一种藤三七的组织培养生根方法与流程

本发明涉及植物组织培养
技术领域：
，尤其涉及一种藤三七的组织培养生根方法。
背景技术：
：藤三七是落葵科(basellaceae)落葵薯属(anredera)多年生肉质缠绕植物，广泛分布于全球温带地区，我国江苏、浙江、福建、广东等地均有分布。藤三七的珠芽、叶及根可做药用，具有补肾、活血、散瘀等功效，可用于治疗腰膝痹痛、病后体弱、跌打损伤及骨折。藤三七，同时作为一种食用的新兴保健蔬菜，珠芽入药，水煮后味微甜，嚼之有黏性，性平，能消肿散瘀，补虚止血，可治无名肿毒、外伤出血、吐血，腰膝无力，一般当作健胃保肝、骨折跌打损伤等症状之偏方使用，具有药用价值和食用养生价值。关于藤三七的栽培方式，一般采用肉质根或珠芽繁殖以及扦插繁殖这两种，然而，这两种方式下的种质运输与保存将大大受限。因此，建立藤三七的组培快繁体系，将成为藤三七优良种质保存和种苗批量生产的一种有力途径，其具有潜在的应用前景。目前，关于藤三七的组织培养和植株再生方面研究的几乎很少，唯一可知的便是申请号为201710634437.4的专利公开文本“一种藤三七离体再生体系建立的方法”，然而，该专利所阐述的技术方案却也存在以下两方面的弊端：(1)试管苗的生根率仅达到94.44％，还有待提高；(2)藤三七组织培养快繁体系的愈伤组织分化成苗需要一定的时间；虽然其以带芽茎段作外植体直接诱导不定芽，避免了愈伤组织分化成苗这个过程，但因整个过程涉及到多次接种、转接，使整体快繁体系的建立周期变得较长，不利于推广。据此，目前急需一种生根率更高、育苗周期更短的藤三七组织培养生根方法。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题在于提供一种生根率更高、育苗周期更短的藤三七的组织培养生根方法。本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：一种藤三七的组织培养生根方法，包括如下具体步骤：(1)外植体的预处理：采摘新鲜的藤三七带腋芽茎段作为外植体，并采用洗衣粉冲洗0.8-1.2min；接着，流水冲洗1.8-2.2h，直至藤三七带腋芽茎段的外表面无残留污垢；最后，将其置于超净工作台中，并使用75％酒精浸泡28-32s；浸泡结束后，无菌水冲洗2-4次，备用；(2)外植体的消毒：将预处理后的外植体，采用1％次氯酸钠溶液浸泡3.8-4.2min，再用无菌水冲洗4-6次，即得接种所需的无菌外植体；(3)直接生根培养：无菌条件下，将步骤(2)中所得的无菌外植体切成0.8-1.2cm长；接着，再将其形态学下端直接插入带有生根培养基的培养瓶中进行直接生根培养；其中，生根培养基的配方具体为：1/2ms+25g/l蔗糖+7g/l琼脂+0.8mg/liba，ph5.8；培养条件为：培养温度25±1℃，光照时间14-16h/d，光照强度1500-2000lx。作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)中，采摘新鲜的藤三七带腋芽茎段作为外植体，并采用洗衣粉冲洗1min；接着，流水冲洗2h，直至藤三七带腋芽茎段的外表面无残留污垢；最后，将其置于超净工作台中，并使用75％酒精浸泡30s；浸泡结束后，无菌水冲洗3次，备用。作为本发明的优选方式之一，所述步骤(2)中，将预处理后的外植体，采用1％次氯酸钠溶液浸泡4min，再用无菌水冲洗5次，即得接种所需的无菌外植体。作为本发明的优选方式之一，所述步骤(3)中，无菌条件下，将步骤(2)中所得的无菌外植体具体切成1cm长。作为本发明的优选方式之一，所述步骤(3)中，将无菌外植体的形态学下端直接插入培养瓶中培养；当培养至6-8d时，第一次发根，且开始长出新叶片；培养至14-16d时，基部长出若干不定根，且株高达1.8-2.2cm；生根率100％。作为本发明的优选方式之一，所述步骤(3)中，培养条件具体为：培养温度25℃，光照时间15h/d，光照强度1750lx。本发明相比现有技术的优点在于：本发明采用藤三七带腋芽茎段作为外植体直接诱导生根，缩短了利用叶芽为外植体时促使萌发的时间，缩短了育苗周期，还最大限度地保持了亲本的优良性状；此外，本发明所培育的藤三七还同时具有发根早、生根快的特点；当培养至6-8d时，其第一次发根，且开始长出新叶片；培养至14-16d时，其基部长出若干不定根，正式生根，且根较长，毛根多；经试验证明，本发明植株的生根率达100％，且上部长势好，育苗成本大大降低。附图说明图1是实施例1中藤三七的的生根过程图(图中，a为第1天的观察结果，b为第7天的观察结果，c、d为第15天后的观察结果)。具体实施方式下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。实施例1本实施例的一种藤三七的组织培养生根方法，包括如下具体步骤：(1)外植体的预处理：采摘新鲜的藤三七带腋芽茎段作为外植体，并采用洗衣粉冲洗1min；接着，流水冲洗2h，直至藤三七带腋芽茎段的外表面无残留污垢；最后，将其置于超净工作台中，并使用75％酒精浸泡30s；浸泡结束后，无菌水冲洗3次，备用；(2)外植体的消毒：将预处理后的外植体，采用1％次氯酸钠溶液浸泡4min，再用无菌水冲洗5次，即得接种所需的无菌外植体；(3)直接生根培养：无菌条件下，将步骤(2)中所得的无菌外植体切成1cm长；接着，再将其形态学下端直接插入带有生根培养基的培养瓶中进行直接生根培养，培养过程如图1所示；当培养至7d时，第一次发根，且开始长出新叶片；当培养至15d时，基部长出若干不定根，且株高达2cm；生根率100％；其中，生根培养基的配方具体为：1/2ms+25g/l蔗糖+7g/l琼脂+0.8mg/liba，ph5.8；培养条件为：培养温度25℃，光照时间15h/d，光照强度1750lx。实施例2本实施例的一种藤三七的组织培养生根方法，包括如下具体步骤：(1)外植体的预处理：采摘新鲜的藤三七带腋芽茎段作为外植体，并采用洗衣粉冲洗0.8min；接着，流水冲洗1.8h，直至藤三七带腋芽茎段的外表面无残留污垢；最后，将其置于超净工作台中，并使用75％酒精浸泡28s；浸泡结束后，无菌水冲洗2次，备用；(2)外植体的消毒：将预处理后的外植体，采用1％次氯酸钠溶液浸泡3.8min，再用无菌水冲洗4次，即得接种所需的无菌外植体；(3)直接生根培养：无菌条件下，将步骤(2)中所得的无菌外植体切成0.8cm长；接着，再将其形态学下端直接插入带有生根培养基的培养瓶中进行直接生根培养；当培养至6d时，第一次发根，且开始长出新叶片；当培养至14d时，基部长出若干不定根，且株高达1.8cm；生根率100％；其中，生根培养基的配方具体为：1/2ms+25g/l蔗糖+7g/l琼脂+0.8mg/liba，ph5.8；培养条件为：培养温度24℃，光照时间14h/d，光照强度1500lx。实施例3本实施例的一种藤三七的组织培养生根方法，包括如下具体步骤：(1)外植体的预处理：采摘新鲜的藤三七带腋芽茎段作为外植体，并采用洗衣粉冲洗1.2min；接着，流水冲洗2.2h，直至藤三七带腋芽茎段的外表面无残留污垢；最后，将其置于超净工作台中，并使用75％酒精浸泡32s；浸泡结束后，无菌水冲洗4次，备用；(2)外植体的消毒：将预处理后的外植体，采用1％次氯酸钠溶液浸泡4.2min，再用无菌水冲洗6次，即得接种所需的无菌外植体；(3)直接生根培养：无菌条件下，将步骤(2)中所得的无菌外植体切成1.2cm长；接着，再将其形态学下端直接插入带有生根培养基的培养瓶中进行直接生根培养；当培养至8d时，第一次发根，且开始长出新叶片；当培养至16d时，基部长出若干不定根，且株高达2.2cm；生根率100％；其中，生根培养基的配方具体为：1/2ms+25g/l蔗糖+7g/l琼脂+0.8mg/liba，ph5.8；培养条件为：培养温度26℃，光照时间16h/d，光照强度2000lx。上述实施例1-3的有益之处在于：采用藤三七带腋芽茎段作为外植体直接诱导生根，缩短了利用叶芽为外植体时促使萌发的时间，缩短了育苗周期，还最大限度地保持了亲本的优良性状；此外，上述实施例所培育的藤三七还同时具有发根早、生根快的特点；当培养至6-8d时，其第一次发根，且开始长出新叶片；培养至14-16d时，其基部长出若干不定根，正式生根，且根较长，毛根多；经试验证明，采用上述实施例方法培育出的藤三七的生根率达100％，且上部长势好。实施例4本实施例用以说明不同浓度的激素对藤三七生根的影响(生根培养方法同上述实施例1-3，实验在“1/2ms培养基”的基础上添加不同浓度的激素进行)，结果见表1；表1不同浓度的iba对藤三七生根的影响iba(mg/l)生根率(％)0.2270.4420.6710.7910.81000.9871.072结果表明：1/2ms+25g/l蔗糖+7g/l琼脂+0.8mg/liba培养基条件下，藤三七的生根效果最好，生根率达100％。其中，ms培养基的配方见表2。表2ms培养基配方注：1/2ms培养基为ms培养基大量元素减半即可。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12