一种营养液及其在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及组培种植技术领域，具体涉及一种营养液及其在铁皮石斛茎段组培育 苗中的应用方法。
【背景技术】
[0002] 铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛属多年生附生 草本植物，具有滋阴补肾、润肺生津、抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力等功效，为我国传统 名贵中药材。道家医学经典《道藏》将铁皮石斛列为"中华九大仙草"之首，民间称其为"救 命仙草"。
[0003] 铁皮石斛是我国的特有珍稀濒危植物，野生分布于我国广东、云南、贵州、广西、浙 江、四川等地。对生境要求特殊，生长于高山峻岭、悬崖峭壁及岩石缝隙之间，铁皮石斛的种 子极小、无胚乳，自然条件下需与某些真菌共生才能萌发，很难用实生苗栽培，而传统的分 株、扦插等方式的繁殖率极低，加上人们长期掠夺性、毁灭性的采挖与无计划的消耗，破坏 了它们赖以生存的自然生态环境，致使其野生资源严重枯竭，被列为国家二级重点保护植 物。
[0004] 然而，目前铁皮石斛的市场需求量不断增长，供求矛盾进一步增大，将铁皮石斛野 生变家种，利用快繁技术大规模地人工栽培以满足市场需要就成了当务之急。近20年来， 我国开展了铁皮石斛人工驯化栽培研宄，取得了一定的成果。但伴随着产业化的迅猛发展， 我国的石斛种植还存在着诸多的突出问题，主要表现在：（1)种苗良莠不齐，组培苗分离， 退化。由于铁皮石斛生产繁育基本依赖于种子扩繁的组培苗，采用种子做外植体生产的铁 皮石斛试管苗，由于外植体材料遗传背景差异和培养环境的影响，试管苗植株形态特征差 异明显，且在组培室中繁育后，品种分离、退化现象严重，而本发明采用茎段作外植体生产 的试管苗，遗传背景相同，植株形态特征一致，保持了种源稳定性。（2)组织培养周期长，技 术尚需进一步突破。传统的种子组培快繁法需要经历播种、诱导原球茎、原球茎增殖、生根 壮苗等步骤，时间长达1年以上，其中播种至原球茎耗时长达5个月以上，而采用传统的茎 段无性繁殖法，则可以省去播种到原球茎的步骤，直接茎段诱导原球茎，缩短了组培扩繁的 时间。本发明通过改良培养基配方结合微波刺激法，可加快茎段诱导原球茎的进程，进一步 缩短了生产周期，解决产业化发展对种苗的大批量需求。（3)栽培时间长，成活率低。铁皮 石斛瓶苗移栽成活率通常只有60%，栽培半年以上才可移栽至苗床中。若能通过改良的营 养液，使铁皮石斛种苗直接在基质苗床中进行驯化炼苗，就可以节约炼苗时间和成产成本。
【发明内容】
[0005] 为了克服上述技术缺陷，本发明提供了一种营养液及其在铁皮石斛茎段组培育苗 中的应用方法。本发明能保持母本优质性状，加快繁殖速度，可以解决实际生产中种苗良莠 不齐，分离退化等问题，并提高种苗成活率及质量，有效防止病虫害。
[0006] 本发明的一种营养液，由以下成分组成：500mg/L尿素、650mg/L硝酸钾、370mg/L 硝酸H590mg/L磷酸二氢钾、320mg/L硫酸镁、85mg/L乙二胺四乙酸二钠、60mg/L硫酸亚 铁、35mg/L硫酸猛、20mg/L硼酸、8mg/L硫酸锌、3. 6mg/L硫酸铜、I. 9mg/L钼酸钠、166mg/L 三十烷醇、26mg/L萘乙酸、42g/L壳寡糖、50g/L嘧菌酯、叶片超声液和IL纯水，EC值控制在 0.6左右，酸碱度pH值调至6.0 ;所述叶片超声液为15g/L铁皮石斛叶、5g/L金钱草、5g/L平 车前、7g/L侧柏叶、10g/L茯苓、12g/L威灵仙粉碎后，加入0. 8g/L竹叶抗氧化物AOB，648W 超声处理30min所得溶液，即用即加。
[0007] 本发明还提供了一种将本发明的上述营养液在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用 方法，该方法按照如下步骤进行：
[0008] (1)茎段消毒灭菌：选取铁皮石斛茎段，剥去叶片及叶鞘，经清水冲洗后，依次用 75%酒精、0. 1%氯化汞溶液进行表面消毒，并用无菌水冲洗，无菌滤纸吸干水份；
[0009] (2)原球茎诱导及增殖：将前述步骤（1)中处理后的茎段的芽点下方连带茎段部 位一齐取出，接种于原球茎增殖培养基中；
[0010] (3)原球茎分化：将前述步骤（2)得到的原球茎接种于分化培养基中；
[0011] (4)生根壮苗培养：将前述步骤（3)中得到的分化出丛生苗的原球茎转瓶于生根 培养基中；
[0012] (5)出瓶移栽：将前述步骤（4)中得到的生根的试管苗移入水苔基质中，1个月后 移入苗床基质中栽培，喷施所述营养液。
[0013] 优选的，所述步骤（2)中，采用微波法诱导原球茎：将所述步骤（2)中的所述接 种于原球茎增殖培养基中的所述原球茎置于4°C环境中，暗培养3h，微波处理2min，功率 500W，再置于冰块中lh，然后转移至25°C环境中，光照强度2000Lx下培养。
[0014] 优选的，所述步骤（2)中的所述芽点下方连带茎段部位一齐取出采用斜切方式。
[0015] 优选的，所述步骤（2)中的所述原球茎诱导及增殖培养基由以下成分组成：1/2MS 基本培养基、0.51^/1萘乙酸、1.51!^/1苯基噻二唑基脲、10%芋头汁、30%蔗糖和8 8/1琼 脂。
[0016] 优选的，所述步骤（3)中的所述分化培养基由以下成分组成：1/2MS基本培养基、 0. 51^/1萘乙酸、2.01!^/16-苄氨基腺嘌呤、10%芋头汁、30%蔗糖和88/1琼脂。
[0017] 优选的，所述步骤（4)中的所述生根培养基由以下成分组成：1/2MS基本培养基、 1. Omg/L萘乙酸、2. Omg/L 6-苄氨基腺嘌呤、10%香蕉汁、30%蔗糖和8g/L琼脂。
[0018] 优选的，所述步骤（5)中的所述营养液的喷施方法如下：施肥频率为一周一次，施 肥浓度为0. 3%，每株用量15mL。
[0019] 本发明还提供了一种能应用于上述方法中的原球茎诱导及增殖培养基，由以下成 分组成：1/2MS基本培养基、0. 5mg/L萘乙酸、I. 5mg/L苯基噻二唑基脲、10%芋头汁、30%蔗 糖和8g/L琼脂。
[0020] 本发明还提供了一种能应用于上述方法中的分化培养基，由以下成分组成：1/2MS 基本培养基、0.51^/1萘乙酸、2.01!^/16-苄氨基腺嘌呤、10%芋头汁、30%蔗糖和8 8/1琼 脂。
[0021] 本发明采用茎段作外植体生产的试管苗，遗传背景相同，植株形态特征一致，保持 了种源稳定性。本发明通过改良培养基配方结合微波刺激法，能在短时间内诱导产生大量 原球茎，提高增殖系数大幅度提高，加快茎段诱导原球茎的进程，进一步缩短了生产周期， 解决产业化发展对种苗的大批量需求。本发明通过改良营养液配方，使得成活率提高至 97%以