L NM培养基中，在光照强度为1500LX，光照时间为12h/天，温度为26°C的培养室中培养45天，腋芽平均伸长至5cm ；
(3)生根培养:将腋芽剪下，接种到1/2MS+ 0.lmg/L NAA培养基中，在光照强度为3000LX，光照时间为12h/天，温度为26°C的培养室中培养40天，得到高度平均为1cm的黑果枸杞组培苗，根长平均为1cm ;
(4)继代培养:以黑果枸杞组培苗为母体，将其切割成带3个芽点的茎段或茎尖，接种到1/2MS + 0.lmg/L NAA培养基中，进行继代，同时进行生根培养，在光照强度为3000LX，光照时间为12h/天，温度为26°C的培养室中培养32天，得到高度平均为8cm的黑果枸杞完整植株；
(5)炼苗移栽:将得到的黑果枸杞完整植株在自然光下闭瓶锻炼8天，在室温下开盖炼苗5天，取出单苗洗净根部的培养基，用1000倍多菌灵溶液对根消毒5min，晾干栽入用0.1%高锰酸钾溶液消毒后的基质中，当小苗长出的新根系平均长达5cm且长出侧根时移栽到土壤中，其中基质为珍珠岩和泥炭混合，两者重量比为1:2.5。
[0020]移栽到土壤中后培养5周后见到新叶开始生长，表明移栽的黑果枸杞成活，再过2周调查黑果枸杞的成活率，成活率平均为75%。
[0021]实施例3:—种黑果枸杞的快速组培方法，它包括以下步骤:
(1)外植体灭菌:取成年黑果枸杞枝条上的当年生幼嫩茎段和茎尖用流水冲洗4min，75%酒精灭菌5s，无菌水清洗2遍，0.1%氯化汞溶液灭菌14min，无菌水清洗5遍；
(2)诱导培养:将灭菌后的嫩茎段和茎尖接种到MS+ 0.5mg/L 6-BA + 0.lmg/L NM培养基中，在光照强度为1500LX，光照时间为14h/天，温度为25°C的培养室中培养35天，腋芽平均伸长至4cm ;
(3)生根培养:将腋芽剪下，接种到1/2MS+ 0.lmg/L NAA培养基中，在光照强度为3000LX，光照时间为14h/天，温度为25°C的培养室中培养31天，得到高度平均为7cm的黑果枸杞组培苗，根长平均为7cm ;
(4)继代培养:以黑果枸杞组培苗为母体，将其切割成带2个芽点的茎段或茎尖，接种到1/2MS + 0.lmg/L NAA培养基中，进行继代，同时进行生根培养，在光照强度为3000LX，光照时间为14h/天，温度为25°C的培养室中培养30天，得到平均高度为7.2cm的黑果枸杞完整植株；
(5)炼苗移栽:将得到的黑果枸杞完整植株在自然光下闭瓶锻炼6天，在室温下开盖炼苗4天，取出单苗洗净根部的培养基，用1000倍多菌灵溶液对根消毒4min，晾干栽入用0.1%高锰酸钾溶液消毒后的基质中，当小苗长出的新根系平均长达4cm且长出侧根时移栽到土壤中，其中基质为珍珠岩和泥炭混合，两者重量比为1:2.0。
[0022]移栽到土壤中后培养4周后见到新叶开始生长，表明移栽的黑果枸杞成活，再过2周调查黑果枸杞的成活率，成活率平均为75%。
[0023]实施例4:一种黑果枸杞的快速组培方法，它包括以下步骤:
(1)外植体灭菌:取成年黑果枸杞枝条上的当年生幼嫩茎段和茎尖用流水冲洗4min，75%酒精灭菌6s，无菌水清洗3遍，0.1%氯化汞溶液灭菌16min，无菌水清洗5遍；
(2)诱导培养:将灭菌后的嫩茎段和茎尖接种到MS+ 0.5mg/L 6-BA + 0.lmg/L NM培养基中，在光照强度为1500LX，光照时间为15h/天，温度为24°C的培养室中培养40天，腋芽平均伸长至4.5cm ；
(3)生根培养:将腋芽剪下，接种到1/2MS+ 0.lmg/L NAA培养基中，在光照强度为3000LX，光照时间为15h/天，温度为24°C的培养室中培养35天，得到高度平均为8cm的黑果枸杞组培苗，根长平均为8.5cm ;
(4)继代培养:以黑果枸杞组培苗为母体，将其切割成带3个芽点的茎段或茎尖，接种到1/2MS + 0.lmg/L NAA培养基中，进行继代，同时进行生根培养，在光照强度为3000LX，光照时间为15h/天，温度为24°C的培养室中培养30天，得平均到高度为7.5cm的黑果枸杞完整植株；
(5)炼苗移栽:将得到的黑果枸杞完整植株在自然光下闭瓶锻炼8天，在室温下开盖炼苗5天，取出单苗洗净根部的培养基，用1000倍多菌灵溶液对根消毒5min，晾干栽入用0.1%高锰酸钾溶液消毒后的基质中，当小苗长出的新根系平均长达5cm且长出侧根时移栽到土壤中，其中基质为珍珠岩和泥炭混合，两者重量比为1:2.2。
[0024]移栽到土壤中后培养5周后见到新叶开始生长，表明移栽的黑果枸杞成活，再过2周调查黑果枸杞的成活率，成活率平均为75%。
[0025]从实施例1?4得出:本发明利用组织培养技术得到黑果枸杞组培苗，再通过直接诱导幼嫩茎段和茎尖腋芽生长，腋芽生根培养，切割成茎段或茎尖培养繁殖得到黑果枸杞的完整植株，炼苗移栽后的黑果枸杞成活率达到75%。
【主权项】
1.一种黑果枸杞的快速组培方法，其特征在于，它包括以下步骤: (1)外植体灭菌:取成年黑果枸杞枝条上的当年生幼嫩茎段和茎尖用流水冲洗3?5min，75%酒精灭菌4?7s，无菌水清洗2?3遍，0.1%氯化未溶液灭菌13?17min，无菌水清洗4?6遍； (2)诱导培养:将灭菌后的嫩茎段和茎尖接种到诱导培养基中，在培养室中培养25?45天腋芽伸长至3?5cm ； (3)生根培养:将腋芽剪下，接种到生根培养基中，25?40天得到长为6?1cm的黑果枸紀组培苗，根长为5?1cm ； (4)继代培养:以黑果枸杞组培苗为母体，将其切割成带2?3个芽点的茎段或茎尖，接种到继代培养基中进行继代，同时进行生根培养，在培养室中培养29?32天得到高度为6.8?8.0cm的黑果枸紀完整植株； (5)炼苗移栽:将得到的黑果枸杞完整植株在自然光下闭瓶锻炼5?8天，在室温下开盖炼苗3?5天，取出单苗洗净根部的培养基，用1000倍多菌灵溶液对根消毒3?5min，晾干栽入基质中，当小苗长出的新根系长达3?5cm且长出侧根时移栽到土壤中。
2.根据权利要求1所述的一种黑果枸杞的快速组培方法，其特征在于，步骤(2)中所述的培养基为 MS + 0.5mg/L 6-BA + 0.lmg/L NAA0
3.根据权利要求1所述的一种黑果枸杞的快速组培方法，其特征在于，步骤(2)中所述的培养室内条件为:光照强度1500LX，光照时间12?16h/天，温度24?26V。
4.根据权利要求1所述的一种黑果枸杞的快速组培方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中所述的培养基为1/2MS + 0.lmg/L NAA。
5.根据权利要求1所述的一种黑果枸杞的快速组培方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中所述的培养室内条件:光照强度3000LX，光照时间12?16h/天，温度24?26V。
6.根据权利要求1所述的一种黑果枸杞的快速组培方法，其特征在于，步骤(5)中所述的基质为珍珠岩和泥炭混合，两者重量比为1:1.5?2.5。
7.根据权利要求1所述的一种黑果枸杞的快速组培方法，其特征在于，步骤(5)中所述的基质用0.1%高锰酸钾溶液消毒。
【专利摘要】本发明公开了一种黑果枸杞的快速组培方法，属于植物组织培养技术领域，它包括外植体灭菌，诱导培养，生根培养，继代培养和炼苗移栽的步骤。本发明中继代培养过程中可同时进行生根培养，组培效率高，操作简便，周期短，能快速获得完整植株；组培过程不受环境因素的影响。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104719165
【申请号】CN201510143106
【发明人】丁龙梅, 栗丹, 晏强, 罗丽君
【申请人】四川禾木本业农林科技有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年3月30日