一种杀二化螟金龟子绿僵菌制剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种金龟子绿僵菌菌株的新应用，具体涉及一种杀二化螟金龟子绿僵 菌制剂及其应用，属于生物农药领域。 技术背景
[0002] 二化螟是水稻常发性蛀茎害虫，广泛分布于全国各稻区。我国一般发生年份，二化 螟造成水稻减产5%~10%，严重时高达20%~30%，严重的威胁着我国粮食生产。目前，主要施 用广谱性化学农药控制二化螟，不仅直接影响人体健康和水产养殖业的安全，而且由于二 化螟产生抗药性和化学农药大量杀伤二化螟天敌，破坏稻田生态平衡，严重削弱田间自然 控制能力，容易导致二化螟的再猖獗、难以控制。故采用安全的微生物制剂替代化学农药成 为防治二化螟控制的重要发展方向。
[0003]昆虫病原真菌是最重要的杀虫微生物类群，在自然条件下约70%的昆虫病害是 真菌引起的。杀虫真菌具有较强的扩散能力，容易形成流行病，有助于害虫的持续控制；是 唯一具有触杀特性的病原微生物，其致病机制复杂，因而尽管它是最早应用于害虫防治的 微生物，但是仍未发现有抗性害虫产生，对解决害虫的抗药性问题极具潜力。因此，真菌杀 虫剂作为重要的替代农药，近年来受到广泛关注。绿僵菌（Metarhizium)是最早用于防治 害虫的昆虫病原真菌之一，能感染全世界约有200多种昆虫。利用它来防治害虫的研宄与 实践己愈百年，主要应用于防治蝗虫、地下害虫、天牛等，但利用真菌控制二化螟尚未见到 相关报道。金龟子绿僵菌CQMa421是一株从自然感染的稻纵卷叶螟僵虫上分离筛选出的 一株生产性状好、对稻纵卷叶螟具有高毒力杀虫真菌，己在中国专利CN102212483中公开， 该菌株于2011年02月25日，在北京市朝阳区北辰西路1号院3号、中国科学院微生物研 宄所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏编号：CGMCC NO. 4609,分类命名：金龟子绿僵菌小抱变种Metarhizium anisopliae var.anisopliae?该 菌株及其制剂对二化螟的毒力与防治效果未见报道。
[0004]可湿性粉剂是一种最基本的农药剂型，可制成悬浊液，进行喷雾。杀虫真菌可湿性 粉剂是由真菌孢子粉中加入一定量的表面活性剂和填充料，通过过筛制成。由于真菌孢子 活性受润湿剂的影响，制剂中往往减少表面活性剂的用量，导致湿润分散效果差，同时产品 贮存期仍较短，很少超过12个月。 目前国内外，分离得到能侵染二化螟的球抱白僵、黄绿绿僵菌菌株，但尚未报道侵染二 化螟的高毒力金龟子绿僵菌。因湿润分散特性、贮存稳定性的问题和田间防效受紫外照射 影响大，杀虫真菌可湿性粉剂虽有登记注册，但一直没有大量应用。因此，筛选驯化高毒力 菌株和研制湿润分散特性良好、防效稳定的真菌杀虫剂可湿性粉剂，延长其贮存稳定性，从 而促进真菌杀虫剂在防治二化螟中的应用，有利于减少水稻生产中化学农药的用量。
【发明内容】
[0005]本发明的第一目的在于提供一种金龟子绿僵菌菌株在防治二化螟中的应用。
[0006] 本发明第二目的在于提供一种金龟子绿僵菌制剂，该制剂耐紫外照射、保存期长、 防效好。
[0007] 本发明第三目的在于提供一种增强金龟子绿僵菌毒力的方法。
[0008] 本发明目的是通过如下技术方案实现的： 金龟子绿僵菌CQMa421菌株在制备防治二化螟的药剂中的应用，该菌株对二化螟具有 侵染作用，致死率可达到46. 5%。
[0009] 不同的绿僵菌菌株具有特定的寄主，如公开报道：金龟子绿僵菌FI-1045菌株能 侵染甘鹿赂螬（Anoplophora glabripennis)，金龟子绿僵菌A ESALQ818菌株能侵染埃及 斑蚊（Aedes aegypti)，金龟子绿僵菌EAMb 09/01-Su菌株能侵染地中海果实幡，金龟子 绿僵菌TORL526菌株能侵染萝卜蚜（Lipaphis erysimi)，金龟子绿僵菌M2菌株能侵染螺 旋粉虱（Aleurodicus dispersus Russell)，金龟子绿僵菌ICIPE-30菌株能侵染冈比亚按 蚊（anopheles gambiae)，金龟子绿僵菌ESC 1菌株能侵染白蚁，金龟子绿僵菌ATCC62176 能侵染甜菜根蛆（sugarbeet root maggot)，金龟子绿僵菌M105菌株能侵染幢虫，金龟子 绿僵菌广谱菌株F-52能侵染赂螬（Anoplophora glabripennis)、核桃象甲、光滑足距小蠹 (Xylosandrus germanus)，金龟子绿僵菌广谱菌株549能侵染烟草天蛾（Manduca sexta)、 埃及斑蚊（Aedes aegypti)，罗伯茨绿僵菌广谱菌株ARSEF 23能侵染蝗虫、鳞翅目幼虫、甲 虫等。
[0010] 优选地，上述防治二化螟的药剂由绿僵菌CQMa421干孢子粉44-60%、硅藻土 30-40%、纳米硅0.5-1%、羧甲基纤维素钠3-5%、吐温-80 3-5%和0P-10 3-5%组成，均以重 量百分比。
[0011] -种金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：它是由娃藻土 30-40%、纳米娃0. 5-1%、羧甲 基纤维素钠3-5%、吐温-80 3-5%、0P-10 3-5%和绿僵菌CQMa421干孢子粉44-60%组成，均 以重量百分比。
[0012] 上述各组分均为本领域明确的组分，吐温-80为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯、 简称聚山梨酯-80, 0P-10为烷基酚聚氧乙烯醚，绿僵菌CQMa421在中国专利CN102212483 中公开、该菌株于2011年02月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (CGMCC)保藏、保藏编号：CGMCC NO. 4609 ;纳米硅为粒径为纳米级的硅等。
[0013] 上述吐温-80和0P-10优选纯度>95%的吐温-80和0P-10;上述羧甲基纤维素钠 (CMC)优选纯度大于95% ;上述硅藻土优选为白色至浅褐色疏松粉末，纯度大于85%，含水量 小于1% ;上述纳米硅优选为粒径小于50nm。上述绿僵菌CQMa421干孢子粉为纯孢子粉，含 孢量多150亿孢子/克，含水量< 5%;以上均以质量百分含量计。
[0014] 上述金龟子绿僵菌制剂中纳米硅为惰性材料，能够附着在真菌孢子表面，有效阻 隔了制剂中高浓度（3-5wt%)吐温-80和0P-10的不良影响，有效保证了孢子的生物活性。
[0015] 进一步优选地，本发明金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：它是由娃藻土 35-40%、纳 米硅0. 5-0. 8%、羧甲基纤维素钠3-5%、吐温-80 3-5%、0P-10 3-5%和绿僵菌CQMa421干孢 子粉45-55%组成，均以重量百分比。
[0016] 上述绿僵菌CQMa421干孢子粉优选采用强毒力金龟子绿僵菌CQMa421孢子粉，所 述强毒力金龟子绿僵菌CQMa421孢子粉由以下方法得到：将金龟子绿僵菌CQMa421接种于 3-4龄二化螟幼虫，接种后在28°C、湿度50-70%的条件下饲养，将最先感病死亡的二化螟僵 虫，放入28°C、湿度为50-70%培养箱中保湿培养3-5天，使其昆虫表面生长出新鲜孢子，如 上所述循环接种14次得到驯化后的金龟子绿僵菌CQMa421新鲜孢子；在无菌条件下，用接 种环挑取驯化后新鲜孢子在含有100微克/毫升氨苄青霉素的1/4SDA培养基平板上划线， 将划线好的培养皿翻转放置于28°C恒温箱中培养；3- 4日后挑选长出的典型而无杂菌的 菌落，在菌落边缘用移菌针挑取带有菌丝的培养基一小块，转入试管斜面培养基中央，28°C 恒温培养10-15天得到强毒力的金龟子绿僵菌CQMa421母种，将CQMa421菌株母种接种在 1/4SDA平板上，28°C培养15天，收集成熟分生孢子制得绿僵菌CQMa421干孢子粉。
[0017] 上述金龟子绿僵菌制剂的制备方法，是先将绿僵菌CQMa421干孢子粉和纳米硅在 混合机中混匀，再依次加入硅藻土、羧甲基纤维素钠、吐温-80和0P-10,边加入边搅拌，直 至各组分完全混合均匀制得。
[0018] 一种增强金龟子绿僵菌毒力的方法，其特征在于：将金龟子绿僵菌CQMa421接种 于3-4龄二化螟幼虫，接种后在28°C、湿度50-70%的条件下饲养，将最先感病死亡的二化 螟僵虫，放入28°C、湿度为50-70%培养箱中保湿培养3-5天，使其昆虫表面生长出新鲜孢 子，如上所述循环接种14次得到驯化后的金龟子绿僵菌CQMa421新鲜孢子；在无菌条件下， 用接种环挑取驯化后新鲜孢子在含有100微克/毫升氨节青霉素的1/4SDA培养基平板上 划线，将划线好的培