[0079] 所述容器可为如前文所定义的。
[0080] 根据本发明的再进一步的其他方面提供了包含如前文所定义的矿物成核剂和低 温保存剂的水溶液、悬浮液、分散液、乳液或胶体。
[0081] 所述低温保存剂可为如前文所定义的。
【附图说明】
[0082] 现在将仅W非限制性的方式描述本发明的多种实施方式，参考W下实施例和附 图，其中：
[008引图1示出了在rC/min冷却变化（ramp)期间具有和不具有成核剂BCS-CRM376/1化tash长石的情况下，填充有纯水的吸管作为温度的函数冷冻的分数（菱形为具有 长石的吸管，方形为不具有长石的吸管）；
[0084] 图2示出了在rC/min冷却变化期间具有和不具有成核剂BCS-CRM376/1化tash 长石的情况下，填充有10%v/v己二醇的吸管作为温度的函数冷冻的分数（菱形为具有长 石的吸管，方形为不具有长石的吸管。黑线代表冷冻液体的烙融温度）；
[0085] 图3示出了在利用缓慢冷却方法进行低温保存之后，藻酸盐中包封的多细胞肝脏 球体的活力数据，（a)不具有成核剂，化）具有胆固醇作为标准成核剂，（C)具有长石作为粉 尘（直径为1ym至5ym)和（d)具有长石作为微珠（直径为6mm) ;W及
[0086] 图4示出了（a)用SnoMax⑩处理的冰洪淋，化）未处理的冰洪淋，（C)用K-长石 处理的冰洪淋和（d)与S个样品相同放大率的微米。小刻度间隔10ym。
【具体实施方式】
[0087] 连施例1 -在冷冻管中的成核试輪
[0088] 试验在冷冻管（ThermoFisher)中进行，冷冻管放置在MF2000原型电力驱动控制 速率的冷冻机（AsymptoteLtd,Cambridge,UK)中。W2°C/分钟的速率将小瓶从室温冷却 降至4°c，然后在4°c保持5分钟，然后rc/分钟冷却直至成核发生。通过每个小瓶中的 T-型热电偶来记录成核和在烙化（化Sion)放热时的温度。表1示出了放置在不同水溶液 中的一系列长石材料的平均成核温度。
[0089] 表 1
[0090]
[00川 连施例2 -在吸管中的成核试輪
[0092] 试验在吸管中进行W低温保存精子细胞。该吸管一端含有PVA(聚己酸己締醋） 其被两个棉'塞'封堵在中间。将PVA从吸管排空并用粉末形式的矿物成核剂代替。将吸 管置于EF600电力驱动的控制速率的冷冻机（AsymptoteLtd,Cambridge,UK)中并W2°C/ 分钟的速率将其从室温冷却降至4°c，在然后4°c保持5分钟然后wrc/分钟冷却直至成 核发生。通过位于每个吸管中相对成核剂的一端处的T-型热电偶来记录成核和在烙化放 热时的温度。
[0093] 图1示出了在rC/min冷却变化期间具有和不具有成核剂BCS-CRM376/1化tash 长石的情况下，填充有纯水的吸管作为温度的函数冷冻的分数（藍色菱形为具有长石的吸 管，红色方形为不具有长石的吸管）。在该种情况下，通过校准吸管的内部温度和EF600冷 冻机的指示温度之间的关系，并记录在冷冻点处指示的温度来确定冷冻温度。表2示出了 具有和不具有所述成核剂的平均成核温度。
[0094]表2
[0095]
[0096] 用己二醇代替纯水重复进行试验。图2示出了在rC/min冷却变化期间具有和不 具有成核剂BCS-CRM376/1化tash长石的情况下，填充有10%v/v己二醇的吸管作为温度 的函数冷冻的分数（藍色菱形为具有长石的吸管，红色方形为不具有长石的吸管。）黑线代 表冷冻液体的烙融温度。如上文所述确定冷冻温度。
[0097]连施例3-在溶液中的稳定忡
[009引如实施例1中制备并测试长石的不同制品，然后将其置于消费级的冰箱中两周， 最后利用相同的试验方法再次测试。表3示出了不同长石溶液的第一次和第二次试验的平 均成核温度。
[0099]表 3
[0100]
[01 0引连施例4-活力撒据
[0103] 在解冻后72小时进行试验W确定包封在藻酸盐中的多细胞肝脏球体的复原。利 用代谢必需的染料（巧光素二己酸醋和舰化丙晚）来测量活细胞数，W12%DMSO作为低温 保存剂利用缓慢冷却方法进行低温保存。在W下条件冷却样品；(a)不具有成核剂，化）具 有胆固醇作为标准成核剂，（C)具有长石作为粉尘（直径为1ym至5ym)和（d)具有长石 作为微珠（直径为6mm)。图3中不出了结果。
[0104]连施例5-冰巧淋晶体尺寸
[01化]为了证明矿物粉末用于减小液体食品中晶体尺寸的有效性，利用家庭冰洪淋机和 可商购的香草味哈根达斯Ofaagen-DazE)冰洪淋来进行试验。使用500ml纯的融化的冰洪 淋、与3颗融解的Snomax?:混合的500ml融化的冰洪淋W及与分散在10ml水中的1. 2g粉末状K-长石混合的500ml融化的冰洪淋来进行试验。在大约15°C的初始温度下将所有 =个样品放置于冰洪淋机中并打开冰洪淋机。在恒定揽拌下，冰洪淋机将冰洪淋冷却至大 约-2(TC。然后，将冰洪淋快速转移至塑料容器中并置于-18C的冷冻机中，并在其中放置 36小时。在所有时间点密切关注W防止冰洪淋样品交叉污染。
[0106] 在该36小时的时间段之后，将冰洪淋从冷冻机复原并将少量冰洪淋置于预 冷至-35°C的两片显微镜载玻片之间。然后将该载玻片放置在装配有液氮冷却的冷台 (coldstage)的透射式显微镜上。图4示出了每个冰洪淋样品中的冰晶的典型图像。未处 理的冰洪淋中形成的冰晶的平均尺寸确定为27 +11ym。发现用Snomax饭处理的冰洪淋 的平均尺寸为12 + 3ym，用K-长石处理的冰洪淋的平均尺寸为14 + 5ym。
【主权项】
1. 用于冷冻生物实体或制剂的含水质的方法，包括： (A) 使所述含水质与矿物成核剂在容器中接触；以及 (B) 冷却所述含水质，以使所述矿物成核剂起到促进冰的非自发形成的作用。2. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述矿物成核剂选自由长石、硅石、霞石、透锂长 石、白榴石、方钠石、钙霞石、方柱石、方沸石和沸石组成的组。3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述矿物成核剂为网硅酸盐。4. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述矿物成核剂为网铝硅酸盐。5. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述矿物成核剂为长石或似长石。6. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述矿物成核剂为长石。7. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述矿物为NaAlSi308和KAlSi308占 优势的长石。8. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述矿物为KAlSi308占优势的长石。9. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述矿物为CaAl2Si208和NaAlSi308 占优势的长石。10. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述矿物为NaAlSi308占优势的长 石。11. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述含水质为医用制剂的含水质。12. 根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述含水质为配方食品的含水质。13. 根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述含水质为生物实体的含水质。14. 根据权利要求13所述的方法，其中，所述生物实体为细胞或细胞团。15. 根据前述权利要求中任一项中所述的方法，其中，步骤（A)为： (A'）向所述容器加入所述含水质；以及 (A"）向所述容器加入离散形式的所述矿物成核剂。16. 根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中，所述矿物成核剂位于所述容器或 其部分的整个或部分表面中或表面上，以使所述矿物成核剂的活性成核位点有效暴露于所 述含水质并且步骤（A)为向所述容器加入所述含水质。17. 矿物作为成核剂在容器中冷冻生物实体或制剂的含水质时的用途。18. -种容器，在所述容器或其部分的整个或部分表面中或表面上具有矿物成核剂。19. 包含如前述权利要求中任一项中所定义的矿物成核剂和低温保存剂的水溶液、悬 浮液、分散液、乳液或胶体。
【专利摘要】本发明涉及利用矿物成核剂来冷冻容器中的生物实体或制剂的含水质的方法、该矿物作为成核剂的用途以及在其整个或部分表面上或表面中具有该矿物的容器。
【IPC分类】A01N1/02
【公开号】CN104918487
【申请号】CN201380064752
【发明人】本杰明·约翰·默里, 托马斯·弗朗西斯·惠列, 詹姆斯·阿特金森, 乔治·约翰·莫里斯
【申请人】利兹大学, 阿西姆普托特有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2013年12月9日
【公告号】CA2893102A1, EP2931033A1, US20150327538, WO2014091216A1