一种骨软骨移植物保存液及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种骨软骨移植物保存液及其制备方法。
【背景技术】
[0002]近年来，随着我国人们生活水平的提高以及体育运动的全面普及，关节软骨损伤患者显著增多。当前，关节软骨损伤的修复治疗还没有十分理想的方法。因此，关节软骨损伤修复治疗方法成为国际上亟待解决的医学难题。
[0003]由于关节软骨病损不能自然修复，若不进行有效治疗，最终导致骨性关节炎的发生，使关节功能丧失，严重者可致残疾。人工关节置换适合老年骨关节炎患者的治疗，然而对于青年关节软骨损伤患者却没有理想的治疗方法。
[0004]目前，临床上治疗关节损伤的方法有:微骨折法、组织工程治疗法、自体软骨细胞移植术、关节置换术、关节软骨移植法。在这些治疗方法中，同种异体骨软骨移植术能够较好的修复透明软骨损伤，减少了二次手术创伤，成为治疗修复关节缺损十分有前景的方法。然而，异体骨软骨组织的体外保存时间较短，限制了临床推广应用。因此，持续保持骨软骨移植物的活性和较高的软骨细胞存活率、延长体外保存时间成为当前急需解决的关键技术冋题。
[0005]异体骨软骨组织在体外保存过程中，随着保存时间的延长，软骨细胞凋亡增加，软骨组织细胞存活率和组织活性会明显降低，软骨基质降解增加，严重影响移植后组织的存活，限制了异体骨软骨组织的长期体外保存。同时，也影响了同种异体骨软骨移植术在临床上的广泛应用。
[0006]本发明通过对不同培养液保存条件的研宄探索，经过反复多次实验，最终研制出能够能有效提高骨软骨移植物保存效果、延长体外骨软骨移植物的保存时间的保存液，从而为建立软骨组织库，扩大同种异体骨软骨移植修复软骨缺损临床技术推广应用奠定良好基础，也将为给骨软骨缺损患者的快速康复带来福音。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于提供一种骨软骨移植物保存液及其制备方法，旨在解决现有的持续保持骨软骨移植物的活性和软骨细胞存活率低、体外保存时间短的问题。
[0008]本发明是这样实现的，一种骨软骨移植物保存液，该骨软骨移植物保存液每100ml骨软骨移植物保存液包括:葡萄糖80?125mmol、氨基酸0.1?2.0mmol、抗氧化剂0.2?2.0mmol、碱性成纤维细胞生长因子5?60nmol、无机盐I?120mmol、维生素I?9mmol、丙酮酸钠I?2mmol、青霉素50?70U、余为去离子水。
[0009]进一步，该骨软骨保存液的pH值为7.30?7.50 ;4°C保存。
[0010]进一步，该骨软骨保存液每100ml骨软骨移植物保存液含葡萄糖lOOmmol、氨基酸0.lmmol、抗氧化剂0.2mmol，碱性成纤维细胞生长因子25nmol、无机盐20mmol、维生素9mmol、丙酮酸钠lmmol、青霉素60U，余为去离子水。
[0011]进一步，该骨软骨保存液每100ml骨软骨移植物保存液含葡萄糖llOmmol、氨基酸0.5mmol、抗氧化剂1.3mmol，碱性成纤维细胞生长因子5nmol、无机盐80mmol、维生素4mmol、丙酮酸钠1.5mmol、青霉素50U、余为去离子水。
[0012]进一步，该骨软骨保存液每100ml骨软骨移植物保存液含葡萄糖125mmol、氨基酸1.0mmol、抗氧化剂2.0mmol，碱性成纤维细胞生长因子50nmol、无机盐120mmol、维生素lmmol、丙酮酸钠lmmol、青霉素55U、余为去离子水。
[0013]本发明的另一目的在于提供一种骨软骨移植物保存液的制备方法，该骨软骨移植物保存液的制备方法包括如下步骤:
[0014]步骤一，取葡萄糖、氨基酸、抗氧化剂、碱性成纤维细胞生长因子、无机盐、维生素、丙酮酸钠、青霉素和去离子水；
[0015]步骤二，将步骤一的原料配制成溶液，搅拌均匀，调节PH值至7.30?7.50，过滤除菌；
[0016]步骤三，把新鲜同种异体骨软骨移植物经无菌生理盐水清洗3-5次，放入已配制好骨软骨移植物保存液中浸泡；
[0017]步骤四，将步骤三骨软骨移植物保存液放入4°C保存。
[0018]本发明的另一目的在于提供一种骨软骨移植物保存液在骨软骨组织库的应用。
[0019]本发明的另一目的在于提供一种骨软骨移植物保存液在临床同种异体骨软骨移植术治疗关节软骨损伤的应用。
[0020]本发明提供的骨软骨移植物保存液及其制备方法，使软骨细胞存活率仍保持在一个较高水平，具有抵抗保存过程中软骨细胞衰老、抑制软骨细胞凋亡、保持软骨组织的良好生物学活性、减少软骨基质的降解、延长保存时间、提高骨软骨移植物保存效果的功效。本发明可帮助建立骨软骨组织库以及临床同种异体骨软骨移植术治疗关节软骨损伤的新技术推广。
【附图说明】
[0021]图1是本发明实施例提供的骨软骨移植物保存液的制备方法流程图；
[0022]图2是本发明实施例提供的骨软骨移植物保存液保存羊膝关节骨软骨组织在保存第I天、21天、35天时荧光双染色(EB/FDA)软骨细胞存活率示意图。
【具体实施方式】
[0023]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0024]下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
[0025]本发明实施例的骨软骨移植物保存液包括:每1000ml骨软骨移植物保存液含葡萄糖80?125mmol、氨基酸0.1?2.0mmo1、抗氧化剂0.2?2.0mmol、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 5?60nmol、无机盐I?120mmol、维生素I?9mmol、丙酬酸纳I?2mmol、青霉素50?70U、余为去离子水；
[0026]该骨软骨保存液的pH值为7.30?7.50，4°C保存。
[0027]如图1所示，本发明实施例的骨软骨移植物保存液的制备方法包括以下步骤:
[0028]SlOl:取葡萄糖、氨基酸、抗氧化剂、碱性成纤维细胞生长因子、无机盐、维生素、丙酮酸钠、青霉素和去离子水；
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