）并用黑布覆盖，将玻璃干燥器放置于冷柜中，温度设置为5°C，存放1天 后用于授粉。
[0035] 4)杂交前对母本进行去雄处理，选择母本植株上纵轴长度3. 1~3. 8厘米的未开 花花蕾，对花蕾进行去除雄蕊后套袋隔离，第2天进行杂交授粉；
[0036] 5)选择父本植株上纵轴长度3. 1~3. 8厘米的未开花花蕾进行套袋隔离，1~2 天后取花粉进行授粉。
[0037]6)于晴天上午8时，将诱导花蕾中的2n花粉取出，涂于母本去雄花蕾的柱头上，植 株结实后得到匕杂交种子；同时将父本没有经过诱导处理的n花粉涂于母本去雄花蕾的柱 头上，植株结实后得到对照二倍体匕杂交种子；
[0038] 7)将匕杂交种、对照二倍体？:杂交种按常规技术种植，成株后先根据第5~10片 真叶长度与宽度、叶面扭曲程度、主茎粗、株高、柱头直径、萼片长度与宽度，花瓣边缘褶皱 程度、气孔长度与宽度、花粉细胞直径筛选，在此基础上取花蕾子房内分生组织进行染色体 检测，体细胞染色体数目2n= 3x= 21的植株确定为三倍体植株；
[0039] 上述农艺性状为：叶片长度与宽度、叶面是否扭曲、茎粗、株高、冠幅、萼片长度与 宽度、柱头和花药大小、花瓣直径、花瓣边缘褶皱程度。
[0040] 农艺性状鉴定指，在Fi杂交群体中选择第5~10片真叶平均长度与宽度、主茎粗、 株高、冠幅、萼片长度与宽度、柱头直径、花药长度与宽度、花瓣直径其中有任意5项或5项 以上数值显著大于对照二倍体匕杂交种，同时叶面扭曲、花瓣边缘波状褶皱程度明显大于 对照二倍体？ :杂交种的植株。
[0041] 解剖学观察性状有气孔和花粉细胞，观察气孔方法为：将叶片背面表皮撕下，在显 微镜下测量表皮气孔大小；观察花粉细胞方法为：对成熟花粉进行染色，在显微镜镜下测 量成熟花粉细胞大小。解剖学中气孔鉴定指，用尖头镊子将叶片背面表皮撕下，放置于载玻 片上，滴1~2滴清水在20或40倍显微镜下用具有显微测微标尺的目镜测量气孔长与宽 度，选择长、宽度显著大于对照二倍体匕杂交种的植株。
[0042] 花粉细胞鉴定指：从开放花朵中取少量成熟花粉，放置于载玻片上，滴1~2滴质 量浓度为1%醋酸洋红染色3~5分钟，在20或40倍显微镜下用具有显微测微标尺的目镜 测量花粉细胞大小，选择花粉平均直径、不育花粉率（形状畸形和不染色）明显大于对照二 倍体？ 1杂交种的植株。
[0043] 细胞学染色体检测方法为：
[0044] 晴天上午8~10时取长度3. 1~7. 3謹的幼蕾，立即放入装有0. 002mol.L:8_羟 基喹啉水溶液0~10°C容器中，放置在0~10°C的冷柜中预处理1~5小时，蒸馏水冲洗 3~5次后转入卡诺氏固定液固定12~24小时，蒸馏水冲洗3~5次，lmol.LiCl溶液 50~60°C水浴解离3~6分钟，蒸馏水冲洗3~5次用滤纸吸干水，放入体积百分浓度为 45%的醋酸溶液配制的质量浓度1%的洋红染色液染色12~24小时，用镊子将幼蕾移入干 净的载玻片上，用刀片切取雌蕊子房，用镊子取子房中心部位少量分生组织，放置于载玻片 上，滴1~2滴1%洋红染色液，盖上盖玻片，先在低倍镜下寻找有丝分裂中期分裂相视野， 然后在100倍油镜下进行染色体计数，选择体细胞染色体数目2n=3x=21的三倍体植株。
[0045] 卡诺氏固定液是由无水乙醇和冰醋酸按体积比3:1制成的。
[0046] 体积百分浓度45%醋酸溶液配制的质量浓度1%的洋红染色液配制方法为：先加 入45ml乙酸再加水55ml，混匀后将洋红粉末1克缓慢倒入100ml45%醋酸溶液中，边煮边 搅拌，煮沸冷却后过滤即可使用。
[0047] 实施例2-种三倍体矮牵牛的培育方法
[0048] 1)选择二倍体矮牵牛Petuniahybrida'MERLIN'为父本，二倍体矮牵牛Petunia hybrida'U-IRIS'为母本，均购于浙江虹越花卉股份有限公司，按常规技术种植；
[0049] 2)父母本进入花期，上午10时温室大棚内温度31°C，选择父本植株上长度为 2. 7mm~3. 2mm花蕾，用微量注射器将去离子水配制最终质量浓度秋水仙素0. 1 %，氨磺灵 20mg.L\氟乐灵50mg.L\体积为12yL混合药液注入花蕾内，处理1次；
[0050] 花粉成熟后，取花粉粒于载玻片上用质量浓度为1 %醋酸洋红染色，在40倍镜下 用显微测微尺测量花粉的直径并结合外观特征确认2n花粉，经统计2n花粉率可达37. 9 %。
[0051] 3)诱导处理后花蕾纵轴长度生长至1. 8cm~2. 2cm时，采摘放置于密闭的玻璃干 燥器中（内含硅胶）并用黑布覆盖，将玻璃干燥器放置于冷柜中，温度设置为5°C，存放1~ 2天后用于授粉。
[0052] 4)杂交前对母本进行去雄处理，选择母本植株上纵轴长度3. 3~3. 8厘米的未开 花花蕾，对花蕾进行去除雄蕊后套袋隔离，第2天进行杂交授粉；
[0053] 5)选择父本植株上纵轴长度2. 7~3. 8厘米的未开花花蕾进行套袋隔离，1~2 天后取花粉进行授粉。
[0054] 6)于晴天上午9时，将诱导花蕾中的2n花粉取出，涂于母本去雄花蕾的柱头上，植 株结实后得到匕杂交种子；同时将父本没有经过诱导处理的n花粉涂于母本去雄花蕾的柱 头上，植株结实后得到对照二倍体匕杂交种子；
[0055] 7)将Fi杂交种、对照二倍体F1杂交种按常规技术种植，成株后先根据第5~10片 真叶长度、叶面扭曲程度、主茎粗、株高、冠幅、柱头直径、萼片长度，花瓣边缘褶皱程度、气 孔长度与宽度、花粉细胞直径筛选，在此基础上取花蕾子房内分生组织进行染色体检测，体 细胞染色体数目2n=3x=21的植株确定为三倍体植株。
[0056] 上述农艺性状为：叶片长度与宽度、叶面是否扭曲、茎粗、株高、冠幅、萼片长度与 宽度、柱头和花药大小、花瓣直径、花瓣边缘褶皱程度。
[0057] 农艺性状鉴定指，在匕杂交群体中选择第5~10片真叶平均长度与宽度、主茎粗、 株高、冠幅、萼片长度与宽度、柱头直径、花药长度与宽度、花瓣直径其中有任意5项或5项 以上数值显著大于对照二倍体匕杂交种，同时叶面扭曲、花瓣边缘波状褶皱程度明显大于 对照二倍体？ :杂交种的植株。
[0058] 解剖学观察性状有气孔和花粉细胞，观察气孔方法为：将叶片背面表皮撕下，在显 微镜下测量表皮气孔大小；观察花粉细胞方法为：对成熟花粉进行染色，在显微镜镜下测 量成熟花粉细胞大小。解剖学中气孔鉴定指，用尖头镊子将叶片背面表皮撕下，放置于载玻 片上，滴1~2滴清水在20或40倍显微镜下用具有显微测微标尺的目镜测量气孔长与宽 度，选择长、宽度显著大于对照二倍体匕杂交种的植株。
[0059] 花粉细胞鉴定指：从开放花朵中取少量成熟花粉，放置于载玻片上，滴1~2滴质 量浓度为1 %醋酸洋红染色3~5分钟，在20或40倍显微镜下用具有显微测微标尺的目镜 测量花粉细胞大小，选择花粉平均直径、不育花粉率（形状畸形和不染色）明显大于对照二 倍体？ 1杂交种的植株。
[0060] 细胞学染色体检测方法为：
[0061] 晴天上午8~10时取长度3. 1~7. 3mm的幼蕾，立即放入装有0.002mol. 1^8-羟 基喹啉水溶液0~10°C容器中，放置在0~10°C的冷柜中预处理1~5小时，蒸馏水冲洗 3~5次后转入卡诺氏固定液固定12~24小时，蒸馏水冲洗3~5次，lmol. L iCl溶液 50~60°C水浴解离3~6分钟，蒸馏水冲洗3~5次用滤纸吸干水，放入体积百分浓度为 45%的醋酸溶液配制的质量浓度1 %的洋红染色液染色12~24小时，用镊子将幼蕾移入干 净的载玻片上，用刀片切取雌蕊子房，用镊子取子房中心部位少量分生组织，放置于载玻片 上，滴1~2滴1%洋红染色液，盖上盖玻片，先在低倍镜下寻找有丝分裂中期分裂相视野， 然后在100倍油镜下进行染色体计数，选择体细胞染色体数目2n = 3x = 21的三倍体植株。
[0062] 卡诺氏固定液是由无水乙醇和冰醋酸按体积比3:1制成的。
[0063] 体积百分浓度45%醋酸溶液配制的质量浓度1%的洋红染色液配制方法为：先加 入45ml乙酸再加水55ml，混匀后将洋红粉末1克缓慢倒入100ml 45%醋酸溶液中，边煮边 搅拌，煮沸冷却后过滤即可使用。
[0064] 实施例3
[0065] 1)选择杂交优势较强的二倍体组合作为亲本，其中父本为二倍体矮牵牛Petunia hybrida 'PURPLE'，母本为二倍体矮牵牛Petunia hybrida 'HAPPINESS'，均购于浙江虹越 花卉股份有限公司，按常规技术种植；
[0066] 2)父母本进入花期，上午8时温室大棚内温度控制在22°C，选择父本植株上纵轴 长度为2. 2mm~3. 4mm花蕾，用微量注射器将去离子水配制最终质量浓度为秋水仙素、氨 磺灵和氟乐灵的混合药液，其中秋水仙素的最终质量浓度为〇. 5%，氨磺