8?10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株，其中1/2MS生根培养基中添加ΝΑΑ0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH 为 5.8。
[0029](6)炼苗与移栽:向组培瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待培养基表面形成角质层后，取出幼苗，洗净根部培养基，并立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。
[0030]实施例2
[0031](1)外植体的选择与消毒:取生长健壮的去叶菠萝蜜嫩芽条，剪成带2?3芽的茎段，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min，线状自来水冲洗15?20min，添加100mg/L吐温-20的2?3滴的0.lv/v%升萊消毒8?lOmin，无菌水冲洗3?5次，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体，其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
[0032](2)茎段萌动，获得无菌试管苗:将步骤⑴中获得的外植体接种到WPM培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001UX，光照时间8?10h/d的条件下培养25d，芽萌动后获得无菌试管苗，其中，WPM培养基中添加6-BA1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH 为 5.8。
[0033](3)试管苗丛生芽快速繁殖:将步骤(2)中得到的试管苗置于WPM繁殖培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001UX，光照时间8?10h/d的条件下，培养30d，获得无菌试管苗丛生芽，其中WPM繁殖培养基中添加TDZ 1.0mg/L、矮壮素0.2mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
[0034](4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于WPM壮苗培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间8?10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株，其中WPM壮苗培养基中添加6-BA 1.5mg/L、IAA 0.2mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
[0035](5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中培养，在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间8?10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株，其中1/2MS生根培养基中添加NAA0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH 为 5.8。
[0036](6)炼苗与移栽:向组培瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待培养基表面形成角质层后，取出幼苗，洗净根部培养基，移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。
[0037]实施例3
[0038](1)外植体的选择与消毒:取生长健壮的去叶菠萝蜜嫩芽条，剪成带2?3芽的茎段，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min，线状自来水冲洗15?20min，添加100mg/L吐温-20的2?3滴的0.lv/v%升萊消毒8?lOmin，无菌水冲洗3?5次，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体。其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
[0039](2)茎段萌动，获得无菌试管苗:将步骤(1)中获得的外植体接种到WPM培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001uX，光照时间8?10h/d的条件下培养25d。芽萌动后获得无菌试管苗，a其中，WPM培养基中添加6-BA1.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
[0040](3)试管苗丛生芽快速繁殖:将步骤(2)中得到的试管苗置于WPM繁殖培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001UX，光照时间8?10h/d的条件下培养30d，获得无菌试管苗丛生芽。其中WPM繁殖培养基中添加TDZ 1.0mg/L、矮壮素0.2mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
[0041](4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于WPM壮苗培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间8?10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株，其中WPM壮苗培养基中添加6-BA 1.5mg/L、IAA 0.2mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
[0042](5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中培养，在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间8?10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株，其中1/2MS生根培养基中添加NAA0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH 为 5.8。
[0043](6)炼苗与移栽:向组培瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待培养基表面形成角质层后，取出幼苗，洗净根部培养基，移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。
【主权项】
1.一种菠萝蜜组织培养快速繁殖方法，其特点在于，该方法包括以下步骤: (1)外植体的选择与消毒:取菠萝蜜的嫩芽作外植体，依次用27八％洗洁精水溶液浸泡5min，线状自来水冲洗15?20min，添加100mg/L吐温-20的2?3滴的0.lv/v%升汞消毒8?lOmin，无菌水冲洗3?5次，最后用消毒滤纸去除表面水分，得到外植体，其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水； (2)茎段萌动，获得无菌试管苗:将步骤(1)中获得的外植体接种到WPM培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001UX，光照时间为8?10h/d的条件下培养25d，芽萌动后获得无菌试管苗，其中WPM培养基中添加6-BA0.1?0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8 ; (3)试管苗丛生芽快速繁殖:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于WPM繁殖培养基中在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间为8?10h/d的条件下培养30d，获得无菌试管苗丛生芽，其中WPM繁殖培养基中添加TDZ 0.1?1.0mg/L、矮壮素0.1?0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基的pH为5.8 ; (4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于WPM壮苗培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间为8?10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株，其中WPM壮苗培养基中添加6-BA 0.5?1.5mg/L、NAA 0.1?0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8 ; (5)健壮植株生根培养:将步骤⑷中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中培养，在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间为8?10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株，其中，1/2MS生根培养基中添加ΝΑΑ0.1?0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8 ; (6)炼苗与移栽:向组培瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待培养基表面角质形成后取出幼苗，洗净根部培养基，移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。
【专利摘要】一种菠萝蜜的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：(1)选取生长健壮的菠萝蜜的嫩芽，剪成带2～3个芽的节段，进行消毒处理；(2)将消毒后外植体置于WPM基本培养基中诱导发芽，得到无菌试管苗；(3)将所述试管苗置于WPM繁殖培养基中快速繁殖培养，获得丛生芽；(4)将所述丛生芽置于WPM壮苗培养基中进行壮苗培养，获得健壮植株；(5)将所述健壮植株置于1/2MS生根培养基中进行生根培养，得到完整带根苗；(6)取完整带根苗进行炼苗，然后移植到沙床生长一个月，移栽到大田。采用本发明所述的培养方法得到的丛生芽增殖系数为30～40倍，获得组培苗生根率在95％以上，移栽苗床成活率在90％以上，有效解决了菠萝蜜工厂化育苗的问题。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105325296
【申请号】CN201510779350
【发明人】王晓峰, 李刚, 缪剑华, 李翠, 肖冬, 韦莹, 王一诺, 韦坤华
【申请人】广西壮族自治区药用植物园
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年11月13日