一种菠萝蜜组织培养快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种菠萝蜜组织培养快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]菠萝蜜(Artocarpusheterophyllus lam.)又称木菠萝、大树菠萝、蜜冬瓜、牛肚子果，为原产印度桑科菠萝蜜属的热带果树，现广泛栽培于斯里兰卡、缅甸、印度尼西亚等地区，自隋唐引入迄今，菠萝蜜在我国已有1000多年的栽培历史，以海南为主，在广东、广西、云南、福建、台湾、四川南部等地均有栽培。
[0003]菠萝蜜以果实生食为主，营养丰富，果肉富含糖、蛋白质、维生素A、维生素C和钾、钠、钙、锌等元素，味甜香醇，有“水果皇后”、“留齿香”之美称，也可制成果汁、果酱、蜜饯等食品。菠萝蜜种子富含淀粉，还是一种有望开辟为粮食新资源“木本粮食”果树。菠萝蜜味甘，性平，能益胃、生津、止渴，其果肉富含维生素C和多种抗氧化物质，具有巩固人体免疫系统和增强身体组织中血液细胞的活动能力，菠萝蜜种子与肉胶煮，其味鲜美，食用有催乳作用，可用于治疗妇女产后缺乳症。此外，菠萝蜜木质致密，是优质用材，制作成的家具少受白蚁为害，其叶和果皮又是牲口的饲料。因此，菠萝蜜集水果、木本粮食、药用及珍贵木材等多种用途于一身，具有重要的经济价值和综合开发前景。
[0004]菠萝蜜可采用种子繁殖，简单易行，自然条件下，农民一般采用这种方法，但种子繁殖后代生长周期长，投产晚，所得实生苗8-10年才能结果，且后代变异大，难以获得优良植株。无性繁殖苗木具有遗传因素单一，能保持母树性状的优点。但菠萝蜜空中压条易受母株和季节的限制，种苗繁殖速度慢、系数低，且受树液流胶影响，空中压条和扦插繁殖生根困难，成活率低。因此，规模化商业菠萝蜜幼苗生产主要采用嫁接繁殖，近年来虽然在芽接、枝接、切接、芽砧苗嫁接、籽苗芽接等方面均有改进，但仍然存在一些良种难以生根，受母株和季节的限制，嫁接成活率低、成本高等问题，种苗的数量和质量制约其种植业的发展。
[0005]Amin Μ Ν 等、B1ndi 和 Thorpe (1982)，Amin 和 Jaisval (1987)等分别利用带胺芽的茎段、顶芽和腋芽、成树茎干上取徒长的嫩茎、茎节、枝芽和幼嫩花序轴，通过组培成功地获得了菠萝蜜的试管苗，但外植体以主杆生长的嫩茎较好，取材比较困难，且需通过诱导愈伤组织增殖芽，具有容易变异，不能保持亲本的优良品质的不足。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种菠萝蜜组织培养快速地繁殖方法，它能快速地繁殖出大量适合移栽的优质菠萝蜜种苗，满足市场需求。
[0007]本发明通过以下技术方案达到上述目的，一种菠萝蜜组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0008](1)外植体的选择与消毒:取菠萝蜜的嫩芽作外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min，线状自来水冲洗15?20min，添加100mg/L吐温-20的2?3滴的0.lv/v%升汞消毒8?lOmin，无菌水冲洗3?5次，最后用消毒滤纸去除表面水分，得到外植体，其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0009](2)茎段萌动，获得无菌试管苗:将步骤⑴中获得的外植体接种到WPM培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001UX，光照时间为8?10h/d的条件下培养25d，芽萌动后获得无菌试管苗，其中WPM培养基中添加6-BA0.1?0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8 ;
[0010](3)试管苗丛生芽快速繁殖:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于WPM繁殖培养基中在温度为22?26°C，光照强度15001UX，光照时间为8?10h/d的条件下培养30d，获得无菌试管苗丛生芽，其中WPM繁殖培养基中添加TDZ 0.1?1.0mg/L、矮壮素0.1?0.5mg/L、鹿糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基的pH为5.8 ;
[0011](4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于WPM壮苗培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间为8?10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株，其中WPM壮苗培养基中添加6-BA 0.5?1.5mg/L、NAA 0.1?0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8 ;
[0012](5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中培养，在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间为8?10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株，其中，1/2MS生根培养基中添加ΝΑΑ0.1?0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8 ;
[0013](6)炼苗与移栽:向组培瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待培养基表面角质形成后取出幼苗，洗净根部培养基，移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到大田。
[0014]本发明突出的优点在于:
[0015](1)通过菠萝蜜丛生芽快速繁殖，在短时间内培育出大量适合移栽的菠萝蜜种苗，显著提高了菠萝蜜种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足市场上的需求。
[0016]在WPM芽诱导培养基中添加6-BA0.1?0.5mg/L、ΙΑΑ0.1?0.5mg/L，有利于芽的萌动。
[0017]在WPM繁殖培养基中添加TDZ (λ 1?L 0mg/L、矮壮素(λ 1?(λ 5mg/L，可促进丛生芽分化。
[0018]在WPM壮苗培养基中添加NAA.0.1?0.5mg/L，可促进丛生芽长高、展叶。
[0019]培养基中添加的TDZ、NAA、IAA属于常用化学物质，比较便宜，降低了组培的成本。
[0020](2)在生根培养基中添加ΝΑΑ0.1?1.0mg/L，可获得带根完整植株，这些完整植株经炼苗后，可直接移栽至沙床。
[0021](3)采用本发明所得到的菠萝蜜组培苗增殖系数达到30?50倍，获得组培苗生根率在95%以上，炼苗后可直接移栽至沙床。移栽苗床成活率在90%以上，有效解决了菠萝蜜工厂化育苗的问题。
【具体实施方式】
[0022]下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明
[0023]实施例1
[0024](1)外植体的选择与消毒:取生长健壮的去叶菠萝蜜嫩芽条，剪成带2?3芽的茎段，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min，线状自来水冲洗15?20min，添加100mg/L吐温-20的2?3滴的0.lv/v%升萊消毒8?lOmin，无菌水冲洗3?5次，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体，其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。添加100mg/L吐温-20的2?3滴的0.1￥八％升汞消毒8?lOmin。
[0025](2)茎段萌动，获得无菌试管苗:将步骤(1)中获得的外植体接种到WPM培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001UX，光照时间8?10h/d的条件下培养25d，芽萌动后获得无菌试管苗。其中，WPM培养基中添加6-BA0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
[0026](3)试管苗丛生芽快速繁殖:将步骤(2)中得到的试管苗置于WPM繁殖培养基中在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间为8?10h/d的条件下培养30d，获得无菌试管苗丛生芽，其中WPM繁殖培养基中添加TDZ 1.0mg/L、矮壮素0.2mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
[0027](4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于WPM壮苗培养基中，在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间为8?10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株，其中WPM壮苗培养基中添加6-BA 1.5mg/L、IAA 0.2mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，培养基pH为5.8。
[0028](5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中培养，在温度为22?26°C，光照强度15001ux，光照时间