一种简易高效的稻曲病菌田间接种方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明属于植物保护技术领域，具体涉及一种简易高效的稻曲病菌田间接种方法。
【背景技术】
[0002]水稻稻曲病是由一种真菌(Villosiclavavirens (Nakata)E.Tanaka&C.Tanaka)引起的水稻穗部谷粒病害。受害的穗粒内形成菌丝块膨大后形成大于谷粒数倍的稻曲球。稻曲球不但影响水稻的产量和米的质量，而且还含有对人和牲畜有剧毒作用的稻曲菌毒素，对动物的微管蛋白有抑制作用，可引起老鼠的肾脏、肝脏和膀胱细胞坏死。稻曲病是一种世界性的真菌病害，在美洲、非洲和亚洲等许多国家和地区都有大面积的发生，病害严重时，发病率可高达40%以上。近年来我国由于水稻栽培方式和技术条件的诸多改变，稻曲病的发生日益严重，已从次要病害上升为主要病害之一。稻曲病不仅影响水稻产量，而且对人类健康构成重大威胁。
[0003]张君成等人研究表明，稻曲病菌分生孢子与菌丝碎段混合液接种可导致水稻稻曲病严重发生，即使接种当年新鲜黄色厚垣孢子其发病率也非常低(P.391表格上方第1行至P.392。稻曲病的接种方法及其效果初探.《中国水稻科学》，2003，第17卷(4):390-392)。
[0004]张君成等人研究表明，上年保存于是-20°C的厚垣孢子不能引起发病(摘要中。稻曲病的接种技术研究.《植物病理学报》，2004，第34卷(5) =463-467)。
[0005]杨秀娟等人研究表明，不同来源厚垣孢子于水稻孕穗期注射接种多次也未发病(P.399表格下方第6-9行。水稻稻曲病室内人工接种技术.《植物保护学报》，2011，第38卷(5):395-400)。
[0006]伏荣桃等人研究表明，上年保存的厚垣孢子不能引起发病(P.269表2中。水稻稻曲病抗性鉴定技术及影响因子研究.《中国农学通报》，2015，第31卷(18):266-272)。
[0007]综上所述，现有研究表明，稻曲病厚垣孢子接种很难获得成功，这制约了很多人进行水稻品种在田间对稻曲病的抗性鉴定。因此本发明解决了此难题，所有农业科技工作者和农民都可很方便进行水稻品种田间对稻曲病的抗性程度检验。
【发明内容】
[0008]技术问题
[0009]本发明目的在于克服现有技术的限制，提出一种简易高效的稻曲病菌田间接种方法，解决了目前稻曲病菌厚垣孢子田间接种不能发病这一难题。
[0010]技术方案
[0011]实现本发明的技术方案如下所述:
[0012]—种简易高效的稻曲病菌田间接种方法，其特征在于，在水稻幼穗分化3-4期，将水稻稻曲病菌厚垣孢子液喷洒到水稻植株中上部叶片，厚垣孢子用量为每平方米稻曲球3粒以上。所述水稻幼穗分化3-4期是指水稻破口前18-25天。将水稻稻曲病菌厚垣孢子液最好在上午10时至下午5时喷洒到水稻植株中上部叶片。取室内保存的上年稻曲球放入水中浸泡3-5小时，振荡至稻曲粉即厚垣孢子全部散落在水中，用纱布过滤，滤掉谷粒残体和其它杂物，获得水稻稻曲病菌厚垣孢子液。
[0013]有益效果
[0014]发明人根据多年对稻曲病菌厚垣孢子的研究和实践，稻曲球上大部分为老熟厚垣孢子，通过研究厚垣孢子特性，尝试提前接种使稻曲病菌厚垣孢子在田间自然条件下能够打破休眠，顺利萌发，并且产生分生孢子和菌丝后正好在水稻破口前5天左右，适合浸染，进而使水稻发生稻曲病。
[0015]本发明的优点:只要准确把握接种时间，加大厚垣孢子喷液浓度，其它无需特别满足条件，因此本发明成本极低，工作量小，可操作性强，且准确性高(因喷雾法接种不会影响水稻的正常生长发育)，目前是其它接种方法所不及的。不需要分离病菌、培养病菌、采取特殊措施保存菌源，不需强求温湿度条件，一切随自然条件即可。
【具体实施方式】
[0016](一 )稻曲球的采集和保存:
[0017]在水稻成熟后收割前，到水稻田间稻穗上摘取稻曲球(张君成等，稻曲病的接种方法及其效果初探.《中国水稻科学》，2003，第17卷(4):390-392))，收集带回室内自然晾干，装入塑料袋置于室内阴凉干燥处，留待下年备用。
[0018](二)接种体制备
[0019]取上年保存的稻曲球放入清水(室温)浸泡3-5小时(可装入1升的干净瓶中)，后振荡直至见到水稻谷粒露出，谷粒外不再有黑黄色稻曲粉包裹，此时稻曲粉(即厚垣孢子)全部散落在水中，用纱布过滤，滤掉谷粒残体和其它杂物，得到滤液(稻曲粉液)，即稻曲病菌厚垣孢子液。
[0020](三)接种方法
[0021]采用喷雾接种法，在水稻幼穗分化第3-4期(水稻破口前18-25天)，用普通喷雾器在晴天上午10时至下午5时在田间直接喷洒至水稻中上部叶片，喷洒过程中每隔30秒左右晃动1次喷雾器，使悬浮液中厚垣孢子均匀分布，尽量做到喷洒均匀。(厚垣孢子用量以每平方米达稻曲球3粒以上计算)。
[0022](四)病穗率和病情指数调查方法
[0023]1.接种后50天至收割前调查病穗率和病情指数，计算方法如下:
[0024]病穗率=(病穗数)/ (总穗数)X 100 %
[0025]病情指数=(1级穗数X 1+2级穗数X 2+3级穗数X 3+4级穗数X 4+5级穗数X 5) / (总穗数X 5) X 100
[0026]2.稻曲病的分级标准:
[0027]0级:未发病；
[0028]1级:每穗1个稻曲；
[0029]2级:每穗2个稻曲；
[0030]3级:每穗3-5个稻曲；
[0031 ] 4级:每穗6-9个稻曲；
[0032]5级:每穗10个及以上稻曲。
[0033]实例1:
[0034]1、稻曲球采集
[0035]2014年10月11日在江苏沿海地区农业科学研究所试验场(地址:盐城市亭湖区飞机场南)，盐稻10号稻田(食堂南)采集300粒稻曲球(Villosiclava virens (Nakata)E.Tanaka&C.Tanaka)(张君成等，稻曲病的接种方法及其效果初探.《中国水稻科学》，2003，第17卷(4) =390-392)带回江苏沿海地区农业科学研究所仓库(地址:盐城市亭湖区工农路18号)晾干入塑料袋保存。
[0036]2、水稻种植
[0037]试验田落实在江