樱花组织培养和快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物的培养方法，具体地指一种樱花组织培养和快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]楼花，一般指的是蔷薇科(Rosaeeae)李亚科(Prunoidea)楼属(Cerasus)植物的花朵统称。樱花属木本，传统的繁殖方法主要是利用扦插、嫁接等繁殖方法，但这些繁殖方法一方面需要大量的母株，另方面还需花费大量人力、物力、财力、时间等，且繁殖系数低，成苗慢。随着樱花在城市和乡镇园林绿化建设中的广泛应用，需要大规模的苗木。因此，传统的繁殖方法已远远不能满足生产上的需要。
[0003]随着现代生物技术的发展，人们利用植物细胞的全能性，在人工控制的环境中，可以利用植物的茎尖、茎段、叶片等外植体诱导成小植株，这就是植物组织培养技术。植物组织苗具有根系发达，生长健壮，抗性增强，管理粗放，降低生产成本等特点。组织培养技术不仅具有繁殖系数大、成苗周期短的优点，而且能够保持亲本优良遗传性状的稳定性，为樱花快速繁殖和工业化生产提供了一条有效的途径。
[0004]近年来樱花的组培快繁技术日益受到人们的关注，并开展了广泛的研究，论文“日本晚樱组培快繁技术研究”(中国农学通报，第22卷，第10期，264-266)中将晚樱进行组培快繁，增值系数最高为2.31。现有技术樱花的组培快繁过程中:外植体萌芽率约为30?40%、增殖系数I?2.4、生根率不足50%，较低的成活率严重制约了樱花在城市绿化及园林建设中的应用。
[0005]目前，每当春天樱花盛开之季，各地樱花公园的游人如织，形成了独特的“赏樱游”并催生了 “樱花经济”，据湖北省统计局报道，湖北省2013年首尝“花经济”硕果400亿，仅樱花一项就占全年旅游收入的20%，可见樱花在国内园林绿化中的地位十分重要，因此生产上迫切需要探讨出一种外植体萌芽率高、增殖系数大、生根率好的樱花快速繁殖技术，推动我国樱花产业化发展。
【发明内容】
[0006]本发明的目的就是要解决上述【背景技术】的不足，提供一种外植体萌芽率高、增殖系数大、生根率好的樱花组织培养和快速繁殖方法。
[0007]本发明的技术方案为:一种樱花组织培养和快速繁殖方法，其特征在于，步骤为:
[0008](I)樱花茎段外植体的获得:取樱花一年生幼嫩枝条剪成枝段，经消毒、无菌水冲洗、吸干水分后，将枝段切成带一个腋芽的茎段；
[0009](2)樱花茎段外植体的诱导培养:将带一个腋芽的茎段在诱导培养基中培养，4?5周后腋芽开始萌动，形成小芽;所述诱导培养基成分为:MS+6-BA 0.5?1.0mg/L+NAA或IBA
0.1?0.2mg/L+鹿糖30g/L+琼脂6g/L，pH 5.6?6.0;
[0010](3)樱花丛生芽的增殖培养:将由腋芽萌动形成的小芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，4?5周后形成丛生芽;所述增殖培养基成分为:WPM+KT 1.0?2.0mg/L+IBA 0.05?0.2mg/L+活性炭0.5g/L+鹿糖30g/L+琼脂6g/L，pH 5.6?6.0 ；
[0011 ] (4)楼花的生根培养:共分2个阶段，第一阶段:先将丛生芽切割的单芽在第一生根培养基培养I周;第二阶段:再转接第二生根培养基中培养3?4周，长出良好的根系;所述第一生根培养基成分为:1/2WPM+IBA O?I.5mg/L+NAA 0.5?I.0mg/L+活性炭0.5g/L+蔗糖25g/L+琼脂6g/L，pH 5.6?6.0;所述第二生根培养基成分为:1/2WPM+活性炭0.5g/L+蔗糖25g/L+琼脂6g/L，pH 5.6?6.0;
[0012](5)樱花组培苗的炼苗和移栽:常温炼苗3?6d后，移栽入基质中培养4?5周，获得樱花的快速繁殖苗。
[0013]诱导培养基成分为:MS+6-BA0.5?I.0mg/L+NAA或IBA 0.I?0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH 5.6?6.0，表示以MS为基础培养基，每升基础培养基加入6-BA0.5?1.0mg、NAA或IBA0.1?0.2mg、蔗糖30g、琼脂6g，培养基pH 5.6?6.0。以下增殖培养基、第一生根培养基、第二生根培养基同理，均为现有技术中植物培养基成分的通用表不方法，6_BA、NAA、IBA、KT为植物生长调节剂。
[0014]优选的，所述步骤(I)为:
[0015]樱花茎段外植体的获得:春天花后取樱花母株上生长发育正常、健康粗壮、无病害和虫害的一年生幼嫩枝条;用清水将嫩枝清洗干净，剪成3_5cm枝段，后用缓慢流水冲淋2?4h，再在超净工作台上用70 %的酒精浸泡30?40s，用无菌水冲洗3?5次后用0.1 %的升汞浸泡3?5min，无菌水冲洗3?5次，重复0.1 %的升萊浸泡3?5min，无菌水冲洗3?5次；用吸水纸吸干多余水分，将枝段切成带一个腋芽的茎段。
[0016]优选的，所述步骤(2)中诱导培养基、步骤(3)中增殖培养基、步骤(4)中第一生根培养基、第二生根培养基配制好后均用蒸汽高压灭菌锅灭菌，121°C灭菌20min。
[0017]优选的，所述步骤(2)、步骤(3)、步骤(4)的培养条件均为:日光灯光源，每天连续光照16h，光照强度为1500?20001x，培养温度(25 ± I) °C。
[0018]优选的，所述步骤(5)为:
[0019]樱花组培苗的炼苗和移栽:将生根的试管苗移至常温环境中，去除试管苗所在培养瓶的封口膜，在常温炼苗3?6d后，取出试管苗，再用清水洗净试管苗的根系后，移栽入由消毒蛭石、消毒泥炭、消毒珍珠岩混合而成的基质中培养4?5周，获得樱花的快速繁殖苗。
[0020]进一步的，所述步骤(5)中基质由消毒蛭石、消毒泥炭、消毒珍珠岩按体积比1:1:1混合而成。
[0021]本发明的有益效果为:
[0022]1.生根培养采用两阶段共同培养，在第一生根培养基中培养I周后再转入第二生根培养基中培养3?4周，两种不同的培养基调节了生根阶段单芽所需的养分，使吸收的营养均衡，提高了生根率。樱花组织培养和快速繁殖的方法体系稳定，操作较易，增殖率和组培苗生根率高，茎段外植体萌芽率为70 %以上，增殖系数为4.0以上，生根率为90 %以上。
[0023]2.获得的幼苗生根容易，健壮抗逆，抗病虫能力强，且幼苗整齐一致，质量高，栽培管理较容易。利用本发明获得的组培苗，对湿热环境适应能力强，其茎干挺立，质量提高I?2个等级，价值增加20 %?40 %。
[0024]3.对实现樱花的规范化种植，为樱花的现代化生产得到高产量、优品质的樱花产品起到关键性的作用，具有较好的市场应用前景。
【具体实施方式】
[0025]下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
[0026]实施例1
[0027]樱花组织培养和快速繁殖方法的步骤为:
[0028](I)樱花茎段外植体的获得:
[0029]春天花后取樱花母株上生长发育正常、健康粗壮、无病虫害的一年生带顶芽的幼嫩枝条，剪成5cm左右枝段，于流水中冲洗2h，然后在超净工作台上将材料浸入70 %酒精中浸泡30s，用无菌水冲洗3次，再用0.1 %升萊消毒3min，无菌水冲洗3次，重复0.1 %升萊消毒3min，无菌水冲洗3次。将消毒好的材料放入无菌的培养皿内，用吸水纸吸干多余水分，将枝段切成带一个腋芽的茎段。
[0030](2)樱花茎段外植体的诱导培养:
[0031]将带一个腋芽的茎段在诱导培养基中培养，诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH 5.6?6.0 (优选5.6)，即在1000ml MS培养基中加入1.0mg 6-1^、0.111^凡嫩4、3(^的