一种防治辣椒枯萎病制剂和应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及辣椒枯萎病的防治，具体的说是一株解淀粉芽抱杆菌的制剂及其对辣 椒枯萎病的防治应用。
【背景技术】
[0002] 辣椒枯萎病，又称辣椒萎黨病，是由半知菌亚口尖抱镶刀菌（Fusarium 化ysporium)侵染引起的，是一类毁灭性的世界±传植物病害，其分布广、危害重，主要危害 辣椒根茎部维管束，病部变褐，最后导致全株性枯萎死亡。该病在国外早有报道，20世纪50 年代在我国由俞大级首次报道。近年来，在全国各地普遍发生，已成为大棚辣椒栽培中的主 要病害之一，并且越来越重，该病发病率一般为15%~30%，严重时达70%~80%，甚至全 田枯萎死亡，给产量造成了很大损失，成为辣椒生产上的一大障碍因素。多年来，人们尝试 用晒田和抗病品种等多种不同方法控制枯萎病的发生及流行，但效果甚微。传统化学药剂， 如敌克松、五氯硝基苯、多菌灵等，虽能达到防治该类病害的目的，但同时也带来了抗药性 和环境污染等一系列问题，运不仅影响人类健康，而且严重威胁整个生态系统。±传病害病 原菌寄生于±壤中，化学农药一般难W从根本上控制其危害。因此，寻找安全有效的防治措 施成为一个亟待解决的问题。生物防治可W克服化学农药所带来的弊病，具有无毒、无公 害、无污染、不易产生抗药性等优点，不仅符合人们对绿色食品的需求，而且为农业的可持 续发展提供保障，因此，生物防治已成为辣椒枯萎病防治的重要研究领域。在用于植物病害 防治的生防菌中，解淀粉芽抱杆菌(BaciIlus amyIoliquefaciens)的研究很多，不仅有促 生长作用，而且能产生多种抑菌相关的代谢产物，对真菌和细菌都具有强烈的抑制作用，具 有实际应用的潜力。
[0003] 解淀粉芽抱杆菌(BaciIlus amyIoliquefaciens)是芽抱杆菌属中的一个种，是± 壤和植物微生态的优势群，也是一种有益微生物。具有较强的次级代谢产物的生产能力，可 分泌植物生长激素(如吗I噪乙酸），促进植物生长;可分泌植酸酶和有机酸，降解±壤中植酸 及矿质憐;可W产生多种抑菌相关的代谢产物(如蛋白酶，杆菌素、杆菌締、风齐素，大环内 醋等），对真菌和细菌都具有强烈的抑制作用，具有实际应用的潜力。
【发明内容】
[0004] 本发明目的是提供一种效果特别显著的防治辣椒枯萎病的制剂和应用。
[0005] 本发明的技术方案如下：
[0006] 1.-种防治辣椒枯萎病制剂，它的活性成分为一株解淀粉芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No.5722的发酵液。
[0007] 2.根据技术方案1所述的一种防治辣椒枯萎病制剂，所述解淀粉芽抱杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No.5722的发酵液通过W下方法制备得 到：
[000引（1)将所述的解淀粉芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No . 5 7 2 2活化后，按5~10 %接种量，将活化的解淀粉芽抱杆菌（Baci I Ius amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC齡.5722接种到种子培养基，在培养溫度35°(3、转速 120rpm/min条件下，摇床培养36~48h，得到一级种子液，所述种子培养基为液体LB培养基， pH 7.0~7.2;
[0009] (2)按10~12 %接种量，将一级种子液转接到种子罐内的二级种子培养基，在28~ 37°C，转速100巧m/min，通气量为lOOOL/h，罐压保持在0.02~0.03MPa条件下培养36~48h， 得到二级种子液;所述二级种子培养基由W质量分数计的W下成分组成:淀粉1.5~3%，教 皮粉1~2%，酵母膏0.05~0.3%，蛋白腺0.5~1%，憐矿粉1~2%，MgS〇4 ? 7出0 0.01~ 0.05%，CaCl20.1~0.4%，（NH4)2S040.01~0.04%，余量为水，pH7.0~7.2;
[0010] (3)按10~12%接种量，将二级种子液接种到发酵罐内的发酵培养基，在28~37 °C，转速100巧m/min，通气量为lOOOOL/h、罐压保持在0.02~0.03MPa条件下培养48~72h， 培养后的发酵液中解淀粉芽抱杆菌（BaciIlus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No. 5722的有效活菌数刮X l〇Wcfu/ml时，该发酵液即为所述解淀粉芽抱杆菌(Bacillus 日11171〇119116'日(316113化肥010-1(0〔61〇：齡.5722的发酵液，所述发酵培养基与步骤(2)所述 二级种子培养基相同。
[0011] 3.技术方案1或2所述的防治辣椒枯萎病制剂在防治辣椒枯萎病上的应用。
[0012] 与现有技术相比，本发明具有W下有益效果：
[0013] 1、本发明防治辣椒枯萎病制剂同时具有促生长和防病作用，在防治植物真菌病害 的应用方面，能显著地抑制植物真菌的生长，对辣椒枯萎病菌的防治效果达53.75%~ 68.54%，对枯萎病的防效是预防效果均优于治疗效果，表明制剂增强了植物抗病能力，细 菌在根系大量繁殖，在一段时间内成为根系的优势菌群，抑制和减少了病原微生物的滋生， 起到防病作用，可W作为防治植物真菌病害的微生物制剂。
[0014] 2、本发明制剂是一种无毒、无污染、无残留，对人畜安全，对生态环境友好的微生 物产品。
[0015] 本发明所述的解淀粉芽抱杆菌8日(3；[11113日111710119116'日(316]13￥肥010-1(〔于2012年 1月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（简称:CGMCC)，保藏号为 CGMCC No.5722,并于2012年1月12日检测为存活。该普通微生物中屯、地址：中国北京市朝阳 区北辰西路1号院3号，邮编：100101。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合实施例进一步说明，各实施例无特殊说明为常规方法。
[0017] 实施例1解淀粉芽抱杆菌（BaciIlus amyIoliquefaciens)YN20IO-KC的获得、鉴定 和保臧
[0018] 1、本发明解淀粉芽抱杆菌YN2010-KC的获得
[0019] 1.1 材料
[0020] 采自云南农业大学后山农场玉米根际周围的±壤。
[00別]1.2培养基制备
[0022]将LB固体培养基和PSA培养基（马铃馨薦糖琼脂培养基)融化，分别倒入灭菌培养 皿，冷却，制成LB和PSA平板。
[0023] 1.3分离培养
[0024] 采用稀释平皿分离法和平板划线分离，将分离纯化所得的一菌株命名为YN2010-KC。
[00巧]2、解淀粉芽抱杆菌YN2010-KC的鉴定
[0026] 2.1、形态学鉴定
[0027] 取菌株YN20IO-KC在LB培养基上培养，37°C培养36小时，进行形态观察鉴定，菌体 为杆状、端圆，周生鞭毛、具运动性，产生楠圆形芽抱;在LB和PSA平板上菌落圆形、淡茶褐 色、菌落中央颜色略深、隆起、表面干燥有權皱。与《常见细菌系统鉴定手册》（东秀珠等编 著，科学出版社，2001年）中描述的芽抱杆菌属形态特征基本一致，初步判断菌株YN2010-KC 属于芽抱杆菌(BaciIlus spp.)。
[002引 2.2、生理生化鉴定
[0029] 菌株革兰氏染色、芽抱染色、淀粉水解、葡萄糖利用、巧樣酸盐利用、V-P反应、接触 酶反应、硝酸盐还原、明胶液化等均呈阳性。
[0030] 3、解淀粉芽抱杆菌YN2010-KC的保藏
[0031 ]经上述鉴定表明所分离获得的菌株为解淀粉芽抱杆菌（B a C i 1 1 U S amyloliquefaciens)，其代号为YN2010-KC，所述的解淀粉芽抱杆菌Bacillus amyloliquefaciensYN2010-KC于2012年1月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中屯、（简称:CGMCC)，保藏号为CGMCC No. 5722，并于2012年1月12日检测为存活。该 普通微生物中屯、地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101。
[0032] 实施例2本发明防治辣椒枯萎病制剂的制备方法，包括W下步骤：
[0033] (1) -级种子液制备
[0034] 将-80。C保存的解淀粉芽抱杆菌（Bacillusamyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No.5722接种在液体LB培养基上，28~37°C培养24-3化，得活化的菌种。按10%接种 量，将活化的所述解淀粉芽抱杆菌（BaciIlus amyIoIiquefaciens)YN20IO-KC CGMCC No . 5722接种到种子培养基，在培养溫度35°C、转速12化pm/min条件下，摇床培养36h，得到 一级种子液，所述种子培养基为液体LB培养基，