，盒体的内径为12cm，高 度为3cm;
[0031 ]供试昆虫:甜菜夜蛾高龄幼虫，来自宁波横溪大番蔬菜田，室内饲养至高龄。
[0032] 供试线虫：异小杆线虫（Heterorhabditis bacteriophora，购于河南济源白云实 业有限公司）。
[0033]试验过程:取直径为12cm、高度为2cm的海绵块(未使用过的新鲜海绵）置于盒体 中，并使海绵块横向铺满盒体底面，向海绵块滴加无菌水至海绵块完全润湿。
[0034] 将上述线虫用无菌水配制成昆虫病原线虫水溶液，该昆虫病原线虫水溶液为每毫 升含4500条昆虫病原线虫的悬浮液，取适量的昆虫病原线虫水溶液滴在饥饿24h的甜菜夜 蛾高龄幼虫体表，平均每1克甜菜夜蛾高龄幼虫配比1/4毫升昆虫病原线虫水溶液，2min后 将甜菜夜蛾高龄幼虫均匀地放置于海绵块上方。
[0035] 盖上盒盖并保持一定的通气性，将装有甜菜夜蛾高龄幼虫的保鲜盒放置于25°C培 养箱中恒温培养，培养过程中保持海绵块处于完全湿润状态。培养10天后，甜菜夜蛾高龄幼 虫基本死亡，海绵块中存在病原线虫，用无菌水清洗海绵块而收集所需的昆虫病原线虫，繁 殖结果如表1所示。
[0036] 实施例3:
[0037] 培养容器:透明的塑料保鲜盒，包括圆盘状的盒体和盒盖，盒体的内径为18cm，高 度为2.2cm;
[0038] 供试昆虫:甜菜夜蛾高龄幼虫，来自宁波横溪大岙蔬菜田，室内饲养至不同龄期。 [0039] 供试线虫：斯氏线虫（Steinernema carpocapsae，购于河南济源白云实业有限公 司）。
[0040] 试验过程:取直径为18cm、高度为lcm的海绵块(未使用过的新鲜海绵）置于盒体 中，并使海绵块横向铺满盒体底面，向海绵块滴加无菌水至海绵块完全润湿。
[0041] 将上述线虫用无菌水配制成昆虫病原线虫水溶液，该昆虫病原线虫水溶液为每毫 升含5000条昆虫病原线虫的悬浮液，取适量的昆虫病原线虫水溶液滴在饥饿12h的甜菜夜 蛾高龄幼虫体表，平均每1克甜菜夜蛾高龄幼虫配比1/3毫升昆虫病原线虫水溶液，3min后 将甜菜夜蛾高龄幼虫，均匀地放置于海绵块上方。
[0042] 盖上盒盖并保持一定的通气性，将装有甜菜夜蛾高龄幼虫的保鲜盒放置于25°C培 养箱中恒温培养，培养过程中保持海绵块处于完全湿润状态。培养15天后，甜菜夜蛾高龄幼 虫基本死亡，海绵块中存在病原线虫，用无菌水清洗海绵块而收集所需的昆虫病原线虫，繁 殖结果如表1所示。
[0043] 比较例1:与实施例1不同的是，比较例1中采用大蜡螟(5龄幼虫，采自宁波横溪大 田）作为寄主昆虫，其他试验条件与实施例1同，繁殖结果如表1所示。
[0044] 比较例2:与实施例1不同的是，比较例2中采用滤纸代替实施例1中的海绵块，滤纸 的直径为15cm、高度为lcm，横向铺满盒体底面，其他试验条件与实施例1同，繁殖结果如表1 所示。
[0045] 表1各实施例、比较例的繁殖结果
[0046]
[0047] 由表1可见，应用本发明中的繁殖方法，病原线虫对寄主昆虫的有效寄生率（即侵 染率)显著提高，出线虫时间缩短，病原线虫的产量显著增加。
[0048] 将实施例1~3中繁殖的病原线虫侵染甜菜夜蛾高龄幼虫5min，繁殖的病原线虫对 甜菜夜蛾高龄幼虫的寄生率达到85%以上，具有很强的致病力。
【主权项】
1. 一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 取培养容器，在该培养容器中放入海绵块，向海绵块滴加无菌水至海绵块完全润 湿； (2) 将适量昆虫病原线虫水溶液滴在饥饿12~24h的甜菜夜蛾高龄幼虫体表，1~3min 后将该甜菜夜蛾高龄幼虫置于海绵块上； (3) 将经所述步骤(2)处理的培养容器放置于22~25°C培养箱中恒温培养，培养过程中 保持海绵块持续处于完全湿润状态； (4) 培养10~15天后，海绵块中分布有病原线虫，用无菌水清洗海绵块而收集所需的昆 虫病原线虫。2. 如权利要求1所述的活体繁殖方法，其特征在于，所述步骤(2)中昆虫病原线虫水溶 液为每毫升含4500~5000条昆虫病原线虫的悬浮液，且每lg甜菜夜蛾高龄幼虫配比1/5~ 1/3毫升的昆虫病原线虫水溶液。3. 如权利要求2所述的活体繁殖方法，其特征在于，所述昆虫病原线虫为斯氏线虫或异 小杆线虫，且当昆虫病原线虫为斯氏线虫时，每lg甜菜夜蛾高龄幼虫配比1/5~1/3毫升的 昆虫病原线虫水溶液;当昆虫病原线虫为异小杆线虫时，每lg甜菜夜蛾高龄幼虫配比1/5~ 1 /4毫升的昆虫病原线虫水溶液。4. 如权利要求1或2或3所述的活体繁殖方法，其特征在于，所述海绵块横向填满培养容 器底面。5. 如权利要求4所述的活体繁殖方法，其特征在于，所述培养容器为透明的玻璃瓶、玻 璃盒、塑料瓶、塑料盒中的任一种。6. 如权利要求5所述的活体繁殖方法，其特征在于，所述培养容器为圆形盒，且其内径 为12~18cm，高度为2.2~3cm，对应地，所述海绵块的直径为12~18cm，高度为1~2cm。
【专利摘要】本发明涉及一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，其包括以下步骤：取培养容器，在该培养容器中放入海绵块，向海绵块滴加无菌水至海绵块完全润湿；将适量昆虫病原线虫水溶液滴在饥饿12～24h的甜菜夜蛾高龄幼虫体表，1～3min后将该甜菜夜蛾高龄幼虫置于海绵块上；将培养容器放置于22～25℃培养箱中恒温培养，培养过程中保持海绵块持续处于完全湿润状态；培养10～15天后，海绵块中分布病原线虫，用无菌水清洗海绵块而收集所需的昆虫病原线虫。本发明繁殖设备简单，降低了活体繁殖成本低，操作简单，寄主昆虫，来源广，方便采集，采用海绵块作为繁殖载体，重复利用线虫的驱水性，保证了病原线虫对甜菜夜蛾高龄幼虫的有效侵染，进一步保证病原线虫的产量。
【IPC分类】A01K67/033
【公开号】CN105532583
【申请号】CN201511009910
【发明人】姚红燕, 王丽丽, 汪峰, 李国安, 谌江华, 林波
【申请人】宁波市农业科学研究院
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2015年12月29日