一种半夏块茎的试管培养方法
【技术领域】
[0001 ]本发明属于植株培养技术领域，具体涉及一种半夏块茎的试管培养方法。
【背景技术】
[0002]半夏Pinellia ternata(Thunb)Breit.为天南星科植物，块莖入药，为大宗常用中药材。性温，味辛，有毒。归脾、胃、肺经。具有燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结之功效。主治咳喘痰多，呕吐反胃，胸脘痞满，头痛眩晕，夜卧不安，癭瘤痰核，痈疽肿毒。现代药理及临床研究表明:半夏具有抗癌、抗生育和抗早孕、抗心率失常等作用，可治疗食管、贲门癌梗阻，冠心病，宫颈糜烂，寻常疣，急性乳腺炎等症。
[0003]半夏生于山地、农田、溪边或林下；分布于我国大部分地区。作为运用广泛的大宗中药材，随着市场用量的有增无减，半夏野生资源逐年锐减，已不能满足日益增长的市场需求，人工栽培势在必行。块茎类药材繁殖率低，种质易退化，自然生长周期长，栽培成本高。
[0004]现在半夏的栽培通常采用块茎繁殖、珠芽繁殖、种子繁殖等传统方法。生长周期长、繁殖率低、种质易退化是在半夏生产中突出的问题。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种半夏块茎的试管培养方法，利用组织培养技术，由外植体直接诱导出小块茎，作为种苗栽种，可提高繁殖率，防止种质退化;缩短其生长周期，有效降低栽种成本。
[0006]本发明所采用的技术方案是，一种半夏块茎的试管培养方法，包括以下步骤:
[0007]步骤1、消毒和接种:取半夏的幼嫩的叶、茎，洗衣粉水洗后，自来水冲洗净，用蒸馏水加吐温-80两滴浸泡1min，在超净工作台内用70%酒精消毒1s，漂白粉过饱和溶液上清液浸泡15min，0.05%砷汞浸泡4?6min，无菌水冲洗4?6次，无菌滤纸吸去表面水分，将叶、茎切一伤口，叶分成lcmX Icm的大小，莖分为1.0?1.5cm长的小段，再将有切口的一面接种到培养基上；
[0008]步骤2、诱导愈伤组织和芽分化及生根:在暗培养室培养5?8天后，切口部分逐渐长出淡黄色颗粒状的愈伤组织，到第10?20天时形成多个芽聚生在一起的芽丛，芽的基部逐渐扩大，渐渐长成带顶芽的小块茎丛；第21?30天后，小块茎基部长出根;25?30天继代一次；
[0009]步骤3、移栽:培养25?30天后，选取生长好的小块茎，用自来水洗净培养基，移栽入花盆中；移栽大约12天后有苗破土，大约4天后叶片展开，为单叶，大约7天后出现三出复叶；在移栽I个月内长出三种叶形:单叶、三出复叶、正分化成三出复叶的单叶；挖出块茎观察，发现块茎明显增大，并相应处于三种成形阶段:不规则块状、圆球形、椭圆形，即移栽成功。
[0010]进一步地，步骤2中暗培养室培养的培养条件为:培养基MS+BA1.0mg/L+NAA0.1?0.25mg/L在无光照条件下进行培养，诱导半夏的茎、叶形成带顶芽的小块茎丛。
[0011]本发明的有益效果是:培养诱导形成的带顶芽的半夏块茎与野生半夏在性状、显微特征及理化鉴别等多方面有相似性，初步证实组织培养诱导形成半夏块茎，是对保护野生半夏资源，降低栽培成本，实现人工集约化栽培，适应不断增长的市场需求的一种可行性尝试。
【具体实施方式】
[0012]下面结合【具体实施方式】对本发明进行详细说明。
[0013]本发明提供一种半夏块茎的试管培养方法，包括以下步骤:
[0014]步骤1、消毒和接种:取半夏的幼嫩的叶、茎，洗衣粉水洗后，自来水冲洗净，用蒸馏水加吐温-80两滴浸泡1min，在超净工作台内用70%酒精消毒1s，漂白粉过饱和溶液上清液浸泡15min，0.05%砷汞浸泡4?6min，无菌水冲洗4?6次，无菌滤纸吸去表面水分，将叶、莖切一伤口，叶可分成I cm X I cm的大小，莖可分为1.0?1.5cm长的小段，再将有切口的一面接种到培养基上。
[0015]步骤2、诱导愈伤组织和芽分化及生根:在暗培养室培养5?8天后，切口部分逐渐长出淡黄色颗粒状的愈伤组织，到第10?20天时形成多个芽聚生在一起的芽丛，芽的基部逐渐扩大，渐渐长成带顶芽的小块茎丛；第21?30天后，小块茎基部长出根。25?30天可继代一次。
[0016]步骤3、移栽:培养25?30天后，选取基部生根的小块茎，用自来水洗净培养基，移栽入花盆中。移栽大约12天后有苗破土，大约4天后叶片展开，为单叶，大约7天后出现三出复叶。在移栽I个月内长出三种叶形:单叶、三出复叶、正分化成三出复叶的单叶。挖出块茎观察，发现块茎明显增大，并相应处于三种成形阶段:不规则块状、圆球形、椭圆形。
[0017]在上述制备方法中，有以下优点:
[0018]1、培养基MS+BA1.0mg/L+NAA0.1?0.25mg/L在无光照条件下进行培养，可诱导半夏的茎、叶形成带顶芽的小块茎丛。25?30天可继代。
[0019]2、培养出来的小块茎，可以直接移栽，I个月内长出三种叶形:单叶、三出复叶、正分化成三出复叶的单叶。块茎明显增大，并相应处于三种成形阶段:不规则块状、圆球形、椭圆形。
[0020]3、在无光照条件下诱导半夏的茎、叶形成带顶芽的小块茎丛，一方面，暗培养无需光照；另一方面，块茎可直接移栽，省去炼苗过程。这个培养方法和常规的植物组织培养相比较，可以节约用电，节省人工。
[0021]4、移栽试验初步验证组培半夏块茎缩短了药材生长周期，对半夏的规模化种植可能是一种有益的尝试。
[0022]培养基MS+BA1.0mg/L+NAA0.1?0.25mg/L在无光照条件下进行培养，可诱导半夏的茎、叶形成带顶芽的小块茎丛。通常情况下，半夏在第一年只长一片叶，第2年才长出三出复叶，本发明的培养方法小块茎移栽一个月内长出单叶、三出复叶、正分化成三出复叶的单叶三种不同的叶形，块茎明显增大，并相应处于不规则块状、圆球形、椭圆形三种成形阶段。初步验证组培半夏块茎缩短了药材生长周期，对半夏的规模化种植可能是一种有益的尝试。
【主权项】
1.一种半夏块茎的试管培养方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤1、消毒和接种:取半夏的幼嫩的叶、茎，洗衣粉水洗后，自来水冲洗净，用蒸馏水加吐温-80两滴浸泡lOmin，在超净工作台内用70%酒精消毒10s，漂白粉过饱和溶液上清液浸泡15min ,0.05%砷汞浸泡4?6min，无菌水冲洗4?6次，无菌滤纸吸去表面水分，将叶、茎切一伤口，叶分成lcmX Icm的大小，莖分为1.0?1.5cm长的小段，再将有切口的一面接种到培养基上； 步骤2、诱导愈伤组织和芽分化及生根:在暗培养室培养5?8天后，切口部分逐渐长出淡黄色颗粒状的愈伤组织，到第10?20天时形成多个芽聚生在一起的芽丛，芽的基部逐渐扩大，渐渐长成带顶芽的小块茎丛;第21?30天后，小块茎基部长出根;25?30天继代一次； 步骤3、移栽:培养25?30天后，选取生长好的小块茎，用自来水洗净培养基，移栽入花盆中；移栽大约12天后有苗破土，大约4天后叶片展开，为单叶，大约7天后出现三出复叶;在移栽I个月内长出三种叶形:单叶、三出复叶、正分化成三出复叶的单叶；挖出块茎观察，发现块茎明显增大，并相应处于三种成形阶段:不规则块状、圆球形、椭圆形，即移栽成功。2.根据权利要求1所述的半夏块茎的试管培养方法，其特征在于，所述步骤2中暗培养室培养的培养条件为:培养基MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.1?0.25mg/L在无光照条件下进行培养，诱导半夏的茎、叶形成带顶芽的小块茎丛。
【专利摘要】本发明公开了一种半夏块茎的试管培养方法，包括以下步骤：对半夏的幼嫩的叶和茎进行消毒和培养，培养基MS+BA？1.0mg/L+NAA0.1～0.25mg/L在无光照条件下进行培养，可诱导半夏的茎、叶形成带顶芽的小块茎丛。小块茎移栽一个月内长出单叶、三出复叶、正分化成三出复叶的单叶三种不同的叶形，块茎明显增大，并相应处于不规则块状、圆球形、椭圆形三种成形阶段。本发明是对保护野生半夏资源，降低栽培成本，实现人工集约化栽培，适应不断增长的市场需求的一种可行性尝试。
【IPC分类】A01H4/00, A01G1/00
【公开号】CN105660392
【申请号】CN201610010342
【发明人】杨跃文, 钱子刚, 刘小莉, 李国栋
【申请人】云南中医学院
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年1月8日