一种促进穿心莲种子(含贮藏后种子)发芽的处理方法
【专利摘要】本发明公开了一种促进穿心莲种子(含贮藏后种子)发芽的处理方法，属于植物种子萌发育苗技术领域，旨在解决穿心莲种子尤其是室温贮藏后种子发芽势和发芽率较难提高的技术问题。该方法包含以下主要步骤：(1)清洗种子；(2)使用不同浓度的赤霉素(GA3)和6?苄基腺嘌呤(6?BA)溶液浸泡种子；(3)使用不同浓度的聚乙二醇?6000(PEG?6000)溶液浸泡种子；(4)使用流水冲洗种子一定时间；(5)或不执行第(2)，(3)和(4)步，将步骤(1)的种子直接置于流水下冲洗一定时间。本发明可用于提高穿心莲种子尤其是室温贮藏后种子的利用率，简化贮藏技术和降低贮藏成本。
【专利说明】
一种促进穿心莲种子(含贮藏后种子)发芽的处理方法
技术领域
[0001] 本发明属于植物种子萌发育苗技术领域，涉及一种促进穿心莲种子(含贮藏后种 子)发芽的处理方法。
【背景技术】
[0002] 穿心莲(Andrographis paniculata(Burm.f · )Nees)是爵床科穿心莲属植物，原产 于南亚，中国引进后大规模使用，现已推广其进入美国药典。穿心莲的干燥地上部分作药 用，对于多种感染性疾病有效，市场需求量较大;研究发现，其提取物穿心莲内酯等，除具有 抗炎，保肝等活性外，对于艾滋病病毒等有一定抑制作用。
[0003] 在穿心莲的种植中，采用的是种子繁殖(春播)的方法。穿心莲种子外被蜡质，种皮 有一定厚度，有研究表明，其自身含有可能抑制发芽的物质。市售种子的质量不整齐，国内 的一项研究表明，其收集的22份不同种子样品中，有6份种子的发芽率在40%左右，13份种 子的发芽率在70%左右，仅有3份种子的发芽率能达到80%以上(何瑞等，2011)。另一项研 究表明，室温贮藏两年后的穿心莲种子发芽率为0 %，必须4°C冷藏(童家赞等，2012)。
[0004] 穿心莲的原产地和我国国内均开展了许多关于促进穿心莲种子萌发的研究(李玲 梅和李明，2011;童家赞等，2011;Bhattacharya S，et al.，2012;Talei D，et al.，2012)米 用高温层积，加速老化和空气等离子技术对提高发芽率有效，但需要恒温箱，干燥器和等离 子发生器等特殊设备。采用KN〇3或硫脲处理能提高发芽率，但农用KN〇3和硫脲能否替代试验 试剂还未有研究。传统采用的摩擦种皮的方法，因为摩擦的力度，磨破种皮的程度较难以把 握，不同试验的结果差异较大。所有试验研究对于穿心莲种子的发芽温度均有要求，一般为 25°C，在温度较低和较高时，发芽率均不理想(Kumar B，et al.，2011)，不符合实际生产中 气温变化大的特点。
[0005] 有文献显示（Rawat R and Vashistha DP，2012)，适量的GA3处理可以提高穿心莲 种子的发芽率，采用PEG-6000(潘春柳等，2013)对室温贮藏两年后的穿心莲种子进行处理， 使其发芽率达到20.5%。使用流水冲洗在于模拟雨水的作用，因植物种子总是在雨季发芽。 有文献(王宝龙等，2012)显示，流水冲洗能提高水曲柳种子的萌发率。而三者的结合使用， 尚未有报道。本研究证明GA 3，PEG-6000和流水冲洗结合处理能显著提高穿心莲种子的发芽 能力。
【发明内容】
[0006] 本发明要解决的技术问题是提供一种促进穿心莲种子(含贮藏后的种子)发芽的 处理方法，旨在解决(贮藏后）穿心莲种子发芽势低、发芽率低等问题，以提高(贮藏后）穿心 莲种子的发芽率及使用价值，减少种子浪费，简化发芽和贮藏技术并降低成本，以克服现有 技术问题的不足。
[0007] 本发明的技术方案包括以下步骤：
[0008] (1)将纯净成熟的穿心莲种子(含贮藏后的种子），用清水洗3次；
[0009] (2)置于含有不同浓度的赤霉素(GA3)和6-苄基腺嘌呤(6-BA)的溶液(水用市售纯 净水）中（含量分别为〇mg/L，50mg/L GA3,200mg/L GA3,50mg/L 6-BA，200mg/L 6-BA，50mg/L GA3+50mg/L 6_BA，50mg/L GA3+200mg/L 6_BA，200mg/L GA3+50mg/L 6_BA，200mg/L GA3+ 200mg/L 6-BA)，室温浸泡6小时；
[0010] (3)取出步骤（2)浸泡完的种子，用清水洗3次，置于浓度为4.3%或6.8%的TOG-6000 溶液中 ，室温浸泡 24 小时；
[0011] (4)取出步骤(3)浸泡完的种子，用清水洗3次，置于流水下（自来水，流量为每1000 粒种子使用180ml/小时;水回收)冲洗12或24小时，处理结束;发芽环境温度为室温；
[0012] (5)或不执行第(2)，（3)和(4)步，将步骤(1)的种子直接置于流水下（自来水，流量 为每1000粒种子使用180ml/小时；水回收)冲洗12，24，36或48小时，处理结束;试验发芽环 境平均温度为18°C，22°C，25°C和28°C (平均室温）。
[0013] 优选的，处理室室温在19-30°c间（正常播种季节-春季的室温即能满足要求）。 [0014] 优选的，所述步骤(2)中GA3溶液的浓度为50mg/L，步骤(3)中PEG-6000溶液的浓度 为6.8 %，步骤(4)中流水冲洗的时间为24小时。
[0015] 优选的，步骤(5)中发芽环境平均温度为22°C，25°C或28°C (不同时间，不同房间的 的温度，正常播种季节-春季的室温即能满足要求）。
[0016] 计算公式：
[0017]发芽势（％ )=处理结束后第72小时萌发的种子粒数/供试种子总粒数X 100% [0018]发芽率（％ )=处理结束后第7日萌发的种子粒数/供试种子总粒数X 100%
[0019] 本发明的有益效果：
[0020] 本发明采用GA3溶液，PEG-6000溶液和流水冲洗处理质量严重不良的穿心莲种子， 使其发芽势达41.9 %，发芽率达59.6 %。采用流水冲洗处理新产的穿心莲种子，发芽势可达 77.3%，发芽率可达94.1 %。采用流水冲洗处理室温贮藏两年的穿心莲种子，使其发芽势可 达34.3 %，而文献报道仅0.5 % ;发芽率可达71.3 %，文献报道仅20.5 %。
[0021] 本发明不使用消毒剂，且使用的药品易购买、流水能回收，对发芽环境和贮藏环境 温度要求低，易操作、低成本，经过本发明处理后，穿心莲种子具有发芽整齐、发芽率高的特 点，可提高穿心莲种子尤其是贮藏后种子或质量不良种子的利用率。
[0022] 为了进一步的说明本发明的有益效果，进行了表1所示的4因素3水平正交试验(每 组100粒种子，重复3次），获得不同引发处理下穿心莲种子的发芽指标表。由表2可知，6-BA 严重抑制了种子的萌发，将其排除应用。综合考虑发芽势最高，发芽率高，胚轴较长和苗较 重作为选择依据;选择流水冲洗24小时，PEG-6000浓度为6.8%，GA 3浓度为50mg/L的组合， 艮P9号处理。相比之下，其发芽指标显著优于另外的8组。
[0023]表1穿心莲种子发芽正交试验
[0024]
[0025] 表2正交试验结果分析
[0026]
【具体实施方式】
[0027]现结合如下实例对本发明作进一步的解释说明。
[0028] 实施例1
[0029]将所购买的质量严重不良的穿心莲种子进行引发处理，包括如下步骤：
[0030] (1)将净选后的穿心莲种子，用清水洗3次，除去泥沙等；
[0031] (2)置于50mg/L GA3溶液中，室温(平均20°C)浸泡6小时；
[0032] (3)取出浸泡完的种子，用清水洗3次，置于浓度为6.8%的PEG-6000溶液中，室温 (平均20 °C)浸泡24小时；
[0033] (4)取出浸泡完的种子，用清水洗3次，置于流水下（自来水，平均水温20°C，流量为 每1000粒种子使用180ml/小时；水回收)冲洗24小时，处理结束。纸床发芽(滤纸或吸水纸， 下同），暗培养，发芽环境温度为19_30°C间。
[0034]通过实施例2的处理，质量严重不良的穿心莲种子的发芽势可达到41.9%，发芽率 可达到59.6%，显著高于不处理组的23.5%和53.2%。
[0035] 实施例2
[0036]将新产的穿心莲种子进行引发处理，包括如下步骤：
[0037] (1)将纯净成熟的穿心莲种子，用清水洗3次；
[0038] (2)将洗净的种子直接置于流水下（自来水，平均水温25°C，流量为每1000粒种子 使用180ml/小时;水回收)冲洗48小时，处理结束。纸床，自然光，发芽环境平均温度为25°C。 [0039]通过实施例1的处理，新产穿心莲种子的发芽势可达到77.3% (对照50.0% )，发芽 率可达到94 · 1 % (对照89 · 2 % )，比文献（李玲梅和李明，2011; Bhattacharya S，et al ·， 2012;Rawat R and Vashistha DP，2012)提高，或达到使用特殊设备文献中（童家赞等， 2012)的最高水平。
[0040] 实施例3
[0041] 将室温贮藏两年(使用PE材质的自封袋保存，置储物柜中，不使用干燥剂或干燥设 备)的穿心莲种子进行引发处理，包括如下步骤：
[0042] (1)将纯净成熟的穿心莲种子，用清水洗3次；
[0043] (2)将洗净的种子直接置于流水下（自来水，水温19-30°C，流量为每1000粒种子使 用180ml/小时;水回收)冲洗36或48小时，处理结束。纸床，自然光，发芽环境平均温度22-28 Γ。
[0044] 通过实施例3的处理，贮藏两年的穿心莲种子发芽势可达16.7% (48小时，平均22 °C )和34.3 % (36小时，平均28 °C )，发芽率可达69.7 % (48小时，平均22°C )和71.3 % (36小 时，平均28°C)，均高于文献(潘春柳等，2013)显示的发芽势0.5%和发芽率20.5%。
【主权项】
1. 一种促进穿心莲种子(含贮藏后的种子)发芽的处理方法，其特征在于该方法包括以 下步骤： (1) 将纯净成熟的穿心莲种子(含贮藏后的种子），用清水洗3次； (2) 置于含有不同浓度的赤霉素(GA3)和6-苄基腺嘌呤(6-BA)的溶液(水用市售纯净水） 中（含量分别为〇 mg/L，50mg/L GA3,200mg/L GA3,50mg/L 6-BA，200mg/L 6-BA，50mg/L GA3+ 50mg/L 6_BA，50mg/L GA3+200mg/L 6_BA，200mg/L GA3+50mg/L 6_BA，200mg/L GA3+200mg/ L 6-BA)，室温浸泡6小时； (3) 取出步骤（2)中浸泡完的种子，用清水洗3次，置于浓度（质量/体积）为4.3%或 6.8%的PEG-6000溶液中，室温浸泡24小时； (4) 取出步骤(3)中浸泡完的种子，用清水洗3次，置于流水下（自来水，水温在15-30Γ 间，流量为每1000粒种子使用180ml/小时;水回收)冲洗12或24小时，处理结束； (5) 或不执行第（2)，（3)和(4)步，将步骤（1)的种子直接置于流水下（自来水，水温在 15-30°C间，流量为每1000粒种子使用180ml/小时;水回收)冲洗12,24,36或48小时，处理结 束。2. 如权利1要求所述的一种促进穿心莲种子(含贮藏后的种子)发芽的处理方法，其特 征在于所述步骤（1)中不使用任何消毒剂，步骤(2)中GA 3溶液的浓度为50mg/L，步骤(3)中 PEG-6000溶液的浓度为6.8%。3. 如权利1要求所述的一种促进穿心莲种子(含贮藏后的种子)发芽的处理方法，其特 征在于所述步骤(4)中流水冲洗的时间为24小时，步骤(5)中流水冲洗的时间为36小时或48 小时。4. 如权利1要求所述的一种促进穿心莲种子(含贮藏后的种子)发芽的处理方法，其特 征在种子处理室室温在19-30°C间，自来水温在15-30Γ间，结束后种子发芽环境温度在19-30°C间（即处理室室温），对光照无特殊要求（自然照光或暗培养均可）。
【文档编号】A01C1/02GK105993288SQ201610316914
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月10日
【发明人】余伯阳, 张剑, 李启青
【申请人】中国药科大学