专利名称：人脑和胸腺内的新基因－－709b1、hft02和hft05的制作方法
技术领域：
本发明涉及分子生物学一切生命活动的本质都是蛋白质之间的相互作用，这些复杂而有序的过程无不受制于基因的表达和调控。因此，要知道生命现象的奥秘，首先就得研究基因，就得破译隐藏在四种核苷酸的无限排列组合中的无穷信息。据推测，人类基因组约含有10万条不同的基因，而目前已知基因的数量远远少于未知基因，还有大部分基因及其功能不为人知。脑是人体内的高级中枢器官，也是功能最为奥秘的器官。因此，克隆脑内的基因将有助于对脑组织功能的认识。胸腺是人体内的重要免疫器官，克隆胸腺内的基因将有助于了解胸腺的功能。目前，从人脑和胸腺中得到的基因有几千种，还有大部分基因未被人们发现。
本发明的目的是采用分子生物学技术，从人脑cDNA文库和胸腺cDNA文库克隆新基因，得到了三个含有完整读框的新基因709B1、HFT02和HFT05。
本发明的技术方案1.两端锚定引物PCR扩增脑和胸腺的cDNA文库在50ul反应体系中，模板cDNA 200ng，dNTP各200μmol/L，Taq DNA聚合酶3U，接头引物为20pmol。反应参数为94℃ 30s，68℃退火5min，72℃延伸90s，35个循环。将PCR产物在1.2％琼脂糖凝胶中进行电泳。2.回收PCR产物从胶中回收PCR产物3.克隆用T4DNA连接酶1u，连接酶缓冲液1μl，Teasy载体25ng，片段6μl，终体积10μl，16℃连接过夜。将连接产物与100μl JM109感受态细胞混匀，冰上放20min，42℃水浴90s进行热休克，加400μl无氨苄青霉素的LB培养基37℃培养1h，铺含氨苄青霉素的琼脂糖平板，于37℃培养过夜。挑取单个的克隆加入5ml含氨苄青霉素的LB，于37℃摇床内震荡培养12～16h，提取质粒，用EcoRI酶切鉴定。4.测序阳性克隆进行测序PCR，质粒150ng，引物10pmol，Mix 4μl，终体积10μl，94℃ 5s，50℃ 10s，64℃ 4min，25个循环。将PCR反应产物用310 Genetic Analyzer自动测序。新基因709BI1 tctggaggag cagcttttta aaaggtcatt gtaattttaa cacattctta ctaaagaaat61 acatactatc agtgaccgat ctgaaactct gtaacaggtg aagggagact tacgatgaat121 atctgagcat aggttcgcta gcatcttcac actcatacat aaacattctt aaagggaata181 agaatgattt caaattcaaa acaacaacaa caacaaaaaa acaaatttgg tcaaactttc241 ttcatcatac cattcattgc tatcacaatc ctagtttgct ggtaggttta agaaaggaat301 agaaagtttt tgaaatcctt ttaatttcta ccagtcttag ggcctcttga gtaggccact361 ttggaagcaa actgattaaa cagcaccatc aagtccgtat ctcaacaaac cattgcataa421 tttctgtcaa tgttctcaaa ggttaaaaca agttgtatag aagaatatct ttcctccagg481 tggatggcac aggagctgac acaatgagtg acacgagttc tgtaagcttg gaagtgagcc541 ctggcagccg ggagacttca gctgccacac tgtcacctgg ggcgagcagc cgtggctggg601 atgacggtga cacccgcagc gagcacagct acagcgagtc aggtgccagc ggctcctctt661 ttgaggagct ggacttggag ggcgaggggc ccttagggga gtcacggctg gaccctggga721 ctgagcccct ggggactacc aagtggctct gggagcccac tgcccctgag aagggcaagg781 agtaacccat ggcctgcacc ctcctgcagt gcagttgctg aggaactgag cagactctcc841 agcagactct ccagccctct tcctccttcc tctgggggag gaggggttcc tgagggacct901 gacttcccct gctccagact tcttaaaaag atgctcctcc aga新基因HFT021 ggaatctgga ggaaaactga ccaggtggct tgttaacagt cagtgggaat ttgaaagaag61 aaaaccagat ggaacaagaa gactgggact tccccatcct gtggatccca ttgtaggaga121 gccagaatac tgccctatga gactgggaat gacaactgga agacttcagt ctggagtgaa181 tattctgcag gggttcaaag aggataaaag gaacaaagta actccagggt tatatttgaa241 ttatggaccc tggagttctt atgtaccgca ttatgactcc acatttatga atatcaagca301 aggataattc agatttaatc tatgcaatct atgggggaag actgatcttc caagcaattt361 cagcaaccat gagtttctgg ccccatgcca agattaccca tatgttatga cagataagtt421 tgcttggatg ttttaacaaa aggaggggat tccagg新基因HFT051 ggccgacttg gcaggtcaaa cacaaaacaa cgatgtacaa cagaggggaa atatgctctt61 ggtcaacaga ccttgcagaa aagactggct tgtttccaag tggatgagaa cgccagtgtg121 tggccagagt ccagcaatga ctgaccggcc ctggtcagag gctggcaggg accacagaag181 ggccaaggcg ctgccggggc tcatcccagg ctccaacccc aacctggaag cttgtggaca241 ccaggctctg tgcagcagct ccgtggctag cgtccagggc ccctggccac tactcccaaa301 tgcttctagt ccacccaccc ctggccagcc ccaaccttga catcactgtg gatgccatca361 gggtggtctg gttcacttat acaacatgat ccatgggaaa accccttccg t本发明的优点两端锚定引物多聚酶链反应法可快速克隆基因的全长cDNA。
权利要求
1.人脑和胸腺内的新基因——709B1、HFT02和HFT05，其特征是采用两端锚定引物PCR扩增人脑和胸腺的cDNA文库，再从胶中回收PCR产物，克隆，测序，共测得了三个含有完整读框的新基因。新基因709B11 tctggaggag cagcttttta aaaggtcatt gtaattttaa cacattctta ctaaagaaat61 acatactatc agtgaccgat ctgaaactct gtaacaggtg aagggagact tacgatgaat121 atctgagcat aggttcgcta gcatcttcac actcatacat aaacattctt aaagggaata181 agaatgattt caaattcaaa acaacaacaa caacaaaaaa acaaatttgg tcaaactttc241 ttcatcatac cattcattgc tatcacaatc ctagtttgct ggtaggttta agaaaggaat301 agaaagtttt tgaaatcctt ttaatttcta ccagtcttag ggcctcttga gtaggccact361 ttggaagcaa actgattaaa cagcaccatc aagtccgtat ctcaacaaac cattgcataa421 tttctgtcaa tgttctcaaa ggttaaaaca agttgtatag aagaatatct ttcctccagg481 tggatggcac aggagctgac acaatgagtg acacgagttc tgtaagcttg gaagtgagcc541 ctggcagccg ggagacttca gctgccacac tgtcacctgg ggcgagcagc cgtggctggg601 atgacggtga cacccgcagc gagcacagct acagcgagtc aggtgccagc ggctcctctt661 ttgaggagct ggacttggag ggcgaggggc ccttagggga gtcacggctg gaccctggga721 ctgagcccct ggggactacc aagtggctct gggagcccac tgcccctgag aagggcaagg781 agtaacccat ggcctgcacc ctcctgcagt gcagttgctg aggaactgag cagactctcc841 agcagactct ccagccctct tcctccttcc tctgggggag gaggggttcc tgagggacct901 gacttcccct gctccagact tcttaaaaag atgctcctcc aga新基因HFT021 ggaatctgga ggaaaactga ccaggtggct tgttaacagt cagtgggaat ttgaaagaag61 aaaaccagat ggaacaagaa gactgggact tccccatcct gtggatccca ttgtaggaga121 gccagaatac tgccctatga gactgggaat gacaactgga agacttcagt ctggagtgaa181 tattctgcag gggttcaaag aggataaaag gaacaaagta actccagggt tatatttgaa301 aggataattc agatttaatc tatgcaatct atgggggaag actgatcttc caagcaattt361 cagcaaccat gagtttctgg ccccatgcca agattaccca tatgttatga cagataagtt421 tgcttggatg ttttaacaaa aggaggggat tccagg新基因HFT051 ggccgacttg gcaggtcaaa cacaaaacaa cgatgtacaa cagaggggaa atatgctctt61 ggtcaacaga ccttgcagaa aagactggct tgtttccaag tggatgagaa cgccagtgtg121 tggccagagt ccagcaatga ctgaccggcc ctggtcagag gctggcaggg accacagaag181 ggccaaggcg ctgccggggc tcatcccagg ctccaacccc aacctggaag cttgtggaca241 ccaggctctg tgcagcagct ccgtggctag cgtccagggc ccctggccac tactcccaaa301 tgcttctagt ccacccaccc ctggccagcc ccaaccttga catcactgtg gatgccatca361 gggtggtctg gttcacttat acaacatgat ccatgggaaa accccttccg t
全文摘要
人脑和胸腺内的新基因—709B1、HFT02和HFT05,涉及分子生物学。人们现今已得到的人脑和胸腺内的基因有几千种,还有大部分新基因未被人们发现,本发明采用两端锚定引物多聚酶链反应(PCR)法,从正常人脑和胸腺的cDNA文库中克隆到了含有完整读框的新基因—709B1、HFT02和HFT05,使人们对自身基因的探索又加深了认识。
文档编号C12N15/11GK1335396SQ0011388
公开日2002年2月13日 申请日期2000年7月21日 优先权日2000年7月21日
发明者邓艳春, 药立波, 刘新平, 王吉村, 韩华, 王国华 申请人:中国人民解放军第四军医大学