绵羊副痘病毒的重组蛋白和由其制备的药物组合物的制作方法

文档序号:413318阅读:376来源:国知局
专利名称:绵羊副痘病毒的重组蛋白和由其制备的药物组合物的制作方法
技术领域
本发明涉及绵羊副痘病毒(Parapoxvirus ovis)(PPVO)的多核苷酸和重组蛋白及其单独地或与其它物质组合用于生产药物组合物的用途。
背景技术
已知通过免疫抑制可活化或再活化潜伏的和慢性持久的病毒感染,或反过来免疫系统抑制可能由潜伏病毒造成的急性病(例如在应激或施用可的松的情况下,免疫抑制导致潜伏的疱疹病毒感染以嘴唇小泡(lip vesicle)的形式复发)。还已知仅使用常规的低分子量抗病毒物质很难或根本不能治疗慢性持久的潜伏病毒感染。
已证明I类限制的细胞毒性T细胞能抑制肝细胞HBV基因在HBV转基因小鼠内表达,并证明这个过程是由TNF-α和IFN-γ导致的。
还已知在慢性持续性病毒感染的情况下,用其它病毒进行的超感染可产生抵抗所述慢性持续性病毒的抗病毒效应。已经证明这个效应依赖于由T细胞、天然杀伤细胞和巨噬细胞分泌的干扰素例如IFN-γ以及其它细胞因子和趋化因子例如TNF-α。
将BAYPAMUN用于对需要治疗的动物进行治疗性、病后调节性(metaphylactically)和预防性治疗,所述BAYPAMUN是用于诱导“旁特异性免疫”的药物产品,即用于诱导非特性免疫系统的药物产品。BAYPAMUN产自化学灭活的PPVO株系D1701(参见德国专利DE3504940)。所述灭活的PPVO在动物体内诱导抗最多样的病原体感染的非特异性保护。假定这种保护是通过各种体内自身防卫系统的机制介导的。这些机制包括诱导干扰素、活化天然杀伤细胞、诱导“集落刺激活性”(CSA)和刺激淋巴细胞增殖。对所述作用机制的更早期研究证实了对白细胞介素2和干扰素α的刺激。
用于生产上述药物组合物的方法基于在合适宿主细胞培养物中的病毒复制。
本发明的一个方面涉及包含本发明重组蛋白的颗粒状结构的用途。这些颗粒状结构可以是,例如融合蛋白、蛋白包被的颗粒或病毒样颗粒。
用于生产含有本发明重组蛋白的融合蛋白、蛋白包被的颗粒或病毒样颗粒的方法对于本领域技术人员是众所周知的Casal(Biotechnol.Genet.Eng.Rev.2001,1873-87)描述了杆状病毒表达系统用于产生病毒样颗粒的用途。Ellis(Curr.Opin.Biotechnol.1996,7(6)646-52)提供了生产病毒样颗粒和应用合适佐剂的方法。Roy(Intervirology 1996,39(1-2)62-71)提供遗传工程改造的颗粒病毒样结构和将其用作疫苗送递系统。生产融合蛋白的方法对本领域技术人员来说也是熟知的(Gaudin等人,Gen.Virol.1995,76154156;Hughson,Curr.Biol.1995,5(3)365-74Uhlen等人,Curr.Opin.Biotechnol.1992,3(4)363-369)。本领域技术人员也熟悉制备蛋白包被的小球体和纳米球体(nanosphere)(Arshady,Biomaterials 1993,14(1)5-15)。蛋白可附着在生物可降解的小球体(Cleland,Pharm Biotechnol.1997,101-43)或附着在其它聚合物小球体(Hanes等人,Pharm.Biotechnol.1995,6389-412)例如多糖上(Janes等人,Adv.DrugDeliv.Rev.2001,47(1)83-97)。
PPVO NZ2是另一种在以灭活形式对哺乳动物施用时表现出免疫刺激效应的副痘病毒属(Parapoxvirus)株系。
最新的现有技术描述了通过使用李斯特痘苗病毒(Vaccinialister virus)生成包含完整李斯特痘苗病毒基因组和各种PPVO基因组片段的重组病毒来构建代表大约95%的PPVO NZ2基因组的表达文库(Mercer等人,1997,Virology,229193-200)。为了构建文库,将具有平均大小为11.4kb的16个PPVO DNA片段插入到李斯特痘苗病毒基因组中。将各片段相对PPVO限制性内切核酸酶图谱进行作图,但未进行其他表征(

图1)。已发现大部分PPVO基因在被所述重组病毒感染的细胞内表达。作者也显示由某些表达文库中的重组病毒表达的所有PPVO蛋白全体能够提供对抗致命的PPVO的攻击的保护。通过免疫荧光和免疫沉淀已经证实了单个重组病毒的PPVO基因的表达(Mercer等人,1997,Virology,229193-200)。
为了鉴定负责PPVO疫苗接种活性的PPVO组分,应用了李斯特痘苗病毒/PPVO NZ2表达文库。
基于上述背景,需要开发基于PPVO的具有抗病毒和抗肿瘤功效以及具有在副免疫方面功效和其它需要的治疗作用的药物组合物。需要获取发挥其全部治疗作用同时显示较少副作用的药物组合物。进一步需要找到以大量和经济上有利的方式生产基于PPVO的药物组合物的方法。
通过系统地单独地或与其它来自PPVO的重组蛋白组合地使用所选择的PPVO重组蛋白制备用于治疗需要所述治疗的受试者的药物组合物已获得了这些需要的效果。
发明概述本发明涉及编码PPVO病毒基因组的多核苷酸、编码PPVO病毒基因组的多核苷酸片段和编码PPVO病毒基因组的单个可读框(ORFs)的多核苷酸。本发明也涉及长度至少为15个或30个或100个碱基对的所述多核苷酸的片段。本发明也涉及表达自上述多核苷酸的重组蛋白和长度至少为5个或10个或30个氨基酸的所述重组蛋白的片段,和重组蛋白或片段用于制备药物组合物的用途。
多核苷酸的“片段”,在本发明的含义内,应当理解为具有与全长(原始的)多核苷酸邻接部分相同核苷酸序列的多核苷酸。
“活性片段”,在本发明的含义内,应当是指那些PPVO基因组片段,当所述片段插入到李斯特痘苗病毒基因组中并在合适宿主中表达时,所述片段的表达产物已被证明具有根据本发明的药物学活性。
尽管已经描述了完整PPVO病毒用于生产抵抗PPVO攻击的疫苗的用途,但本发明仍涉及多核苷酸单独地或与其它物质组合地用于制备用于治疗各种疾病的改善的药物组合物的用途,所述核苷酸编码PPVO病毒基因组以及PPVO病毒基因组和选择的PPVO表达产物的选择的片段。
选择的PPVO基因组片段和其重组表达产物的系统使用使得可能生产除了活性成分外含有更少(和可能不含任何)的灭活成分(即,PPVO的多核苷酸和蛋白)的药物组合物。
与较不明确定义的灭活病毒材料生物学制剂相比,这些含有更少或不含任何额外灭活成分的药物组合物对医生和患者来说通常是优选的。进一步,通过发酵方法生产所述重组产物的可能性允许经济上有利的生产模式。对本领域技术人员来说众所周知的是可以获得经济上有利的生产模式,例如通过快速培养可能也对所用培养基要求较低的生产性生物(宿主生物)。可以有利地用作生产重组蛋白的宿主的微生物包括,例如,但不限于大肠杆菌(Escherichia coli)、芽孢杆菌属(Bacillus)物种、棒杆菌属(Corynebacterium)物种、链霉菌属(Streptomyces)物种以及酵母,例如啤酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)、假丝酵母属(Candida)物种、毕赤氏酵母属(Pichia)物种、汉逊氏酵母属(Hansenula)物种和丝状真菌,例如曲霉属(Aspergillus)物种、青霉属(Penicillium)物种和其它合适的微生物。
本发明的重组蛋白也可以产自表达所述目的蛋白的细胞系。这些细胞系可以是重组哺乳动物细胞系、重组昆虫细胞系(例如,使用杆状病毒转染系统)或其它合适的表达系统。通过对本领域技术人员已知的各种技术可以实现转染,其中一个是使用重组病毒例如在实施例中描述的痘苗病毒(Vaccinia virus)/PPVO重组体(VVOVs)。
发明描述本发明涉及长度至少为15个或30个或100个碱基对的PPVO基因组片段和由其表达的重组蛋白以及所述片段和重组蛋白用于制备药物组合物的用途。本发明也涉及单个PPVO基因(ORFs)和其表达产物以及它们单独地或相互组合地用于制备药物组合物的用途。
蛋白,在本发明的含义内,是指至少含有5个氨基酸的任意多肽。重组蛋白,在本发明的含义内,是指任何在细胞中表达的蛋白,通过使用重组DNA技术向所述细胞中导入了所述编码多核苷酸。
多核苷酸,在本发明含义内,是指包括多核糖核苷酸和/或多脱氧核糖核苷酸。
本发明的药物组合物可以用作用于治疗感染性和非感染性免疫缺陷的免疫治疗剂或免疫预防剂。它们也可用于治疗肿瘤疾病、癌症、病毒感染和与其相关的疾病,例如肝炎、乳头状瘤病、疱疹病毒感染、肝纤维化,用于防止或预防在应激(例如手术)后的感染性疾病,通过在手术或操作前(例如在植入人造肢体或牙齿的操作前)施用用于防止或预防传染性疾病,用于预防性和病后调节性治疗非病毒感染,用于愈合伤口和特别地用于加速伤口愈合过程和用于提高难愈合或非愈合(non-healing)伤口(例如股溃疡(ulcus cruris)),用于疾病例如多发性硬化、疣突和其它皮肤赘生物,用于变应性疾病,用于防止全身性变态反应的发生和用于局部性变态反应和用于改善健康,例如在老年人中,用于自身免疫病、慢性炎病,例如Crohn氏病、COPD和哮喘。本发明的目的是使用PPVO的多核苷酸和重组蛋白生产用于治疗上述人类和动物的状况和疾病的药物组合物。
本发明的病毒株系是PPVO NZ2和同源物,例如D1701、NZ7、NZ10和orf-11株系。使用这些株系后代的多核苷酸和重组蛋白也是可能的,所述株系通过传代和/或使用特殊细胞,例如WT-38、MRC-5或Vero细胞进行适应获得。
我们已经发现已鉴定的重组蛋白对治疗病毒疾病、癌症和其它疾病或状况是有效的,在所述疾病和状况中Th1型的免疫应答是有益的。获得的结果也暗示着PPVO基因产物或其部分保护表达肝炎病毒(例如乙型肝炎病毒,HBV或丙型肝炎病毒,HCV)的肝细胞免受来自在血液中循环的HBV或HCV特异性细胞毒性CD8+T细胞的免疫攻击,因为T细胞将不离开血流,如果它们的特异性抗原不再由肝窦内皮细胞(LSEC,可自动地从随着血液流经肝的T细胞中分离肝细胞)呈递的话。因而,我们期望拥有来源于ORFs 120-R3(碱基对122616-136025Bp,重组病毒VVOV82)的重组蛋白,所述蛋白能够在免疫刺激剂,例如细胞因子或包括上述蛋白的任何其它蛋白,施用给例如肝炎患者时下调或防止副作用例如环死性炎性肝疾病。
考虑到关于Th1型免疫诱导在状况和病症例如潜伏的和/或慢性病毒感染、增殖性疾病例如癌症中的影响和关于重组蛋白能力的知识,所述重组蛋白含有选择性诱导Th1免疫应答或局部免疫应答的PPVO基因产物或其部分,我们请求保护PPVO的多核苷酸和重组多肽以及含有PPVO的基因产物或其部分的重组蛋白用于生产用于人和动物的药物组合物的用途。所述重组蛋白由下列PPVO NZ2的可读框(ORFs)的产物或其部分制备的64r-96r(重组体VVOV285和VVOV330以及VVOV243和VVOV283)、18r-57(重组体VVOV97、VVOV96和VVOV245)、4r-14r(重组体VVOV215)。所述生组蛋白也可以通过ORFs120-R3(重组体VVOV82)的基因产物或其部分来制备。所述蛋白可以以任何组合方式制备和使用。
在本发明含义内的PPVO重组蛋白应当理解为来源于PPVO并且是在除了PPVO天然产生的系统外的同源或异源系统中表达的蛋白。PPVO重组蛋白的例子是在使用痘苗病毒载体和以成纤维细胞为宿主细胞或使用杆状病毒载体和以昆虫细胞为宿主细胞表达的PPVO蛋白。重组蛋白,在本发明的含义内,也可以在细菌细胞(例如,大肠杆菌、芽孢杆菌属物种、链霉菌属物种或在酵母(例如啤酒糖酵母、假丝酵母属物种、巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)、汉逊氏酵母属物种系统中产生。在这些情况下,通常将PPVO基因组的多核苷酸引入到各自宿主基因组中,这样PPVO基因可由宿主表达。PPVO的重组蛋白也可以由需要基因治疗的受试者来表达。
重组蛋白,在本发明含义内,也可以是含有PPVO来源的蛋白的重组病毒颗粒。重组蛋白,在本发明含义内,也可以以由PPVO来源蛋白形成或组装的病毒样颗粒形式存在。重组蛋白,在本发明含义内,也可以是含有PPVO基因产物的嵌合蛋白。
在本发明优选的实施方案中,所述重组蛋白附着在颗粒状结构上或是颗粒状结构的一部分。
在本发明的另一个优选的实施方案中,所述重组蛋白附着在融合蛋白上或是其一部分。
在本发明的另一个优选的实施方案中,所述重组蛋白附着在蛋白包被的颗粒上或是其一部分。
在本发明的另一个优选的实施方案中,所述重组蛋白附着在病毒样颗粒上或是其一部分。
颗粒状结构,例如颗粒状融合蛋白、蛋白包被的颗粒或病毒样颗粒可被单核细胞或巨噬细胞吞噬和加工。吞噬作用的过程增强了在本发明含义内使用的本发明重组蛋白的功效。
颗粒状结构,在本发明的含义内,是指以适合于药物应用的平均颗粒大小和其它特征的颗粒状形式存在的微粒物质。优选的颗粒状结构是,例如,融合蛋白、蛋白包被的颗粒或病毒样颗粒。
免疫调制活性被定义为对任何Th-1或Th-2型的细胞因子应答或这些细胞因子的任何效应功能(例如细胞溶解或抗病毒活性或体液应答)的局部性或全身性抑制和/或刺激和/或诱导或对MHC交叉呈递的调制。免疫调制活性也可以是诱导呈递抗原细胞的细胞凋亡或募集呈递抗原细胞。
本发明的核苷酸和重组蛋白可以与其它试剂和药物同时或顺序施用,例如与治疗疾病或支持性的药物同时或顺序施用,在例如癌症治疗的情况下与抗肿瘤剂或其它抗癌剂或/和抗凝剂或维生素、疼病缓解剂等同时或顺序施用。
所述核苷酸和重组蛋白可进行全身地(例如静脉内、皮下、肌内、皮内、腹膜内)、局部地(例如进入肿瘤)或经口(口服)施用。所述重组蛋白或其产物应该被适当地配制在例如非热原性溶液或用于静脉内注射(i.v.)的悬浮液中或用于植入的胶囊中或用于口服的胶囊中。本发明的药物组合物可以通过例如口、鼻、肛门、阴道等以及肠胃外施用。本发明药物组合物可以以悬浮液、溶液、浆、酏剂(elixirs)或聚合物中的合适制剂以及脂质体的形式存在。
本发明的重组蛋白也能用合适的重组细胞系和其它细胞系进行制备。可选择地,可通过使用病毒载体例如但不限于痘苗病毒(例如李斯特痘苗病毒)用携带所述重组基因的重组病毒感染非重组细胞系例如WI-38、MRC-5、Vero细胞。此外,其它合适的病毒可与其它合适的细胞组合使用(例如,使用痘苗病毒载体和作为宿主细胞的成纤维细胞或杆状病毒载体和作为宿主细胞的昆虫细胞)。以高细胞密度的发酵形式培养所述重组细胞培养物有利于获得有利的生产力和良好的总体加工性能。
本发明涉及纯化的和分离的具有SEQ ID 01序列的多核苷酸。本发明也涉及纯化的和分离的长度至少为15个或30个或100个核苷酸的多核苷酸,所述多核苷酸在严格条件下结合到SEQ ID 01的多核苷酸或其互补序列上。
严格条件,在本发明的含义内是指在65℃下在含有1mM EDTA、0.5M NaHPO4(pH7.2)、7%(w/v)SDS的缓冲液中的条件。
本发明也涉及纯化的和分离的含有SEQ ID 01的多核苷酸序列或编码相同氨基酸序列的多核苷酸序列的多核苷酸以及其长度至少为15个或30个或100个核苷酸的片段。本发明也涉及由这些多核苷酸编码的长度为5个或更多个氨基酸的重组蛋白。
本发明也涉及纯化的和分离的显示与前面段落中的多核苷酸具有至少99%、95%或90%或80%序列同源性的多核苷酸。
生物学序列同源性,在本发明的含义内应当理解为根据Needleman和Wunsch的算法(1970.J.Mol.Biol.48443-453)计算出来的两个生物学序列之间的同源性,所述算法使用了用于蛋白的BLOSUM62取代矩阵(Henikoff和Henikoff 1992.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8910915-10919)并且在比较多核酸序列时,对相同和不同碱基分别采用+4和-3罚分(penalties)。对于蛋白序列的比较,缺口生成罚分(gap creation penalty)和缺口延伸罚分(gapextension penalty)分别是8和2。对于多核苷酸序列比较,缺口生成罚分和缺口延伸罚分分别是20和3。
本发明也涉及纯化的和分离的所述PPVO基因组活性片段的多核苷酸,所述多核苷酸具有选自下列核苷酸序列的序列SEQ ID 01的122616-136025(VVOV82的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的31003-46845(VVOV96的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的24056-33789(VVOV97的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的10264-20003(VVOV215的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的82324-92502(VVOV243的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的47952-66263(VVOV245的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的89400-103483(VVOV283的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的74804-88576(VVOV285的PPVO插入片段)和SEQ ID 01的102490-108393(VVOV330的PPVO插入片段)。
本发明也涉及纯化的和分离的编码与前面段落中的PPVO基因组活性片段相同的氨基酸序列的多核苷酸和在严格条件下与上述PPVO基因组或其互补序列活性片段结合的长度至少为15个或30个或100个核苷酸的多核苷酸。
本发明也涉及与包含下列核苷酸的序列或其各自互补序列具有99%、95%或90%或80%序列同源性的多核苷酸SEQ ID 01的122616-136025(VVOV82的PPVO插入片段),SEQ ID 01的31003-46845(VVOV96的PPVO插入片段),SEQ ID 01的24056-33789(VVOV97的PPVO插入片段),SEQ ID 01的10264-20003(VVOV215的PPVO插入片段),SEQ ID 01的82324-92502(VVOV243的PPVO插入片段),SEQ ID 01的47952-66263(VVOV245的PPVO插入片段),SEQ ID 01的89400-103483(VVOV283的PPVO插入片段),SEQ ID 01的74804-88576(VVOV285的PPVO插入片段)和SEQ ID 01的102490-108393(VVOV330的PPVO插入片段)。
本发明也涉及纯化的和分离的多核苷酸,所述多核苷酸具有下列SEQ ID 01的核苷酸的序列3至539(ORF L1),781至449(ORF L2r),1933至1664(ORF L3r),3269至2790(ORF L4r),2799至3851(ORF L5),2962至3753(ORF L6),3784至3122(ORF L7r),4341至4129(ORF L8r),4904至4428(ORF 1ar),6517至4970(ORF 1r),8042至6684(ORF 2r),9989至8070(ORF 3r),11195至10062 ORF 4r),11493至11227(ORF 5r),11802至12038(ORF 6),12358至12080(ORF 7r),13980至12364(ORF 8r),14826至14053(ORF 9ar),15080至15394(ORF 10),16838至15423(ORF 11r),19021至16847(ORF 12r),19704至19156(ORF 13r),20314至19736(ORF 14r),20401至22101(ORF 15),22125至22940(ORF 6),23003至23866(ORF 17),26908至23873(ORF 18r),26926至27213(ORF 19),27626至27216(ORF 20r),29754至27616(ORF 21r),32217至29800(ORF 22r),33380至32418(ORF 23r),33602至33393(ORF 24r),34466至33612(ORF 25r),34735至34502(ORF 26r),35905至34739(ORF 27r),37194至35905(ORF 28r),37200至39248(ORF 29),41037至39229(ORF 30r),41374至42066(ORF 31),42336至41731(ORF 32r),42407至41997(ORF 33r),42410至43765(ORF 34),43770至43958(ORF 35),43980至44534(ORF 36),45727至44537(ORF 37r),45760至46557(ORF 38),46567至47568(ORF 39),47572至48303(ORF 40),48352至48621(ORF 41),49887至48634(ORF 42r),49917至50693(ORF 43),50719至51102(ORF 44),51059至51511(ORF 44a),51584至52591(ORF 45),52509至53066(ORF 46),53523至53023(ORF 47r),53607至57473(ORF 48),58070至57528(ORF 49r),57700至58662(ORF 50),59674至58673(ORF 51r),62089至59678(ORF 52r),62198至62881(ORF 53),62909至63862(ORF 55),63858至64271(ORF 56),64309至66831(ORF 57),67266至66799(ORF 58r),67803至67273(ORF 58ar),67915至68607(ORF 59),68624至70984(ORF 60),70994至72898(ORF 61),72938至73507(ORF 62),73540至74211(ORF 63),76120至74207(ORF 64r),76749至76186(ORF 65r),77698至76799(ORF 66r),79343至77709(ORF 67r),79816至79367(ORF 68r),80529至79858(ORF 69r),80774至80529(ORF 70r),82815至80788(ORF 71r),83835至82834(ORF 72r),83874至85583(ORF 73),85535至84402(ORF 74r),88096至85574(ORF 75r),87759至88667(ORF 76),88920至88642(ORF 77r),91652至88938(ORF 78r),91667至92674(ORF 79),93466至92681(ORF 80r),93761至93486(ORF 81r),94060至93788(ORF 82r),94238至94080(ORF 83r),94508至94242(ORF 84r),95571至94498(ORF 85r),96187至95600(ORF 86r),96202至97665(ORF 87),97915至97643(ORF 88r),98251至99537(ORF 89),99537至99974(ORF 90),100001至101140(ORF 91),101168至104650(ORF 92),106354至104795(ORF93r),107947至106400(ORF 94r),108256至107990 ORF 95r),108719至108300(ORF 96r),109679至108738(ORF 97r),109861至109682(ORF 98r),110830至10033(ORF 99r),110208至110417(ORF 100),110469至110651(ORF 100a),110915至111397(ORF 101),111419至111913(ORF 102),111949至112485(ORF 103),112593至113450(ORF 104),113323至112967 ORF 105r),113526至114152(ORF 106),114199至115236(ORF 107),115353至115787(ORF 108),115859至116551(ORF 109),116729至117523(ORF 110),117572至117114(ORF 111r),117423至118085(ORF 12),118968至118375(ORF 114r),118508至119119(ORF 115),119588至120202(ORF 116),120314至21231(ORF 117),121380至123920(ORF 118),121288至122256(ORF 119),122350至123924(ORF 120),123962至125566(ORF 121),125193至124591(ORF 122r),125689至123935(ORF 123r),123839至123297ORF 123ar),125652至126170(ORF 124),126121至125699(ORF 125r),126279至127769(ORF 126),127851至128408(ORF 127),128520至130076(ORF 128),130105至131700(ORF 129),131790至133283(ORF 130),133246至133920(ORF 131),133972至134370(ORF 132),134418至134693(ORF 133a),134402至134992(ORF R1),134853至134419(ORF R2r),135628至135897(ORF R3),136780至137112 ORF R4),和137558至137022(ORF R5r),所述多核苷酸编码列于表7的已鉴定的可读框(ORFs)。起始位置编号大于终止位置编号的本段落的ORFs由SEQ ID 01的互补序列编码。这些ORFs的名称以字母“r”结尾。本发明也涉及本段落序列的互补序列。
本发明也涉及编码与由前面段落中已鉴定的ORFs编码的相同的氨基酸序列的多核苷酸。本发明也涉及在严格条件下结合到已鉴定的ORFs上的长度至少为15个、30个或100个核苷酸的多核苷酸。本发明也涉及显示与前面段落中序列具有至少99%、95%或90%或80%序列同源性的或是前面段落序列的功能性变体的多核苷酸。
基因的功能性变体,在本发明的含义内,应当定义为与第一个基因至少99%或95%或90%或80%同源的且具有与所述第一个基因相似生物学功能的基因。基因的功能性变体也可是编码与第一个基因编码的(或其功能性变体编码的)相同的氨基酸序列的第二个基因,其中采用了遗传密码的简并性。基因的功能性变体也可是包含所述基因所拥有的相同序列的多核苷酸,然而所述多核苷酸更短(即通过在所述多核苷酸的一端或两端缺失一个或几个核苷酸)或所述多核苷酸在所述多核苷酸的相同部分的一端或两端具有额外的核苷酸。
蛋白的功能性变体,在本发明的含义内,应当定义为与第一个蛋白至少99%或95%或90%或80%同源的且具有与所述原始蛋白相似生物学功能的另一个蛋白。
本发明也涉及由本发明核苷酸编码的重组蛋白和长度至少为5个或7个或10个或30个氨基酸的所述蛋白的部分和片段。
本发明也涉及由本发明核苷酸编码的重组蛋白和长度至少为5个或7个或10个或30个氨基酸的所述蛋白的部分和片段,所述重组蛋白附着到载体蛋白或另一个载体上。将蛋白附着到载体蛋白上可提高或强化对所述蛋白的免疫应答,因而增强对受试者施用所述蛋白的治疗或预防效果。
本发明也涉及含有本发明多核苷酸的载体以及含有这些载体或本发明多核苷酸的细胞。
本发明也涉及本发明的重组蛋白和多核苷酸单独地或与至少一个本发明的其它重组蛋白或多核苷酸组合用于生产药物组合物的用途。
根据本发明的重组蛋白(或多核苷酸)的组合包括·至少两个由SEQ ID 01编码的重组蛋白的组合(或至少两个SEQID 01的多核苷酸片段的组合),·至少两个由PPVO基因组的相同活性片段编码的重组蛋白的组合,即两个或更多个由表3、表4、表5和表6的相同VVOV编码的重组蛋白(或至少两个来自PPVO基因组的相同活性片段(VVOV)的片段的组合),·至少两个重组蛋白的组合,所述蛋白由至少两个PPVO基因组的不同活性片段编码,即,来自表3、表4、表5和表6的不同VVOV(或至少两个来自至少两个PPVO基因组的不同活性片段(VVOVs)的片段的组合),或·至少两个由表7的ORFs编码的不同重组蛋白的组合(或至少2个具有列于表7的任一个ORFs的序列的多核苷酸的组合)。
本发明也涉及包含李斯特痘苗病毒及选择的PPVO基因组片段的重组病毒用于生产药物组合物的用途。
本发明也涉及本发明的重组蛋白和多核苷酸用于生产用于治疗病毒相关的疾病、病毒感染、非病毒感染、增殖性疾病、炎性疾病、变应性疾病和自身免疫病的药物组合物的用途。
病毒感染,在本发明含义内,应当理解为与人或动物身体病毒感染相关的疾病,例如肝炎、乳头状瘤病、疱疹病毒感染、肝纤维化性、HIV感染、AIDS和流感。
非病毒感染,在本发明的含义内,应当理解为与人或动物身体非病毒感染相关的疾病,例如分枝菌、支原体、阿米巴和疟原虫感染。
增殖性疾病,在本发明的含义内,应当理解为与增殖紊乱相关的疾病,例如癌症、白血病、疣突、肿瘤疾病和其它皮肤瘤。
炎性疾病,在本发明的含义内,应当理解为与急性或慢性炎症状况相关的疾病,例如皮肤或器官的炎症、Crohn氏病、COPD、哮喘,但也包括涉及伤口愈合的状况,例如股溃疡等。
变应性疾病,在本发明的含义内,应当理解为包括全身性和局部性变态反应。
自身免疫病,在本发明的含义内,应当被理解为包括系统性红斑狼疮、Sjogren氏综合征、桥本甲状腺炎、类风湿关节炎和青少年糖尿病和其它自身免疫病。
本发明也涉及包含李斯特痘苗病毒基因组和PPVO基因组片段的重组病毒用于生产药物组合物的用途。
本发明也涉及包含李斯特痘苗病毒基因组和至少一个在受试者中表达至少一个异源基因的异源基因的重组病毒例如用于预防和/或治疗目的的用途。
本发明也涉及包含李斯特痘苗病毒基因组和至少一个异源基因的重组病毒用于基因治疗的用途。
“基因治疗”,在本发明的含义内,应当理解为为了在所述受试者中获得预防性或治疗性效果的目的对受试者施用多核苷酸(和,如果需要,合适的佐剂或合适的载体)的行为。一般地,施用的多核苷酸在所述受试者体内表达并且表达的基因产物产生了预防性或治疗性效果。
本发明也涉及(a)包含重组多肽或所述多肽的功能性变体的颗粒状结构,所述重组多肽由SEQ ID NO1的多核苷酸的可读框(ORF)编码,(b)(a)中的颗粒状结构用于制备药物的用途,(c)(a)中的颗粒状结构用于制备用于治疗疾病的药物的用途,所述疾病为与病毒相关的疾病、病毒感染、非病毒感染、增殖性疾病、炎性疾病、变应性疾病和/或自身免疫病,(d)包含(a)中的颗粒状结构的药物组合物,和(e)包含(a)中的颗粒状结构的药物组合物,所述药物组合物用于治疗与病毒相关的疾病、病毒感染、非病毒感染、增殖性疾病、炎性疾病、变应性疾病和/或自身免疫病。
附图简述图1显示构成插入文库的DNA片段的基因组位置。各DNA片段的位置相对于PPVO NZ2的KpnI图谱进行显示(Mercer等人,1997,Virology,229193-200)。
实施例实施例1在活性VVOVs中确定整合的PPVO片段。
如下所述从李斯特痘苗病毒/PPVO重组体制备DNA使BK-KL 3A细胞在175cm2烧瓶(Becton Dickson Labware,Heidclberg,德国)中生长至汇合。用Mercer等人(1997,Virology,229193-200)的重组李斯特痘苗病毒/PPVO病毒(VVOV)以0.01-0.32的MOI(感染复数)感染细胞并且在37℃温育直至达到100%的CPE(致细胞病变效应)。将感染的细胞在-80℃下冷冻,如下所述解冻和加工对Vilcek等人(1994,J.Clin.Microbiol.322225-2231)的RNA提取方法进行修改。使用2ml PLG Heavy Eppendorf管(Eppendorf,Hamburg,德国)将0.5ml等分试样的细胞悬浮液与100μg蛋白酶K(Roche Molecular Biochemicals,Mannheim,德国)和50μl SDS(Sigma-Aldrich,Chemie GmbH,Taufkirchen,德国)一起于56℃下温育25分钟。加入0.5ml Roti-酚/氯仿(Carl RothGmbH,Karlsruhe,德国)并且将管子上下颠倒数次。在12000Xg的速度离心10分钟后,将上部相转移到新的管中并且加入2倍体积的乙醇(Merck Eurolab GmbH,Darmstadt,德国)和1/10体积的乙酸钠(Sigma-Aldrich,Chemie GmbH,Taufkirchen,德国)。将试剂混合数次并在-80℃下贮存3小时。将所述管子14000Xg离心30分钟,将上清液倾出并将沉淀风干5-10分钟。最后将DNA沉淀重新悬浮在30μl的无核酸酶的水中并在-20℃贮存直至使用。
用BioPhotometer 6131(Eppendorf,Hamburg,德国)在260/280nm.nm.处对DNA浓度进行分光光度测量。不同样品制剂的DNA产量变化范围从100ng/ml一直到1μg/ml。
李斯特痘苗病毒/PPVO重组体的整合片段末端侧翼区域的聚合酶链反应(PCR)进行如下使用3个不同的PCR扩增系统以扩增所述末端侧翼区域。各50μl的反应混合物含有100ng到1μg的重新悬浮的DNA并且以300nM的终浓度加入引物(表1)。在Mastercycler梯度(Eppendorf,Hamburg,德国)上进行扩增。
已通过使用2XReady-MixTMPCR Master Mix(1.5mM MgCl2)(ABGene,Hamburg,德国)对重组体VVOV285的3’侧翼区域进行了分析。向各反应物加入1μl BSA(MBI Fermentas GmbH,St.Leon-Rot,德国)。在94℃进行3分钟变性,接着进行30个循环(94℃进行30秒,58.7℃-65.3℃进行30秒,72℃进行1分钟)和72℃进行5分钟。
用PfuTurboDNA聚合酶(Stratagene,Amsterdam,荷兰)扩增重组体VVOV285的PPVO插入片段的5’侧翼区域、VVOV97的3’侧翼区域和VVOV215、VVOV243、VVOV245的两个末端的侧翼区域。用2.5U的酶、1.5mM MgCl2和200μM的各dNTP建立反应。在94℃变性3分钟,接着进行30个循环(94℃进行30秒,58.7℃-65.3℃进行30秒,72℃进行1分钟)和72℃进行5分钟。
用PlatiniumPfx DNA聚合酶(Life Technologies GmbH,Karlsruhe,德国)对VVOV97和VVOV82的5’侧翼区域、VVOV96和VVOV283的3’侧翼区域进行扩增。50μl的反应物包括1.25U聚合酶、1-1.5mM MgCl2和300μM的各dNTP。对于VVOV96(1X浓缩的)的5’侧翼区域和VVOV82(2X浓缩的)的3’侧翼区域的扩增必需使用另加的PCRx增强溶液(PCRx Enhancer Solution)。在94℃进行2分钟变性,接着进行30个循环(94℃进行15秒,54.6℃-60.7℃进行30秒,68℃进行1-2分钟)和68℃进行5-7分钟。
用1.5-2%的SeaKem LE琼脂糖(Biozym,Hessisch Oldendorf,德国)通过琼脂糖凝胶电泳对18μl的各扩增产物进行分析。在溴化乙锭溶液中染色20分钟后,在UV透射仪UVT-20M/W(Herolab,Wiesloch,德国)上显现所述DNA片段。
通过标准测序方法确定扩增的DNA片段的序列并且与公开的李斯特痘苗病毒胸苷激酶序列和PPVO NZ2的基因组序列进行比较以确定正确整合的PPVO NZ2序列。
表1李斯特痘苗病毒/PPVO NZ2重组体中整合片段的末端侧翼区域的PCR引物、扩增和测序
表1(续)
实施例2通过PPVO基因产物诱导干扰素γ和肿瘤坏死因子α在全血培养物中检验16个重组体诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)的能力。
用所述重组病毒刺激含有比例为1∶5的血液和RPMI培养基(LifeTechnologies GmbH,Karlsruhe,德国)的全血培养物。用纯的李斯特痘苗病毒和完整的PPVO制剂作为对照。所有制剂按最终1∶10稀释后使用。因为所述病毒不能单独诱导IFN-γ,所以用伴刀豆凝集素A(SIGMA,St.Louis,MO)一起进行刺激以确定IFN-γ。然后将细胞温育24小时(TNF-α)和/或72小时(IFN-γ)。通过TNF-α或IFN-γ特异性ELISA确定在细胞培养物上清液中的所述细胞因子浓度。当使用完整PPVO作为对照确定实验条件时发现这些时间点是最优的。
鉴定既可以诱导TNF-α又可以诱导IFN-γ分泌并因而可模拟完整PPVO的效果的5个活性重组病毒(VVOV96、VVOV97、VVOV243、VVOV285和VVOV330)是可能的。这些结果描述于表2。
表2分别用所述重组病毒或对照刺激血液细胞24小时后确定TNF-α。用所述重组病毒或对照刺激血液细胞72小时后确定IFN-γ。在促分裂原伴刀豆凝集素A存在的情况下进行刺激。显示了所述痘苗病毒对照的相对诱导百分比。因而,大于100%的值归因于所述PPVO片段的活性。活性PPVO片段用粗体标记。数据表示三种不同血液供体的平均值。
表3既可以诱导干扰素γ又可以诱导TNF-α的重组李斯特痘苗病毒/PPVO病毒列于栏1,对应的PPVO序列列于栏2且所有完整或部分包含于所述重组体中的可读框(ORFs)描述于栏3。
实施例3在肝窦内皮细胞(LSEC)中通过PPVO基因产物进行局部免疫调制我们已经建立了新的能够检验在不同系统(例如痘苗病毒)中表达的重组PPVO蛋白的肝保护特性的基于细胞的测定系统。这些测定系统使用原代鼠肝细胞,LSEC,所述细胞在决定在肝内是诱导免疫性还是耐受性中起中心作用。LSEC通过在MHC I类分子上向CD8+T细胞呈递外源性抗原的独特能力使得能够进行肝细胞的免疫监视,这是因为所述感染的肝细胞释放的病毒抗原可能被LSEC获取并被呈递给免疫系统的细胞。新的测定使得能够测量LSEC与负责坏死性炎症肝炎中组织破坏的CD8+T细胞抗原特异性相互作用的能力。
通过逐步过程从鼠肝中分离纯的LSEC群体,所述过程为用胶原酶A(0.05%)进行门静脉灌注、机械分散和在37℃的旋转水浴(245rpm)中进一步酶促消化40分钟、用装配有JE-6B转头和标准淘析室的Beckman Avanti J25I离心机进行梯度离心(三碘苯甲酰氨基葡萄糖1.089g/cm3)和离心淘析。如通过对内皮细胞特异性底物(乙酰化的低密度脂蛋白)的吸收所测量的,通过该方法分离的LSEC细胞群体通常达到约95-99%的纯度。将LSEC以每孔100,000个细胞的密度接种到I型胶原涂覆的24孔组织培养板上,并且进一步培养在补充有5%胎牛血清(特别地进行检验以不干扰测定系统)和2%谷氨酰胺的Dulbecco氏修饰的Eagle培养基上(Dulbecco’s modifiedEagle Medium)。分离后3天,当LSEC达到分裂期后和休眠状态时,我们检验LSEC向CD8+T细胞(卵清蛋白特异性的)呈递可溶性卵清蛋白的能力。使LSEC与1μM的卵清蛋白温育3小时(在前面已显示抗原剂量和时间最适于检测怀疑对抗原呈递产生影响的物质),洗涤并且与识别肽SIINFEKL的CD8+T细胞杂交瘤(200,000个细胞/孔)进行温育。SIINFEKL在H2b背景中被识别并且直接结合在所述MHC-I分子上。因而,其仍未被细胞加工。这使得能够区分LSEC的辅助功能(例如MHC-I表达)和抗原加工功能。
通过特异性夹心ELISA确定从T细胞中释放的IL-2的程度以测量CD8+T细胞的活化程度。
通过使用痘苗病毒表达的来源于PPVO的重组蛋白,我们已经能将肝保护性活性归因于单个克隆。为了能直接比较不同克隆影响通过LSEC的交叉呈递的能力,我们使用等量的“感染单位”。
我们发现LSEC非常有效地在MHC I类分子(kb)上将外源卵清蛋白交叉呈递给CD8+T细胞。令我们惊奇的是我们发现如果使LSEC与几种重组PPVO蛋白温育,我们会观察到与包含除活性成分以外的所有成分的模拟处理的对照相比,随后有超过60%的有效交叉呈递下调。在PPVO基因组内的几个区域具有免疫调节性质。特别是位于基因组3’末端称为82(降低43%)的区域显示负责PPVO对通过LSEC的交叉呈递的总体作用。进一步的区域(VVOV215、VVOV212、VVOV247和VVOV86)承担进一步的免疫调节潜能,尽管在更低的程度上(在交叉呈递方面大约降低30%)。进一步显示编码下调交叉呈递的蛋白的基因成簇排列。需要指出我们鉴定了两个编码提高交叉呈递的蛋白的基因簇(VVOV330、VVOV283、VVOV285、VVOV97和VVOV96)。然而,因为未知的原因上述蛋白的下调作用在PPVO对交叉呈递的活性中起主导作用。
我们的结果强烈地暗示着PPVO包含不同蛋白的混合物,所述蛋白以互补的方式作用以从肝细胞中消除乙型肝炎病毒同时保持肝的完整性并避免次于肝纤维化的长期损害。由于PPVO含有与抗炎剂IL-10(位于所述基因组的5’区域)高度同源的基因,所以我们想知道克隆82的有效下调作用是否是由于羊(ovine)IL-10的表达。这就假定在受体识别水平上鼠与羊的IL-10之间存在交叉反应性。我们还不能证明羊IL-10参与PPVO的免疫调节潜能。重组鼠IL-10没有显示任何对通过LSEC的交叉呈递的影响并且几个抗鼠和人IL-10的单克隆抗体不影响PPVO介导的交叉呈递的下调。我们总结出PPVO的免疫调节成分可能不是IL-10但可能是新的到目前仍未鉴定的介质。关于MHC-I交叉呈递下调的重组病毒的数据描述于表4,关于MHC-I交叉呈递刺激的重组病毒的数据描述于表5。
表4下调MHC-I交叉呈递的重组李斯特痘苗病毒/PPVO病毒指定于栏1中,相应的PPVO序列指定于栏2中且所有完全或部分地包含于重组体中的可读框(ORFs)描述于栏3。
表5刺激MHC-I交叉呈递的重组李斯特痘苗病毒/PPVO病毒指定在栏1中,相应的PPVO序列指定在栏2中且所有完全或部分地包含于重组体中的可读框(ORFs)描述于栏3。
实施例4在Aujeszky小鼠模型中确定李斯特痘苗病毒/PPVO重组体的免疫刺激活性我们也在Aujeszky小鼠模型中检验重组李斯特痘苗病毒/PPVONZ2病毒的活性,所述模型是用于确定各种免疫刺激剂(例如Baypamun,CpG寡核苷酸)活性的急性Suid疱疹病毒1疾病的致死攻击模型。
a)应用于小鼠的条件将NMRI小鼠(远交系(outbreed)HdsWinNMRI;雌性;重量18-20g;由Harlan/Winkelmann,Borchen,德国商业购得)在20-22℃下(空气湿度50-60%)置于可高压灭菌的在S2隔离栏里装有锯屑的聚碳酸酯板条箱中并且经历人工昼/夜节律(从6:30到18:30进行照明并且从18:30到6:30黑暗)。它们可自由获得食物和水。
b)攻击模型将每组含有10只小鼠的小鼠组用于检验。一组中所有动物给予相同的检测物质。
提供小鼠后将它们置于动物栏内2-3天。然后用PBS(LifeTechnologies GmbH,Karlsruhe,德国)将李斯特痘苗病毒/PPVO NZ2重组体稀释到滴度大致等于108TCID50/ml,并且热灭活(于58℃两次,1小时)。向每只小鼠腹膜内施用0.2ml这些溶液。
在处理后24小时,通过腹膜内施用用Hannover H2株系的假狂犬病病毒感染小鼠。为了这个目的,将所述病毒用PBS稀释到检验滴度为大约104TCID50/ml,并且施用0.2ml的这种悬浮液。
作为阴性对照,将一组小鼠用PBS处理然后进行感染。这组小鼠在感染后3-8天死亡。大部分用李斯特痘苗病毒/PPVO NZ2重组体VVOV215、VVOV245、VVOV285或VVOV330处理过的小鼠用假狂犬病病毒感染后能存活。用所述病毒感染后10天结束所述检验。
通过将PBS对照组中死亡的小鼠数与测试组中死亡的小鼠数进行比较以确定诱导的免疫刺激水平,并通过功效指数(EI)来定量。这个指数表示通过用要检验的物质进行的免疫刺激获得对Aujeszky病毒感染的致死性效应保护的小鼠的百分比比例。其可通过下式计算EI=(b-a)/b×100,
其中b是在对照组中的死亡小鼠百分比比例,并且a是在检验组中死亡小鼠的百分比比例。
使用卡方检验来进行统计学估计。这个检验揭示最小活性指数,表明在用检验物质处理的小鼠的死亡率与用PBS处理的小鼠死亡率间有显著差异。当至少有5只用于PBS对照组(每组n=6只小鼠)中检验的小鼠,且至少有7只用于n=10的PBS对照组中检验的小鼠在感染Aujeszky病毒后不能存活时,≥60%的活性指数是显著的。
在各情况下总共进行了3次独立的检验。Aujeszky小鼠模型中的李斯特痘苗病毒/PPVO NZ2重组体的检验显示如下情况令人惊奇地,在用李斯特痘苗病毒/PPVO NZ2重组体VVOV215、VVOV245、VVOV285或VVOV330处理小鼠后高于60%的平均活性指数表示免疫刺激。相比之下所有的其它李斯特痘苗病毒/PPVO NZ2重组体是无效的。所述数据简述于表6。
表6保护小鼠免受疱疹病毒诱导的死亡的重组李斯特痘苗病毒/PPVO病毒被指定在栏1中,相应的PPVO序列在栏2中并且所有完全或部分地包含于重组体中的可读框(ORFs)描述于栏3
表7绵羊副痘病毒(Parapox ovis)可读框的序列。名称以“r”结尾的ORFs在互补的DNA链上编码。在“从(from)”和“到(to)”栏的碱基对位置是相对于SEQ ID 01的。
序列表<110>Bayer AG,Leverkusen,Germany<120>绵羊副痘病毒的重组蛋白和由其制备的药物组合物<130>LeA 35228<160>1<170>PatentIn version 3.0<210>1<211>137560<212>DNA<213>绵羊副痘病毒(Parapoxvirus ovis)NZ2<220>
<221>CDS<222>(3)...(539)<223>ORFL1<220>
<221>CDS<222>(781)...(449)<223>ORFL2r<220>
<221>CDS<222>(1933)...(1664)<223>ORFL3r<220>
<221>CDS<222>(3269)...(2790)<223>ORFL4r<220>
<221>CDS<222>(2799)...(3851)<223>ORFL5<220>
<221>CDS<222>(2962)...(3753)<223>ORFL6<220>
<221>CDS<222>(3784)...(3122)<223>ORFL7r
<220>
<221>CDS<222>(4341)...(4129)<223>ORFL8r<220>
<221>CDS<222>(4904)...(4428)<223>ORF1ar<220>
<221>CDS<222>(6517)...(4970)<223>ORF1r<220>
<221>CDS<222>(8042)...(6684)<223>ORF2r<220>
<221>CDS<222>(9989)...(8070)<223>ORF3r<220>
<221>CDS<222>(11195)...(10062)<223>ORF4r<220>
<221>CDS<222>(11493)...(11227)<223>ORF5r<220>
<221>CDS<222>(11802)...(12038)<223>ORF6<220>
<221>CDS<222>(12358)...(12080)<223>ORF7r<220>
<221>CDS<222>(13980)...(12364)<223>ORF8r<220>
<221>CDS<222>(14826)...(14053)<223>ORF9ar
<220>
<221>CDS<222>(15080)...(15394)<223>ORF10<220>
<221>CDS<222>(16838)...(15423)<223>ORF11r<220>
<221>CDS<222>(19021)...(16847)<223>ORF12r<220>
<221>CDS<222>(19704)...(19156)<223>ORF13r<220>
<221>CDS<222>(20314)...(19736)<223>ORF14r<220>
<221>CDS<222>(20401)...(22101)<223>ORF15<220>
<221>CDS<222>(22125)...(22940)<223>ORF16<220>
<221>CDS<222>(23003)...(23866)<223>ORF17<220>
<221>CDS<222>(26908)...(23873)<223>ORF18r<220>
<221>CDS<222>(26926)...(27213)<223>ORF19<220>
<221>CDS<222>(27626)...(27216)<223>ORF20r
<220>
<221>CDS<222>(29754)...(27616)<223>ORF21r<220>
<221>CDS<222>(32217)...(29800)<223>ORF22r<220>
<221>CDS<222>(33380)...(32418)<223>ORF23r<220>
<221>CDS<222>(33602)...(33393)<223>ORF24r<220>
<221>CDS<222>(34466)...(33612)<223>ORF25r<220>
<221>CDS<222>(34735)...(34502)<223>ORF26r<220>
<221>CDS<222>(35905)...(34739)<223>ORF27r<220>
<221>CDS<222>(37194)...(35905)<223>ORF28r<220>
<221>CDS<222>(37200)...(39248)<223>ORF29<220>
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<221>CDS<222>(41374)...(42066)<223>ORF31
<220>
<221>CDS<222>(42336)...(41731)<223>ORF32r<220>
<221>CDS<222>(42407)...(41997)<223>ORF33r<220>
<221>CDS<222>(42410)...(43765)<223>ORF34<220>
<221>CDS<222>(43770)...(43958)<223>ORF35<220>
<221>CDS<222>(43980)...(44534)<223>ORF36<220>
<221>CDS<222>(45727)...(44537)<223>ORF37r<220>
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<221>CDS<222>(46567)...(47568)<223>ORF39<220>
<221>CDS<222>(47572)...(48303)<223>ORF40<220>
<221>CDS<222>(48352)...(48621)<223>ORF41<220>
<221>CDS<222>(49887)...(48634)<223>ORF42r
<220>
<221>CDS<222>(49917)...(50693)<223>ORF43<220>
<221>CDS<222>(50719)...(51102)<223>ORF44<220>
<221>CDS<222>(51059)...(51511)<223>ORF44a<220>
<221>CDS<222>(51584)...(52591)<223>ORF45<220>
<221>CDS<222>(52509)...(53066)<223>ORF46<220>
<221>CDS<222>(53523)...(53023)<223>ORF47r<220>
<221>CDS<222>(53607)...(57473)<223>ORF48<220>
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<221>CDS<222>(57700)...(58662)<223>ORF50<220>
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<220>
<221>CDS<222>(62198)...(62881)<223>ORF53<220>
<221>CDS<222>(62909)...(63862)<223>ORF55<220>
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<221>CDS<222>(64309)...(66831)<223>ORF57<220>
<221>CDS<222>(67266)...(66799)<223>ORF58r<220>
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<221>CDS<222>(67915)...(68607)<223>ORF59<220>
<221>CDS<222>(68624)...(70984)<223>ORF60<220>
<221>CDS<222>(70994)...(72898)<223>ORF61<220>
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<221>CDS<222>(73540)...(74211)<223>ORF63
<220>
<221>CDS<222>(76120)...(74207)<223>ORF64r<220>
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<221>CDS<222>(77698)...(76799)<223>ORF66r<220>
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<220>
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<221>CDS<222>(93466)...(92681)<223>ORF80r<220>
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<220>
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<220>
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<221>CDS<222>(110469)...(110651)<223>ORF100a<220>
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<221>CDS<222>(111949)...(112485)<223>ORF103<220>
<221>CDS<222>(112593)...(113450)<223>ORF104<220>
<221>CDS<222>(113323)...(112967)<223>ORF105r<220>
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<220>
<221>CDS<222>(114199)...(115236)<223>ORF107<220>
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<221>CDS<222>(115859)...(116551)<223>ORF109<220>
<221>CDS<222>(116729)...(117523)<223>ORF110<220>
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<221>CDS<222>(117423)...(118085)<223>ORF112<220>
<221>CDS<222>(118968)...(118375)<223>ORF114r<220>
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<221>CDS<222>(119588)...(120202)<223>ORF116<220>
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<221>CDS<222>(121380)...(123920)<223>ORF118
<220>
<221>CDS<222>(121288)...(122256)<223>ORF119<220>
<221>CDS<222>(122350)...(123924)<223>ORF120<220>
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<221>CDS<222>(123839)...(123297)<223>ORF123ar<220>
<221>CDS<222>(125652)...(126170)<223>ORF124<220>
<221>CDS<222>(126121)...(125699)<223>ORF125r<220>
<221>CDS<222>(126279)...(127769)<223>ORF126<220>
<221>CDS<222>(127851)...(128408)<223>ORF127<220>
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<220>
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<221>CDS<222>(133246)...(133920)<223>ORF131<220>
<221>CDS<222>(133972)...(134370)<223>ORF132<220>
<221>CDS<222>(134418)...(134693)<223>ORF133a<220>
<221>CDS<222>(134402)...(134992)<223>ORFR1<220>
<221>CDS<222>(134853)...(134419)<223>ORFR2r<220>
<221>CDS<222>(135628)...(135897)<223>ORFR3<220>
<221>CDS<222>(136780)...(137112)<223>ORFR4<220>
<221>CDS<222>(137558)...(137022)<223>ORFR5r<400>1ggatccgcgg cttcgcgggc ggcggccggc tcccgcggcg gctgagccgc ggtgccgcga 60cgaacgcgga ccaggagttc ctgcgggagg agctacggca gaggctggaa ctgctgaatg120
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权利要求
1.纯化的和分离的多核苷酸及其片段和功能性变体,所述多核苷酸具有SEQ ID 01的序列或其互补序列。
2.纯化的和分离的多核苷酸及其功能性变体,所述多核苷酸具有选自具有下列核苷酸编号的序列或其互补序列的序列SEQ ID 01的122616-136025(VVOV82的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的31003-46845(VVOV96的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的24056-33789(VVOV97的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的10264-20003(VVOV215的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的82324-92502(VVOV243的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的47952-66263(VVOV245的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的89400-103483(VVOV283的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的74804-88576(VVOV285的PPVO插入片段)、SEQ ID 01的102490-108393(VVOV330的PPVO插入片段)。
3.纯化的和分离的多核苷酸及其功能性变体,所述多核苷酸具有选自含有下列SEQ ID 01的核苷酸序列和其互补序列的序列3至539(ORF L1),781至449(ORFL2r),3269至2790(ORF L4r),2799至3851(ORF L5),2962至3753(ORFL6),3784至3122(ORF L7r),4341至4129(ORF L8r),8042至6684(ORF2r),9989至8070(ORF 3r),11493至11227(ORF 5r),11802至12038(ORF6),12358至12080(ORF 7r),13980至12364(ORF 8r),14826至14053(ORF 9ar),15080至15394(ORF 10),16838至15423(ORF 11r),19021至16847(ORF 12r),20314至19736(ORF 14r),20401至22101(ORF 15),22125至2940(ORF 16),23003至23866(ORF 17),26908至23873(ORF18r),26926至27213(ORF 19),27626至27216(ORF 20r),29754至27616(ORF 21r),32217至29800(ORF 22r),33380至32418(ORF 23r),33602至33393(ORF 24r),34466至33612(ORF 25r),34735至34502(ORF 26r),35905至34739(ORF 27r),37194至35905(ORF 28r),37200至39248(ORF29),41037至39229(ORF 30r),41374至42066(ORF 31),42336至41731(ORF 32r),42407至41997(ORF 33r),42410至43765(ORF 34),43770至43958(ORF 35),43980至44534(ORF 36),45727至44537(ORF 37r),45760至46557(ORF 38),46567至47568(ORF 39),47572至48303(ORF40),48352至48621(ORF 41),49887至48634(ORF 42r),49917至50693(ORF 43),50719至51102(ORF 44),51059至51511(ORF 44a),51584至52591(ORF 5),52509至53066(ORF 46),53523至53023(ORF 47r),53607至57473(ORF 48),58070至57528(ORF 49r),57700至58662(ORF 50),59674至58673(ORF 51r),63858至64271(ORF 56),64309至66831(ORF57),67266至66799(ORF 58r),67803至67273(ORF 58ar),67915至68607(ORF 59),68624至70984(ORF 60),70994至72898(ORF 61),72938至73507(ORF 62),73540至74211(ORF 63),76120至74207(ORF 64r),76749至76186(ORF 65r),77698至76799(ORF 66r),79343至77709(ORF 67r),79816至79367(ORF 68r),80529至79858(ORF 69r),80774至80529(ORF 70r),82815至80788(ORF 71r),83835至82834(ORF 72r),83874至85583(ORF 73),85535至84402(ORF 74r),88096至85574(ORF75r),87759至88667(ORF 76),91652至88938(ORF 78r),91667至92674(ORF 79),93466至92681ORF 80r),93761至93486(ORF 81r),94060至93788(ORF 82r),94238至94080(ORF 83r),94508至94242(ORF 84r),95571至94498(ORF 85r),96187至95600(ORF 86r),96202至97665(ORF87),97915至97643(ORF 88r),98251至99537(ORF 89),99537至99974(ORF 90),100001至101140(ORF 91),101168至104650(ORF 92),109679至108738(ORF 97r),109861至109682(ORF 98r),110830至110033(ORF99r),110208至110417(ORF 100),110469至110651(ORF 100a),110915至111397(ORF 101),111419至111913(ORF 102),111949至112485(ORF 103),112593至113450(ORF 104),113323至112967(ORF 105r),113526至114152(ORF 106),114199至115236(ORF 107),115353至115787(ORF 108),115859至116551(ORF 109),117572至117114(ORF111r),117423至118085(ORF 112),118968至118375(ORF 114r),118508至119119(ORF 115),119588至120202(ORF 116),120314至121231(ORF 117),121380至123920(ORF 118),121288至122256(ORF 119),122350至123924(ORF 120),123962至125566(ORF 121),125193至124591(ORF 122r),125689至123935(ORF 123r),123839至123297(ORF123ar),125652至126170(ORF 124),126121至125699(ORF 125r),126279至127769(ORF 126),127851至128408(ORF 127),128520至130076(ORF 128),136780至137112(ORF R4),及137558至137022(ORF R5r)。
4.重组蛋白或其功能性变体或其超过5个氨基酸的片段,所述重组蛋白由权利要求1、2或3中任一项的多核苷酸编码。
5.包含权利要求1、2或3的多核苷酸的载体。
6.包含权利要求5的载体或权利要求1、2或3的多核苷酸的细胞。
7.重组蛋白单独地或与至少一种其它重组蛋白组合用于生产药物组合物的用途,所述重组蛋白由选自下列多核苷酸的多核苷酸编码(a)权利要求1的多核苷酸,(b)权利要求2的多核苷酸,和(c)具有选自含有下列SEQ ID 01的核苷酸序列的序列的多核苷酸3至539(ORF L1),781至449(ORF L2r),1933至1664(ORF L3r),3269至2790(ORF L4r),2799至3851(ORFL5),2962至3753(ORF L6),3784至3122(ORF L7r),4341至4129(ORF L8r),4904至4428(ORF 1ar),6517至4970(ORF 1r),8042至6684(ORF 2r),9989至8070(ORF 3r),11195至10062ORF 4r),11493至11227(ORF 5r),11802至12038(ORF 6),12358至12080(ORF 7r),13980至12364(ORF 8r),14826至14053(ORF 9ar),15080至15394(ORF 10),16838至15423(ORF 11r),19021至16847(ORF12r),19704至19156(ORF 13r),20314至19736(ORF 14r),20401至22101(ORF 15),22125至22940(ORF 6),23003至23866(ORF 17),26908至23873(ORF 18r),26926至27213(ORF 19),27626至27216(ORF 20r),29754至27616(ORF 21r),32217至29800(ORF 22r),33380至32418(ORF 23r),33602至33393(ORF 24r),34466至33612(ORF 25r),34735至34502(ORF 26r),35905至34739(ORF 27r),37194至35905(ORF 28r),37200至39248(ORF 29),41037至39229(ORF 30r),41374至42066(ORF 31),42336至41731(ORF 32r),42407至41997(ORF 33r),42410至43765(ORF 34),43770至43958(ORF 35),43980至44534(ORF 36),45727至44537(ORF 37r),45760至46557(ORF 38),46567至47568(ORF 39),47572至48303(ORF40),48352至48621(ORF 41),49887至48634(ORF 42r),49917至50693(ORF 43),50719至51102(ORF 44),51059至51511(ORF44a),51584至52591(ORF 45),52509至53066(ORF 46),53523至53023(ORF 47r),53607至57473(ORF 48),58070至57528(ORF49r),57700至58662(ORF 50),59674至58673(ORF 51r),62089至59678(ORF 52r),62198至62881(ORF 53),62909至63862(ORF 55),63858至64271(ORF 56),64309至66831(ORF 57),67266至66799(ORF 58r),67803至67273(ORF 58ar),67915至68607(ORF 59),68624至70984(ORF 60),70994至72898(ORF 61),72938至73507(ORF 62),73540至74211(ORF 63),76120至74207(ORF 64r),76749至76186(ORF 65r),77698至76799(ORF 66r),79343至77709(ORF67r),79816至79367(ORF 68r),80529至79858(ORF 69r),80774至80529(ORF 70r),82815至80788(ORF 71r),83835至82834(ORF72r),83874至85583(ORF 73),85535至84402(ORF 74r),88096至85574(ORF 75r),87759至88667(ORF 76),88920至88642(ORF77r),91652至88938(ORF 78r),91667至92674(ORF 79),93466至92681(ORF 80r),93761至93486(ORF 81r),94060至93788(ORF82r),94238至94080(ORF 83r),94508至94242(ORF 84r),95571至94498(ORF 85r),96187至95600(ORF 86r),96202至97665(ORF87),97915至97643(ORF 88r),98251至99537(ORF 89),99537至99974(ORF 90),100001至101140(ORF 91),101168至104650(ORF92),106354至104795(ORF 93r),107947至106400(ORF 94r),108256至107990 ORF 95r),108719至108300(ORF 96r),109679至108738(ORF 97r),109861至109682(ORF 98r),110830至10033(ORF 99r),110208至110417(ORF 100),110469至110651(ORF100a),110915至111397(ORF 101),111419至111913(ORF 102),111949至112485(ORF 103),112593至113450(ORF 104),113323至112967 ORF 105r),113526至114152(ORF 106),114199至115236(ORF 107),115353至115787(ORF 108),115859至116551(ORF109),116729至117523(ORF 110),117572至117114(ORF 111r),117423至118085(ORF 12),118968至118375(ORF 114r),118508至119119(ORF 115),119588至120202(ORF 116),120314至21231(ORF 117),121380至123920(ORF 118),121288至122256(ORF119),122350至123924(ORF 120),123962至125566(ORF 121),125193至124591(ORF 122r),125689至123935(ORF 123r),123839至123297ORF 123ar),125652至126170(ORF 124),126121至125699(ORF 125r),126279至127769(ORF 126),127851至128408(ORF 127),128520至130076(ORF 128),130105至131700(ORF129),131790至133283(ORF 130),133246至133920(ORF 131),133972至134370(ORF 132),134418至134693(ORF 133a),134402至134992(ORF R1),134853至134419(ORF R2r),135628至135897(ORF R3),136780至137112ORF R4),及137558至137022(ORFR5r)所述其它重组蛋白由选自上述多核苷酸的多核苷酸编码。
8.包含一种或多种重组蛋白的药物组合物,所述重组蛋白由选自下列多核苷酸的多核苷酸表达(a)权利要求1的多核苷酸,(b)权利要求2的多核苷酸,和(c)具有选自含有下列SEQ ID 01的核苷酸序列的序列的多核苷酸3至539(ORF L1),781至449(ORF L2r),1933至1664(ORF L3r),3269至2790(ORF L4r),2799至3851(ORFL5),2962至3753(ORF L6),3784至3122(ORF L7r),4341至4129(ORF L8r),4904至4428(ORF 1ar),6517至4970(ORF 1r),8042至6684(ORF 2r),9989至8070(ORF 3r),11195至10062ORF 4r),11493至11227(ORF 5r),11802至12038(ORF 6),12358至12080(ORF 7r),13980至2364(ORF 8r),14826至14053(ORF 9ar),15080至15394(ORF 10),16838至15423(ORF 11r),19021至16847(ORF12r),19704至19156(ORF 13r),20314至19736(ORF 14r),20401至22101(ORF 15),22125至22940(ORF 6),23003至23866(ORF 17),26908至23873(ORF 18r),26926至27213(ORF 19),27626至27216(ORF 20r),29754至27616(ORF 21r),32217至29800(ORF 22r),33380至32418(ORF 23r),33602至33393(ORF 24r),34466至33612(ORF 25r),34735至34502(ORF 26r),35905至34739(ORF 27r),37194至35905(ORF 28r),37200至39248(ORF 29),41037至39229(ORF 30r),41374至42066(ORF 31),42336至41731(ORF 32r),42407至41997(ORF 33r),42410至43765(ORF 34),43770至43958(ORF 35),43980至44534(ORF 36),45727至44537(ORF 37r),45760至46557(ORF 38),46567至47568(ORF 39),47572至48303(ORF40),48352至48621(ORF 41),49887至48634(ORF 42r),49917至50693(ORF 43),50719至51102(ORF 44),51059至51511(ORF44a),51584至52591(ORF 45),52509至53066(ORF 46),53523至53023(ORF 47r),53607至57473(ORF 48),58070至57528(ORF49r),57700至58662(ORF 50),59674至58673(ORF 51r),62089至59678(ORF 52r),62198至62881(ORF 53),62909至63862(ORF 55),63858至64271(ORF 56),64309至66831(ORF 57),67266至66799(ORF 58r),67803至67273(ORF 58ar),67915至68607(ORF 59),68624至70984(ORF 60),70994至72898(ORF 61),72938至73507(ORF 62),73540至74211(ORF 63),76120至74207(ORF 64r),76749至76186(ORF 65r),77698至76799(ORF 66r),79343至77709(ORF67r),79816至79367(ORF 68r),80529至79858(ORF 69r),80774至80529(ORF 70r),82815至80788(ORF 71r),83835至82834(ORF72r),83874至85583(ORF 73),85535至84402(ORF 74r),88096至85574(ORF 75r),87759至88667(ORF 76),88920至88642(ORF77r),91652至88938(ORF 78r),91667至92674(ORF 79),93466至92681(ORF 80r),93761至93486(ORF 81r),94060至93788(ORF82r),94238至94080(ORF 83r),94508至94242(ORF 84r),95571至94498(ORF 85r),96187至95600(ORF 86r),96202至97665(ORF87),97915至97643(ORF 88r),98251至99537(ORF 89),99537至99974(ORF 90),100001至101140(ORF 91),101168至104650(ORF92),106354至104795(ORF 93r),107947至106400(ORF 94r),108256至107990 ORF 95r),108719至108300(ORF 96r),109679至108738(ORF 97r),109861至109682(ORF 98r),110830至10033(ORF 99r),110208至110417(ORF 100),110469至110651(ORF100a),110915至111397(ORF 101),111419至111913(ORF 102),111949至112485(ORF 103),112593至113450(ORF 104),113323至112967ORF 105r),113526至114152(ORF 106),114199至115236(ORF 107),115353至115787(ORF 108),115859至116551(ORF109),116729至117523(ORF 110),117572至117114(ORF 111r),117423至118085(ORF 12),118968至118375(ORF 114r),118508至119119(ORF 115),119588至120202(ORF 116),120314至21231(ORF 117),121380至123920(ORF 118),121288至122256(ORF119),122350至123924(ORF 120),123962至125566(ORF 121),125193至124591(ORF 122r),125689至123935(ORF 123r),123839至123297ORF 123ar),125652至126170(ORF 124),126121至125699(ORF 125r),126279至127769(ORF 126),127851至128408(ORF 127),128520至130076(ORF 128),130105至131700(ORF129),131790至133283(ORF 130),133246至133920(ORF 131),133972至134370(ORF 132),134418至134693(ORF 133a),134402至134992(ORF R1),134853至134419(ORF R2r),135628至135897(ORF R3),136780至137112 ORF R4),及137558至137022(ORFR5r)。
9.重组蛋白和/或多核苷酸用于生产药物组合物的用途,所述药物组合物用于治疗与病毒相关的疾病、病毒感染、非病毒感染、增殖性疾病、炎性疾病、变应性疾病和/或自身免疫病,所述重组蛋白由选自下列多核苷酸的多核苷酸编码(a)权利要求1的多核苷酸,(b)权利要求2的多核苷酸,和(c)具有选自含有下列SEQ ID 01的核苷酸序列的序列的多核苷酸3至539(ORF L1),781至449(ORF L2r),1933至1664(ORF L3r),3269至2790(ORF L4r),2799至3851(ORFL5),2962至3753(ORF L6),3784至3122(ORF L7r),4341至4129(ORF L8r),4904至4428(ORF 1ar),6517至4970(ORF 1r),8042至6684(ORF 2r),9989至8070(ORF 3r),11195至10062ORF 4r),11493至11227(ORF 5r),11802至12038(ORF 6),12358至12080(ORF 7r),13980至12364(ORF 8r),14826至14053(ORF 9ar),15080至15394(ORF 10),16838至15423(ORF 11r),19021至16847(ORF12r),19704至19156(ORF 13r),20314至19736(ORF 14r),20401至22101(ORF 15),22125至22940(ORF 6),23003至23866(ORF 17),26908至23873(ORF 18r),26926至27213(ORF 19),27626至27216(ORF 20r),29754至27616(ORF 21r),32217至29800(ORF 22r),33380至32418(ORF 23r),33602至33393(ORF 24r),34466至33612(ORF 25r),34735至34502(ORF 26r),35905至34739(ORF 27r),37194至35905(ORF 28r),37200至39248(ORF 29),41037至39229(ORF 30r),41374至42066(ORF 31),42336至41731(ORF 32r),42407至41997(ORF 33r),42410至43765(ORF34),43770至43958(ORF 35),43980至44534(ORF 36),45727至44537(ORF 37r),45760至46557(ORF 38),46567至47568(ORF 39),47572至48303(ORF40),48352至48621(ORF 41),49887至48634(ORF 42r),49917至50693(ORF 43),50719至51102(ORF 44),51059至51511(ORF44a),51584至52591(ORF 45),52509至53066(ORF 46),53523至53023(ORF 47r),53607至57473(ORF 48),58070至57528(ORF49r),57700至58662(ORF 50),59674至58673(ORF 51r),62089至59678(ORF 52r),62198至62881(ORF 53),62909至63862(ORF 55),63858至64271(ORF 56),64309至66831(ORF 57),67266至66799(ORF 58r),67803至67273(ORF 58ar),67915至68607(ORF 59),68624至70984(ORF 60),70994至72898(ORF 61),72938至73507(ORF 62),73540至74211(ORF 63),76120至74207(ORF 64r),76749至76186(ORF 65r),77698至76799(ORF 66r),79343至77709(ORF67r),79816至79367(ORF 68r),80529至79858(ORF 69r),80774至80529(ORF 70r),82815至80788(ORF 71r),83835至82834(ORF72r),83874至85583(ORF 73),85535至84402(ORF 74r),88096至85574(ORF 75r),87759至88667(ORF 76),88920至88642(ORF77r),91652至88938(ORF 78r),91667至92674(ORF 79),93466至92681(ORF 80r),93761至93486(ORF 81r),94060至93788(ORF82r),94238至94080(ORF 83r),94508至94242(ORF 84r),95571至94498(ORF 85r),96187至95600(ORF 86r),96202至97665(ORF87),97915至97643(ORF 88r),98251至99537(ORF 89),99537至99974(ORF 90),100001至101140(ORF 91),101168至104650(ORF92),106354至104795(ORF 93r),107947至106400(ORF 94r),108256至107990 ORF 95r),108719至108300(ORF 96r),109679至108738(ORF 97r),109861至109682(ORF 98r),110830至10033(ORF 99r),110208至110417(ORF 100),110469至110651(ORF100a),110915至111397(ORF 101),111419至111913(ORF 102),111949至112485(ORF 103),112593至113450(ORF 104),113323至112967 ORF 105r),113526至114152(ORF 106),114199至115236(ORF 107),115353至115787(ORF 108),115859至116551(ORF109),116729至117523(ORF 110),117572至117114(ORF 111r),117423至118085(ORF 12),118968至118375(ORF 114r),118508至119119(ORF 115),119588至120202(ORF 116),120314至21231(ORF 117),121380至123920(ORF 118),121288至122256(ORF119),122350至123924(ORF 120),123962至125566(ORF 121),125193至124591(ORF 122r),125689至123935(ORF 123r),123839至123297ORF 123ar),125652至126170(ORF 124),126121至125699(ORF 125r),126279至127769(ORF 126),127851至128408(ORF 127),128520至130076(ORF 128),130105至131700(ORF129),131790至133283(ORF 130),133246至133920(ORF 131),133972至134370(ORF 132),134418至134693(ORF 133a),134402至134992(ORF R1),134853至134419(ORF R2r),135628至135897(ORF R3),136780至137112 ORF R4),及137558至137022(ORFR5r)且所述多核苷酸选自上述核苷酸组。
10.重组病毒用于生产药物组合物的用途,所述重组病毒包含李斯特痘苗病毒基因组和PPVO基因组的片段。
11.重组病毒在受试者中表达至少一个异源基因的用途,所述重组病毒包含李斯特痘苗病毒基因组和至少一个异源基因。
12.重组病毒用于基因治疗的用途,所述重组病毒包含李斯特痘苗病毒基因组和至少一个异源基因。
13.颗粒状结构,所述颗粒状结构包含由SEQ ID NO1多核苷酸的可读框(0RF)编码的重组多肽或所述重组多肽的功能性变体。
14.权利要求13的颗粒状结构用于制备药物的用途。
15.权利要求13的颗粒状结构用于制备药物的用途,所述药物用于治疗病毒相关的疾病、病毒感染、非病毒感染、增殖性疾病、炎性疾病、变应性疾病和/或自身免疫病。
16.包含权利要求13的颗粒状结构的药物组合物。
17.包含权利要求13的颗粒状结构的药物组合物,所述药物组合物用于治疗病毒相关的疾病、病毒感染、非病毒感染、增殖性疾病、炎性疾病、变应性疾病和/或自身免疫病。
全文摘要
本发明涉及编码PPVO病毒基因组的多核苷酸、编码PPVO基因组的多核苷酸的片段和编码单个PPVO病毒基因组可读框(ORFs)的多核苷酸。本发明也涉及表达自上述多核苷酸的重组蛋白和所述重组蛋白的片段,且涉及所述重组蛋白或片段用于制备药物组合物的用途。
文档编号C12N5/10GK1741816SQ02830200
公开日2006年3月1日 申请日期2002年12月17日 优先权日2002年12月17日
发明者O·韦伯, S·M·弗里德里希斯, A·西格林, T·施拉普, A·A·默瑟, S·B·弗勒明, H·-D·沃尔克 申请人:拜耳医药保健股份公司
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