专利名称：网织红细胞快速染色液的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种细胞染色液。
背景技术：
目前对网织红细胞的检查主要一是新亚甲蓝染色法新亚甲蓝盐水溶液 是一种非荧光超活性染料，可以沉淀网织红细胞内残存的RNA,试剂稳定，为 WH0推荐方法，但因新亚甲蓝染料需要进口，且价格昂贵，国内实验室极少应 用；二是煌焦油蓝盐水溶液法是国内常用染色法 一般使用2%煌焦油蓝染 色液，染色液与血液比例一般为1: 1,染色时间为20~30分钟，用Miller 窥盘法或18° x4扇形窥盘法计数1000个红细胞中的网织红细胞，以百分比 表示，煌焦油蓝染色法操作简单方便，成本低，但因其染料沉渣多，易褪色， 染色时间长，背景不清晰，并且易受变性珠蛋白小体、HbH包涵体干扰，对实 验的精密度和准确度影响很大。
发明内容
本发明的目的是提供一种网织红细胞快速染色液。
本发明的目的是通过如下方式实现的 一种网织红细胞快速染色液，由 下列重量百分比的组分组成
煌焦油蓝0.5-1.5% 枸橼酸钠0.2-0.6% 瑞氏快速染液0.5-1.5% 甲醇2.5-4.5% 生理盐水92-96%。
本发明具有如下的有益效果，该染色液具有染色时间短、沉渣极少、视 野清晰、背景明亮、不易褪色、有效期长、准确度高、精密度好，有效期长 的特点。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明
3取煌焦油蓝1.0g、枸橼酸钠O. 4g、瑞氏快速染液O. 8ml、甲醇5. Oml、 生理盐水94. 2ml。
将上述组分物充分溶解，配成的网织红细胞快速染色液，有效期5年。 该方法的机理如下煌焦油蓝(Brilliant cresyl blue)是一种活体染 色剂，溶于甲醇、丙酮、冰乙酸和水，不溶于苯和乙醚，最大吸收波长622nm。 分子式为C17H21C1N40，分子量为332.83; RNA是由一个一个核苷酸 (nucleotide)头尾相连而形成的，平均长度大约为2000个核苷酸，单个
核苷酸是由含氮有机碱(称碱基)、戊糖(即五碳糖)和磷酸三部分构成的， RNA分子的功能多样，种类较多，主要有信使RNA、核蛋白体RNA、转运RNA、 小核RNA及核不均一 RNA等。具有碱性着色基团(带正电荷)的煌焦油蓝可 与网织红细胞RNA的磷酸基(带负电荷)结合，使RNA胶体间的负电荷减少 而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或网状结构。枸橼酸钠是一种优质抗凝 剂，主要作用是使网织红细胞染色时血液不凝固，红细胞散在分布，并使各 种细胞能充分着色。瑞氏快速染液主要由碱性染料美蓝(Methvlem blue)和 酸性染料伊红(EostmY)组成。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产 物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊 红钠盐相反。伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部 分为酸性，故称伊红为酸性染料。它是一种快速的血涂片染色剂，没有染料 沉渣，主要作用是使网织红细胞染色时红细胞能着色；因所加瑞氏快速染液 份量较少，白细胞不能着色；使网织红细胞染色具有沉渣极少、视野清晰、 背景明亮的特点。甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态，并增 加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液 中的水，使染色液升温，加速染色反应，此外甲醇还有一定的防腐作用；因
此甲醇有使网织红细胞迅速着色，不易褪色，并且有使试剂稳定，不长细菌 的作用。
权利要求
1、一种网织红细胞快速染色液，由下列重量百分比的组分组成煌焦油蓝0.5-1.5％枸橼酸钠0.2-0.6％瑞氏快速染液0.5-1.5％甲醇2.5-4.5％生理盐水92-96％。
全文摘要
本发明公开了一种网织红细胞快速染色液，由下列重量百分比的组分组成煌焦油蓝0.5-1.5％、枸橼酸钠0.2-0.6％、瑞氏快速染液0.5-1.5％、甲醇2.5-4.5％、生理盐水92-96％。本发明具有如下的有益效果，该染色液具有染色时间短、沉渣极少、视野清晰、背景明亮、不易褪色、有效期长、准确度高、精密度好的特点。
文档编号C12Q1/04GK101671719SQ20091004453
公开日2010年3月17日 申请日期2009年10月14日 优先权日2009年10月14日
发明者刘志贤 申请人:湘潭市第一人民医院