专利名称：通过检测叶酸代谢障碍预防脑卒中发生的方法
技术领域：
本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种通过检测叶酸代 谢障碍预防脑卒中发生的方法。
背景技术：
中国卫生部2007年统计信息显示，导致中国公众死亡的疾病中，脑血管病排在第 一位，其中脑卒中(俗称脑中风)是脑血管病最常见类型。脑卒中大致可以分为两大类，即 缺血性脑卒中(俗称脑梗死)和出血性脑卒中(俗称脑溢血)，其中缺血性脑卒中占所有脑 卒中的80% 85%。脑卒中已经成为中老年人致死、致残的首因，这不仅是患者本人及其 家庭的悲剧，也是全社会的沉重负担，更是我国目前面临的一个重大公共卫生问题。由于目前脑卒中尚无有效的治疗方法，因而其预防显得尤为重要，而有效的一级 预防是降低脑卒中负担的最佳途径。脑卒中的一级预防指预防脑卒中首发，即在脑卒中尚 未发生时采取针对危险因素(病因)的预防措施，其内容包括进行危险因素的识别和控制， 从而达到使脑卒中不发或迟发的目的。近年来，人们开始注意同型半胱氨酸与脑卒中的联系。大量的临床研究和流行病 学调查表明，轻度到中度的高同型半胱氨酸血症(HHcy)是导致脑卒中的一个新的独立危 险因素。高同型半胱氨酸血症诱发脑卒中的机制主要与其诱导动脉粥样硬化和血栓形成有 关。同型半胱氨酸作为脑卒中危险性的新指标，与传统指标相比具有更高的应用价值，其原 因是轻中度的高同型半胱氨酸血症可以通过积极干预得到很好的预防和纠正，因此对脑卒 中的一级预防具有重大意义。血浆同型半胱氨酸水平同时受遗传与环境因素的影响。MTHFR基因突变导致叶酸 代谢的关键酶-MTHFR酶活性降低，引起叶酸代谢障碍，从而导致Hcy代谢障碍并引发Hcy 水平轻中度升高，是导致高同型半胱氨酸血症的主要遗传因素。尤其是在叶酸水平较低时， MTHFR基因突变对Hcy的影响更为显著。环境因素中最主要的就是营养因素。营养因素主 要由于膳食中叶酸、维生素B12和维生素B6缺乏。叶酸、VitB12和VitB6作为辅酶参与Hcy 代谢，当这三者摄入缺乏时(特别是叶酸)，可引起Hcy水平升高。
发明内容
本发明提供一种通过检测叶酸代谢障碍预防脑卒中发生的方法和相应的检测试剂盒。通过检测叶酸代谢障碍预防脑卒中发生的方法为采集受检者的口腔粘膜细胞，提 取其基因组DNA，对其基因组DNA的MTHFR基因上677C-T位点多态性进行检测，确定其是否 发生基因突变而导致叶酸代谢的关键酶-MTHFR酶活性降低，如果其发生基因突变则对受 检者进行日常小剂量叶酸干预，即每日补充叶酸0. 4-0. 8mg,补充其他B族维生素干预，即 每日补充维生素B122. 4 μ g、维生素B6ang、维生素B21. 8mg。该试剂盒包括检测MTHFR基因上677C-T位点多态性的特异性引物对及特异性荧光探针对，Taq酶，dNTP混合液，MgCl2溶液，反应缓冲液，去离子水。本试剂盒中所述的特异性引物和荧光探针对于本领域的普通技术人员来说是能 够轻易完成设计的，特异性引物和荧光探针对可用常规的DNA合成技术进行合成。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下列实施例中未注明具体条件的实验 方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。实施例检测试剂盒的使用步骤1:DNA模板的抽取用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组DNA。步骤2 荧光定量PCR反应使用检测试剂盒中的荧光定量PCR套装，进行荧光定量PCR反应，反应的体系为总 体积10 μ 1，包含浓度为20ng/ μ 1的DNA模板2 μ 1、1 μ 1 IOX荧光定量PCR反应缓冲液、 0. 1 μ 1 25mM dNTP 混合液、0. 6 μ 1 25mMMgCl2 溶液、0. 025 μ 1 (5units/ μ 1) Taq DNA 聚合 酶、20 μ M的有义引物和反义引物各0. 225 μ 1、10 μ M的带VIC荧光探针和带FAM荧光探针 各0. 25μ 1，去离子水5. 325 μ 1。在PCR扩增仪上进行反应，反应条件为50°C、2分钟，95°C、10分钟，进行60个循环 的95°C、30秒，60°C、1分钟。反应结束后在荧光定量PCR仪上读取样品荧光量。步骤4:基因型分析根据试剂盒使用说明书标示的基因分型图示对SNP位点进行基因型分析。熟悉荧光定量PCR技术的本领域技术人员能够通过辨识荧光定量PCR仪上显示 的最终样品荧光量，根据不同序列探针荧光信号的强弱即可确定所检测的SNP位点的基因 型。
权利要求
1.一种预防脑卒中的方法，其特征在于采集受检者的口腔粘膜细胞，提取其基因组 DNA，对其基因组DNA的MTHFR基因上677C-T位点多态性进行检测，确定其是否发生基因突 变而导致叶酸代谢的关键酶-MTHFR酶活性降低，如果其发生基因突变则对受检者进行日 常小剂量叶酸干预，即每日补充叶酸0. 4-0. 8mg,补充其他B族维生素干预，即每日补充维 生素B122. 4 μ g、维生素B6ang、维生素B21. 8mg。
2.一种检测检测叶酸代谢障碍的试剂盒，包括特异性引物对及特异性荧光探针对，Taq 酶，dNTP混合液，MgCl2溶液，荧光定量PCR反应缓冲液和去离子水，其特征在于所述的特 异性引物对及特异性荧光探针对是针对MTHFR基因上677C-T位点多态性设计的。
全文摘要
本发明公开了一种通过检测叶酸代谢障碍预防脑卒中发生的方法和检测试剂盒，通过采集受检者的口腔粘膜细胞，提取其基因组DNA，对其基因组DNA的MTHFR基因上677C-T位点多态性进行检测，确定其是否发生叶酸代谢障碍，对发生基因突变受检者进行日常叶酸和维生素B族小剂量干预，从而达到预防脑卒中的发生。
文档编号C12Q1/68GK102108387SQ20091020049
公开日2011年6月29日 申请日期2009年12月23日 优先权日2009年12月23日
发明者冯哲民, 贺宪民, 邹祖烨 申请人:上海主健生物工程有限公司