专利名称：一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列。
背景技术：
胶原是一种广泛存在于动物的结构蛋白质，是皮肤、软骨及结缔组织的主要成分。 胶原分子是由3条螺旋型的肽链相互盘绕而成。目前，胶原蛋白已广泛地应用于医药工业、 食品工业、日用化学品工业等领域。目前，胶原产品主要来源于动物组织，制备过程复杂，环境污染严重。此外，异种来 源的胶原蛋白用于人体时还存在以下几方面问题动物来源的胶原蛋白制备时可能受动物 病毒的污染，人体应用存在感染传染病的潜在危险；异种蛋白应用可能导致免疫排斥反应， 导致使用部位的无菌性炎症或严重的过敏反应；人体移植后吸收率高，不能持续维持效果， 需要重复注射。上述原因限制了异种胶原在人体中的应用。来源于人体的重组胶原蛋白，氨基酸组成和结构明确，可以改进动物体胶原蛋白 的水溶性、免疫排异性、稳定性、成胶性、吸收性等特性，生产不受原料的限制，因此应用领 域更加广阔。E ·武奥里奥等在其申请的发明专利(96199541.6)公开了一种新型人胶原 蛋白、编码这些新型胶原蛋白的多聚核苷酸序列以及这些新型蛋白和多聚核苷酸在诊断和 治疗疾病方面的用途。本发明还涉及IX型胶原蛋白与II型和/或X I型胶原蛋白的融 合蛋白，以及将它们做为治疗剂的用途；范英娣在其发明专利(ZL01106757.8)中公开了 一种类人胶原蛋白的氨基酸序列及根据该序列编码基因构建的工程菌，再通过诱导基因 工程菌来生产这种类胶原蛋白的方法；姚菊明和杜春玲在其发明专利(200710070660. 7) 公开了一种重组类人胶原蛋白及生物合成方法，重组类人胶原蛋白包括由胶原区和非胶 原区组成，胶原区和非胶原区都由特定的氨基酸序列组成，其中非胶原区位于胶原区的 羧基端，非胶原区的氨基酸序列源于T4噬菌体次要纤维蛋白；杨树林等在其发明专利 (200610098297. 5)中公开了一种类人胶原蛋白基因、其不同重复数的同向串联基因、含有 串联基因的重组质粒及制备方法。所公开的类人胶原蛋白基因由特定的碱基序列组成，并 通过对该基因的体外酶切和拼接可获得不同重复数的串联基因，以及含有该不同重复数串 联基因的重组质粒。
发明内容
本发明的目的是提供一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，它可 以从人类的cDNA文库中克隆胶原蛋白的编码基因，该编码基因通过基因重组技术，可以在 真核表达系统(如酵母细胞或动物细胞)或原核表达系统(如大肠杆菌)中获得表达，经 过分离纯化得到重组蛋白有望在医药和化妆品领域有广泛的用途。为了解决背景技术所存在的问题，本发明是采用以下技术方案从人类cDNA文库 中获得了一种编码人胶原蛋白的cDNA序列，再根据该序列化学合成了人类胶原蛋白的核心基因片段，并将其中大肠杆菌的稀有密码子改变为其偏爱密码子，与特定表达载体连接 后构建重组表达载体，将重组表达载体导入大肠杆菌构建了工程菌，建立人类胶原蛋白片 段在工程菌中高效表达的发酵工艺，建立重组人类胶原蛋白片段的纯化工艺。—种人类胶原蛋白片段的基因序列，该序列如下ATGGGCCTTCAGGGTATGCCTGGTGAACGTGGTGCAGCTGGTCTTCCAGGGCCTAAGGGTGACAGAGGTGATGCTGGTCCCAAAGGTGCTGATGGCTCTCCTGGCAAAGATGGCGTCCGTGGTCTGACTGGCCCAATTGGTCCTCCTGGCCCTGCTGGTGCCCCTGGTGACAA
GGGTGAAAGTGGTCCTAGCGGCCCTGCTGGTCCAACTGGAGCTCGTGGTGCCCCTGGAGACCGTGGTGAGCCTGGTCCGCCAGGCCCTGCTGGCTTTGCTGGCCCACCTGGTGCTGACGGCCAACCTGGTGCTAAAGGCGAACCTGGTGATGCTGGTGCTAAAGGCGATGCTGGTCCGCCTGGCCCTGCCGGACCCGCTGGTCCCCCTGGCCCTATTGGTAATGTTGGTGCTCCTGGAGCCAAAGGTGCTCGCGGCAGCGCTGGTCCGCCTGGTGCTACTGGTTTCCCTGGTGCTGCTGGCCGTGTCGGTCCTCCTGGCCCATCTGGTAATGCTGGACCGCCTGGCCCTCCTGGTCCTGCTGGCAAAGAAGGCGGCAAAGGTCCACGTGGTGAGACTGGCCCTGCTGGACGTCCTGGTGAAGTTGGTCCGCCTGGTCCACCTGGCCCTGCTGGCGAGAAAGGATCCCCTGGTGCTGATGGTCCTGCTGGTGCTCCTGGTACTCCCGGGCCTCAAGGTATTGCTGGACAGCGTGGTGTGGTCGGCCTGCCTGGTCAGAGAGGAGAGAGAGGCTTCCCTGGTCTTCCTGGCCCGTCTGGTGAACCTGGCAAACAAGGTCCTTCTGGAGCAAGTGGTGAACGTGGTCCACCTGGTCCTATGGGCCCGCCTGGATTGGCTGGTCCACCTGGTGAATCTGGACGTGAGGGGGCTCCTGGTGCCGAAGGTTCCCCTGGACGTGACGGTTCTCCTGGCGCCAAGGGTGACCGTGGTGAGACCGGCCCAGCTGGACCTCCTGGTGCTCCTGGTGCTCCTGGTGCCCCTGGCCCAGTTGGCCCTGCTGGCAAGAGTGGTGATCGTGGTGAGACTGGTCCTGCTGGTCCAGCCGGTCCTGTCGGCCCTGTTGGCGCCCGTGGCCCTGCCGGACCTCAAGGCCCGCGTGGTGACAAGGGTGAGACAGGCGAACAGGGCGACAGAGGCATAAAGGGTCACCGTGGCTTCTCTGGCCTCCAGGGTCCACCTGGCCCTCCTGGCTCTCCTGGTGAACAAGGTCCATCTGGAGCCTCTGGTCCTGCTGGTCCACGTGGTCCTCCTGGCTCTGCTGGTGCTCCTGGCAAAGATGGACTCAACGGTCTCCCTGGCCCTATTGGGCCCCCTGGTCCTCGCGGTCGCACTGGTGATGCT
GGTCCTGTTGGTCCACCTGGCCCTCCTGGACCTCCTGGTCCACCTGGTCCTCCGTAA序列中划线标示的ATG为起始密码子，划线标示的TAA为终止密码子。根据人类胶原蛋白片段的编码序列，经过翻译得到一种人类胶原蛋白片段的氨基 酸序列，该序列如下MGLQGMPGERGAAGLPGPK⑶RGDAGPKGADGSPGKDGVRGLTGPIGPPGPAGAPGDKGESGPSGPAGPTGARGAP⑶RGEPGPPGPAGFAGPPGADGQPGAKGEPGDAGAKGDAGPPGPAGPAGPPGPIGNVGAPGAKGARGSAGPPGATGFPGAAGRVGPPGPSGNAGPPGPPGPAGKEGGKGPRGETGPAGRPGEVGPPGPPGPAGEKGSPGADGPAGAPGTPGPQGIAGQRGVVGLPGQRGERGFPGLPGPSGEPGKQGPSGASGERGPPGPMGPPGLAGPPGESGREGAPGAEGSPGRDGSPGAK⑶RGETGPAGPPGAPGAPGAPGPVGPAGKS⑶RGETGPAG
PAGPVGPVGARGPAGPQGPRGDKGETGEQ⑶RGIKGHRGFSGLQGPPGPPGSPGEQGPSGASGPAGPRGPPGSAGAPGKDGLNGLPGPIGPPGPRGRTGDAGPVGPPGPPGPPGPPGP
P本发明具有以下有益效果是根据本发明的人类胶原蛋白片段的基因序列，可以 从人类的cDNA文库中克隆胶原蛋白的编码基因，该编码基因通过基因重组技术，可以在真 核表达系统(如酵母细胞或动物细胞)或原核表达系统(如大肠杆菌)中获得表达，经过 分离纯化得到重组蛋白有望在医药和化妆品领域有广泛的用途。
具体实施例方式本具体实施方式
采用以下技术方案从人类cDNA文库中获得了一种编码人胶原 蛋白的cDNA序列，再根据该序列化学合成了人类胶原蛋白的核心基因片段，并将其中大肠 杆菌的稀有密码子改变为其偏爱密码子，与特定表达载体连接后构建重组表达载体，将重 组表达载体导入大肠杆菌构建了工程菌，建立人类胶原蛋白片段在工程菌中高效表达的发 酵工艺，建立重组人类胶原蛋白片段的纯化工艺。一种人类胶原蛋白片段的基因序列，该序列如下ATGGGCCTTCAGGGTATGCCTGGTGAACGTGGTGCAGCTGGTCTTCCAGGGCCTAAGGGTGACAGAGGTGATGCTGGTCCCAAAGGTGCTGATGGCTCTCCTGGCAAAGATGGCGTCCGTGGTCTGACTGGCCCAATTGGTCCTCCTGGCCCTGCTGGTGCCCCTGGTGACAAGGGTGAAAGTGGTCCTAGCGGCCCTGCTGGTCCAACTGGAGCTCGTGGTGCCCCTGGAGACCGTGGTGAGCCTGGTCCGCCAGGCCCTGCTGGCTTTGCTGGCCCACCTGGTGCTGACGGCCAACCTGGTGCTAAAGGCGAACCTGGTGATGCTGGTGCTAAAGGCGATGCTGGTCCGCCTGGCCCTGCCGGACCCGCTGGTCCCCCTGGCCCTATTGGTAATGTTGGTGCTCCTGGAGCCAAAGGTGCTCGCGGCAGCGCTGGTCCGCCTGGTGCTACTGGTTTCCCTGGTGCTGCTGGCCGTGTCGGTCCTCCTGGCCCATCTGGTAATGCTGGACCGCCTGGCCCTCCTGGTCCTGCTGGCAAAGAAGGCGGCAAAGGTCCACGTGGTGAGACTGGCCCTGCTGGACGTCCTGGTGAAGTTGGTCCGCCTGGTCCACCTGGCCCTGCTGGCGAGAAAGGATCCCCTGGTGCTGATGGTCCTGCTGGTGCTCCTGGTACTCCCGGGCCTCAAGGTATTGCTGGACAGCGTGGTGTGGTCGGCCTGCCTGGTCAGAGAGGAGAGAGAGGCTTCCCTGGTCTTCCTGGCCCGTCTGGTGAACCTGGCAAACAAGGTCCTTCTGGAGCAAGTGGTGAACGTGGTCCACCTGGTCCTATGGGCCCGCCTGGATTGGCTGGTCCACCTGGTGAATCTGGACGTGAGGGGGCTCCTGGTGCCGAAGGTTCCCCTGGACGTGACGGTTCTCCTGGCGCCAAGGGTGACCGTGGTGAGACCGGCCCAGCTGGACCTCCTGGTGCTCCTGGTGCTCCTGGTGCCCCTGGCCCAGTTGGCCCTGCTGGCAAGAGTGGTGATCGTGGTGAGACTGGTCCTGCTGGTCCAGCCGGTCCTGTCGGCCCTGTTGGCGCCCGTGGCCCTGCCGGACCTCAAGGCCCGCGTGGTGACAAGGGTGAGACAGGCGAACAGGGCGACAGAGGCATAAAGGGTCACCGTGGCTTCTCTGGCCTCCAGGGTCCACCTGGCCCTCCTGGCTCTCCTGGTGAACAAGGTCCATCTGGAGCCTCTGGTCCTGCTGGTCCACGTGGTCCTCCTGGCTCTGCTGGTGCTCCTGGCAAAGATGGACTCAACGGTCTCCCTGGCCCTATTGGGCCCCCTGGTCCTCGCGGTCGCACTGGTGATGCTGGTCCTGTTGGTCCACCTGGCCCTCCTGGACCTCCTGGTCCACCTGGTCCTCCGTAA序列中划线标示的ATG为起始密码子，划线标示的TAA为终止密码子。根据人类胶原蛋白片段的编码序列，经过翻译得到一种人类胶原蛋白片段的氨基酸序列，该序列如下MGLQGMPGERGAAGLPGPK⑶RGDAGPKGADGSPGKDGVRGLTGPIGPPGPAGAPGDKGESGPSGPAGPTGARGAP⑶RGEPGPPGPAGFAGPPGADGQPGAKGEPGDAGAKGDAGPPGPAGPAGPPGPIGNVGAPGAKGARGSAGPPGATGFPGAAGRVGPPGPSGNAGPPGPPGPAGKEGGKGPRGETGPAGRPGEVGPPGPPGPAGEKGSPGADGPAGAPGTPGPQGIAGQRGVVGLPGQRGERGFPGLPGPSGEPGKQGPSGASGERGPPGPMGPPGLAGPPGESGREGAPGAEGSPGRDGSPGAK⑶RGETGPAGPPGAPGAPGAPGPVGPAGKS⑶RGETGPAGPAGPVGPVGARGPAGPQGPRGDKGETGEQ⑶RGIKGHRGFSGLQGPPGPPGSPGEQGPSGASGPAGPRGPPGSAGAPGKDGLNGLPGPIGPPGPRGRTGDAGPVGPPGPPGPPGPPGPP本具体实施方式
根据本发明的人类胶原蛋白片段的基因序列，可以从人类的cDNA 文库中克隆胶原蛋白的编码基因，该编码基因通过基因重组技术，可以在真核表达系统 (如酵母细胞或动物细胞)或原核表达系统(如大肠杆菌)中获得表达，经过分离纯化得到 重组蛋白有望在医药和化妆品领域有广泛的用途。实施例1 人类胶原蛋白片段的基因序列的合成与表达载体的构建1、化学合成人类胶原蛋白片段的基因序列根据人类胶原蛋白的cDNA序列，合成人类胶原蛋白片段的DNA序列，并在其上游 加入NdeI的识别序列，下游加入XhoI的识别序列，具体序列如下AAACATATGGGCCTTCAGGGTATGCCTGGTGAACGTGGTGCAGCTGGTCTTCCAGGGCCTAAGGGTGACAGAGGTGATGCTGGTCCCAAAGGTGCTGATGGCTCTCCTGGCAAAGATGGCGTCCGTGGTCTGACTGGCCCAATTGGTCCTCCTGGCCCTGCTGGTGCCCCTGGTGACAAGGGTGAAAGTGGTCCTAGCGGCCCTGCTGGTCCAACTGGAGCTCGTGGTGCCCCTGGAGACCGTGGTGAGCCTGGTCCGCCAGGCCCTGCTGGCTTTGCTGGCCCACCTGGTGCTGACGGCCAACCTGGTGCTAAAGGCGAACCTGGTGATGCTGGTGCTAAAGGCGATGCTGGTCCGCCTGGCCCTGCCGGACCCGCTGGTCCCCCTGGCCCTATTGGTAATGTTGGTGCTCCTGGAGCCAAAGGTGCTCGCGGCAGCGCTGGTCCGCCTGGTGCTACTGGTTTCCCTGGTGCTGCTGGCCGTGTCGGTCCTCCTGGCCCATCTGGTAATGCTGGACCGCCTGGCCCTCCTGGTCCTGCTGGCAAAGAAGGCGGCAAAGGTCCACGTGGTGAGACTGGCCCTGCTGGACGTCCTGGTGAAGTTGGTCCGCCTGGTCCACCTGGCCCTGCTGGCGAGAAAGGATCCCCTGGTGCTGATGGTCCTGCTGGTGCTCCTGGTACTCCCGGGCCTCAAGGTATTGCTGGACAGCGTGGTGTGGTCGGCCTGCCTGGTCAGAGAGGAGAGAGAGGCTTCCCTGGTCTTCCTGGCCCGTCTGGTGAACCTGGCAAACAAGGTCCTTCTGGAGCAAGTGGTGAACGTGGTCCACCTGGTCCTATGGGCCCGCCTGGATTGGCTGGTCCACCTGGTGAATCTGGACGTGAGGGGGCTCCTGGTGCCGAAGGTTCCCCTGGACGTGACGGTTCTCCTGGCGCCAAGGGTGACCGTGGTGAGACCGGCCCAGCTGGACCTCCTGGTGCTCCTGGTGCTCCTGGTGCCCCTGGCCCAGTTGGCCCTGCTGGCAAGAGTGGTGATCGTGGTGAGACTGGTCCTGCTGGTCCAGCCGGTCCTGTCGGCCCTGTTGGCGCCCGTGGCCCTGCCGGACCTCAAGGCCCGCGTGGTGACAAGGGTGAGACAGGCGAACAGGGCGACAGAGGCATAAAGGGTCACCGTGGCTTCTCTGGCCTCCAGGGTCCACCTGGCCCTCCTGGCTCTCCTGGTGAACAAGGTCCATCTGG.
AGCCTCTGGTCCTGCTGGTCCACGTGGTCCTCCTGGCTCTGCTGGTGCTCCTGGCAAAGATGGACTCAACGGTCTCCCTGGCCCTATTGGGCCCCCTGGTCCTCGCGGTCGCACTGGTGATGCTGGTCCTGTTGGTCCACCTGGCCCTCCTGGACCTCCTGGTCCACCTGGTCCTCCGTAACTCGAGAAA2、合成的DNA经过NdeI和XhoI双酶切后回收，与经过这两个酶切的pET_15b混 合，在T4DNA连接酶的作用下进行连接，构建重组表达载体PET-15C。实施例2 生产人类胶原蛋白片段的工程菌的构建与发酵工艺l、CaC12法制备大肠杆菌[E. coli BL21(DE3)]的感受态细胞与工程菌构建(1)接种大肠杆菌单菌落于2mL LB液体培养基中，37°C振荡(约250r/min)培养 过夜。(2)将2mL过夜培养物转接到盛有IOOmL的LB液体培养基的500mL三角瓶中，37°C 继续振荡培养至OD6tltl约为0. 2、. 4(约2h)。(3)取ImL培养物于一灭菌的Eppendorf管 中，冰浴放置10 30min，4°C，1500 X g离心5min，弃上清。(4)沉淀用0. 2mL冰冷氯化钙 溶液轻轻悬浮，冰浴放置15!^11，41，1500\8离心51^11，弃上清。(5)沉淀再用0. 2mL氯化 钙溶液轻轻悬浮，放置在冰浴中，制成大肠杆菌感受态细胞。(6)取5yL pET-15bC，加入制 好的感受态细胞中，轻轻混勻，冰浴30min。(7)42°C热激90s后，迅速置于冰浴5min。(8) 取200 μ L涂布于含氨苄青霉素钠(100 μ g/mL)的LB固体培养基上，正向放入37°C培养箱 中培养lh，再倒置培养过夜至菌落清晰，获得生产人类胶原蛋白的基因工程菌。2、建立工程菌的发酵工艺(1)挑取转化了 pET-15bC的工程菌单菌落，接种于20mL含100 μ g/mL氨苄青霉素 钠的LB液体培养基中，37°C，振荡培养(250r/min)过夜。(2)取过夜培养物接种到2000mL 含100 μ g/mL氨苄青霉素钠和5mmol/L甘氨酸的LB液体培养基中，相同条件下继续培 养4h。(3)加入IPTG溶液，28°C，继续振荡培养(250r/min)培养8h。(4)培养液在4°C， IOOOOrpm下离心lOmin，收集菌体。实施例3 重组人类胶原蛋白片段的分离纯化1、工程菌菌体重新悬浮于冰冷的20mL结合缓冲溶液(0. 5mol/L NaCl,5mmol/L 咪唑，20mmol/L Tris-Cl, ρΗ8. 0)中，冰浴条件下用超声波破碎细胞15次(800W，工作时间 10s，间隔时间60s)。2、细胞裂解液于4°C，12000Xg离心30min，取上清液。3、将上清液加到装有镍离 子树脂层析柱(1.5X5cm)内，让其自然流过层析介质。4、先用IOmL结合缓冲液冲洗层析 柱，再用 8mL 洗涤缓冲液(0. 5mol/L NaCl，50mmol/L 咪唑，20mmol/L Tris-Cl，pH8. 0)洗涤 层析柱。5、用 4mL 洗脱缓冲液(0. 5mol/L NaCl，0. 5mol/L 咪唑，20mmol/L Tris-Cl，pH8. 0) 洗脱目的蛋白，收集洗脱液。6、洗脱液用TE缓冲液(20mmol/L Tris-Cl,pH8. 0)稀释15倍， 上DEAE-S印harose FF离子交换柱(1. 5 X IOcm)，用含0 lOOOmmol/LNaCl的TE缓冲溶液 连续梯度洗托，SDS-PAGE检测各洗脱峰，合并含53KD蛋白的洗脱液，加入2个单位的凝血 酶4°C酶切过夜，用Millipore浓缩管(10K)浓缩至2mL。7、浓缩液上Superdex-75凝胶过 滤柱(1. 2 X 60cm)，洗脱液为TE缓冲溶液，流速为lmL/min，分步收集，SDS-PAGE检测各洗 脱峰，合并含51KD蛋白的洗脱液，得到重组人类胶原蛋白片段。
权利要求
一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，其特征在于从人类cDNA文库中获得了一种编码人胶原蛋白的cDNA序列，再根据该序列化学合成了人类胶原蛋白的核心基因片段，并将其中大肠杆菌的稀有密码子改变为其偏爱密码子，与特定表达载体连接后构建重组表达载体，将重组表达载体导入大肠杆菌构建了工程菌，建立人类胶原蛋白片段在工程菌中高效表达的发酵工艺，建立重组人类胶原蛋白片段的纯化工艺。
2.根据权利要求1所述的一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，其特 征在于所述的人类胶原蛋白片段的基因序列，该序列如下ATGGGCCTTCAGGGTATGCCTGGTGAACGTGGTGCAGCTGGTCTTCCAGGGCCTAAGGGTGACAGAGGTGAT GCTGGTCCCAAAGGTGCTGATGGCTCTCCTGGCAAAGATGGCGTCCGTGGTCTGACTGGCCCAATTGGTCCTCCTGG CCCTGCTGGTGCCCCTGGTGACAAGGGTGAAAGTGGTCCTAGCGGCCCTGCTGGTCCAACTGGAGCTCGTGGTGCCC CTGGAGACCGTGGTGAGCCTGGTCCGCCAGGCCCTGCTGGCTTTGCTGGCCCACCTGGTGCTGACGGCCAACCTGGT GCTAAAGGCGAACCTGGTGATGCTGGTGCTAAAGGCGATGCTGGTCCGCCTGGCCCTGCCGGACCCGCTGGTCCCCC TGGCCCTATTGGTAATGTTGGTGCTCCTGGAGCCAAAGGTGCTCGCGGCAGCGCTGGTCCGCCTGGTGCTACTGGTT TCCCTGGTGCTGCTGGCCGTGTCGGTCCTCCTGGCCCATCTGGTAATGCTGGACCGCCTGGCCCTCCTGGTCCTGCT GGCAAAGAAGGCGGCAAAGGTCCACGTGGTGAGACTGGCCCTGCTGGACGTCCTGGTGAAGTTGGTCCGCCTGGTCC ACCTGGCCCTGCTGGCGAGAAAGGATCCCCTGGTGCTGATGGTCCTGCTGGTGCTCCTGGTACTCCCGGGCCTCAAG GTATTGCTGGACAGCGTGGTGTGGTCGGCCTGCCTGGTCAGAGAGGAGAGAGAGGCTTCCCTGGTCTTCCTGGCCCG TCTGGTGAACCTGGCAAACAAGGTCCTTCTGGAGCAAGTGGTGAACGTGGTCCACCTGGTCCTATGGGCCCGCCTGG ATTGGCTGGTCCACCTGGTGAATCTGGACGTGAGGGGGCTCCTGGTGCCGAAGGTTCCCCTGGACGTGACGGTTCTC CTGGCGCCAAGGGTGACCGTGGTGAGACCGGCCCAGCTGGACCTCCTGGTGCTCCTGGTGCTCCTGGTGCCCCTGGC CCAGTTGGCCCTGCTGGCAAGAGTGGTGATCGTGGTGAGACTGGTCCTGCTGGTCCAGCCGGTCCTGTCGGCCCTGT TGGCGCCCGTGGCCCTGCCGGACCTCAAGGCCCGCGTGGTGACAAGGGTGAGACAGGCGAACAGGGCGACAGAGGCA TAAAGGGTCACCGTGGCTTCTCTGGCCTCCAGGGTCCACCTGGCCCTCCTGGCTCTCCTGGTGAACAAGGTCCATCT GGAGCCTCTGGTCCTGCTGGTCCACGTGGTCCTCCTGGCTCTGCTGGTGCTCCTGGCAAAGATGGACTCAACGGTCT CCCTGGCCCTATTGGGCCCCCTGGTCCTCGCGGTCGCACTGGTGATGCTGGTCCTGTTGGTCCACCTGGCCCTCCTG GACCTCCTGGTCCACCTGGTCCTCCGTAA
3.根据权利要求1TO的一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基_列，其特征在于根 据人类胶原蛋白片段的编码序列， δ!翻译得到一种人类胶原蛋白片段的氨基瞎列，游列如下MGLQGMPGERGAAGLPGPK⑶RGDAGPKGADGSPGKDGVRGLTGPIGPPGPAGAP⑶KGESGPSGPAGPTG ARGAPGDRGEPGPPGPAGFAGPPGADGQPGAKGEPGDAGAKGDAGPPGPAGPAGPPGPIGNVGAPGAKGARGSAGP PGATGFPGAAGRVGPPGPSGNAGPPGPPGPAGKEGGKGPRGETGPAGRPGEVGPPGPPGPAGEKGSPGADGPAGAP GTPGPQGIAGQRGVVGLPGQRGERGFPGLPGPSGEPGKQGPSGASGERGPPGPMGPPGLAGPPGESGREGAPGAEG SPGRDGSPGAK⑶RGETGPAGPPGAPGAPGAPGPVGPAGKS⑶RGETGPAGPAGPVGPVGARGPAGPQGPRGDKG ETGEQ⑶RGIKGHRGFSGLQGPPGPPGSPGEQGPSGASGPAGPRGPPGSAGAPGKDGLNGLPGPIGPPGPRGRTG DAGPVGPPGPPGPPGPPGPP
4.根据权利要求1所述的一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，其特 征在于可以从人类的cDNA文库中克隆胶原蛋白的编码基因，该编码基因通过基因重组技 术，可以在真核表达系统(如酵母细胞或动物细胞)或原核表达系统(如大肠杆菌)中获 得表达，经过分离纯化得到重组蛋白有望在医药和化妆品领域有广泛的用途。
全文摘要
一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，它涉及生物技术领域。可以从人类的cDNA文库中克隆胶原蛋白的编码基因，该编码基因通过基因重组技术，可以在真核表达系统(如酵母细胞或动物细胞)或原核表达系统(如大肠杆菌)中获得表达，经过分离纯化得到重组蛋白有望在医药和化妆品领域有广泛的用途。
文档编号C12R1/19GK101812457SQ201010106580
公开日2010年8月25日 申请日期2010年2月5日 优先权日2010年2月5日
发明者曹荣军 申请人:青岛贝尔特生物科技有限公司