专利名称：一株促进污染土壤植物修复的木霉菌株fs10-c及其微生物制剂的制备方法
技术领域：
本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种用于促进污染土壤植物修复的木霉菌 株及其微生物制剂的制备方法。
背景技术：
木霉属(Trichoderma)真菌在土壤中分布广泛、生物量大，环境适应性强。目前农 业上多用于促进农作物生长、诱导植物产生抗病性等。近年薇等来，亦有研究表明木霉摇瓶 条件下对重金属Cu、Si和1 有吸附作用，且对有机污染物有一定的转化作用。木霉对营 养的需求并不十分严格，可以分解利用纤维素、半纤维素、几丁质等多种多聚物作为其生长 的碳源物质，也可以利用多种简单的和复杂的氮源化合物生长。但许传坤等(2004)和潘玮 等(2006)的研究表明向土壤中添加额外的能源物质及其它的有机物质能降低或全部解除 土壤对木霉的抑制作用。苜蓿含丰富的碳水化合物和多种矿物元素及维生素，可为木霉提 供良好的营养条件。以灭菌苜蓿粉为基质，进行木霉的固体发酵，有利于在苜蓿粉中大量增 殖，这点不同于一般的固体菌剂仅简单的将微生物吸附于固体基质上，其孢子含量大于IO9 cfu g—1。且苜蓿粉作为一种有机质与木霉孢子混合添加入土壤减轻土壤对孢子的抑制作用 的同时可增加土壤肥力。
发明内容
发明目的本发明的目的是提供一株促进污染土壤植物修复的木霉菌株FSlO-C 及其微生物制剂的制备方法。该制剂通过木霉产生吲哚乙酸、赤霉素等植物生长调节物质、 产铁载体能力和解磷作用等改变植物营养环境，以及提高植物抗逆性等生物活性，促进植 物生长，抑制病害发生和改善土壤微生态。另外具有调控重金属污染作用，对有机污染物亦 有一定的转化作用。技术方案一株促进污染土壤植物修复的木霉菌株FS10-C，该菌株已在国家知识 产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2010年07月01日，保藏单位名称中国微生物菌 种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No. 3970。该株木霉为土壤中筛选而 得，菌丝白色棉絮状，绿色孢子、产黄色素，经鉴定为里氏木霉(Jrichoderma reesei) 0一种含有上述木霉的微生物制剂的制备方法，制备步骤为将粉碎的过10目筛后 的紫花苜蓿粉按重量比1:1与去离子水调勻后在12rc，30min灭菌处理制成灭菌基质；木 霉FSlO-C经PDA斜面培养，用无菌水洗孢子，配制为的孢子悬液，孢子浓度IO6 cfu · mL—1 ； 将孢子悬液按照接种量为6%wt接种到灭菌基质中，28°C恒温培养，第3天起每天搅动1次，混勻计数孢子量为IO9 cfu · 制成木霉制剂。所述PDA斜面培养方法为木霉FSlO-C株在PDA平板活化后，接种PDA斜面，28°C 恒温培养5d左右见斜面布满绿色孢子。所述PDA培养基配制方法称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水煮沸2(Γ30 分钟，用四层纱布过滤得土豆汁，加入20g葡萄糖和18 20g琼脂，冷却后补足水分至1000毫升。有益效果(1)木霉制剂制备方法简单、孢子量大木霉菌广泛存在于土壤中，具 有较强的寄生能力，能够存在与植物残体和土壤结构中。以灭菌苜蓿粉为基质，进行木霉的 固体发酵，木霉可仅利用苜蓿的营养物质进行大量增殖，其孢子含量大于IO9 CfU · g—1，可 通过制剂颜色判断制剂的孢子繁殖情况。这点不同于一般的固体菌剂仅简单的将微生物吸 附于固体基质上。(2)木霉制剂具多种生物活性可促进植物修复土壤污染并且通过产生 吲哚乙酸、赤霉素等植物生长调节物质、产铁载体能力和解磷作用等改变植物营养环境，以 及提高植物抗逆性等生物活性，促进植物生长，抑制病害发生和改善土壤微生态。另外具有 调控重金属污染作用，对有机污染物亦有一定的转化作用；(3)木霉制剂施用方法简单木 霉制剂用于土壤污染治理于可参照一般菌肥的方法施用，且苜蓿粉作为一种有机质与木霉 孢子混合添加入土壤减轻了土壤对孢子的抑制作用，同时增加了土壤的肥力。
图1不同处理的菌剂产生的孢子数量。
具体实施例方式以下结合实例对本发明作进一步的描述 实施例1 菌剂的固体发酵正交实验
1. 1孢子液的制取取培养好的种子斜面，加5mL无菌水，振荡，将孢子洗脱至无菌三角 瓶中，稀释至孢子浓度为IO6 cfu · mL—1，待用。固体发酵实验选取物料种类、物料量、固水比、接种量四个发酵参数，每个参数设 3个水平，分别为物料种类(A):有机肥A、有机肥B、苜蓿粉；物料量(B):20g、40g、60g;固水 重量比(C) :1:0. 2、1:0. 6、1:1 ；接种量(D) :2%wt、6%wt、10%wt。采用正交试验法。选用L9 (34)正交表，其试验因素水平见表1。有机肥A、有机肥B和紫花苜蓿粉三种有机物料，分别 按照试验设计加去离子水，充分混勻后，装于直径15cm大玻璃平皿中，121°C灭菌30min， 冷却至室温后按照试验设计接种孢子悬液，混勻，于无菌静止培养，定时搅拌，补水，进 行发酵培养。各处理经发酵培养后，称取Img发酵固料，放入9mL的含无菌水中洗脱和收集 分生孢无菌水，充分震荡，静置，取上清液lmL，梯度稀释，用血球计数板计数孢子量(李振高 等，2008)。
表1正交试验因素水平
权利要求
1.一株促进污染土壤植物修复的木霉菌株FS10-C，该菌株已在国家知识产权局指定 的保藏单位保藏，保藏日期为2010年07月01日，保藏单位名称中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No. 3970。
2.一种含有权利要求1所述木霉的微生物制剂的制备方法，其特征在于制备步骤为 将粉碎的过10目筛后的紫花苜蓿粉按重量比1:1与去离子水调勻后在121°C，30min灭菌 处理制成灭菌基质；木霉FSlO-C经PDA斜面培养，用无菌水洗孢子，配制为的孢子悬液，孢 子浓度IO6 cfu · ml/1 ；将孢子悬液按照接种量为6%wt接种到灭菌基质中恒温培养， 第3天起每天搅动1次，混勻计数孢子量为IO9 cfu · g—1，制成木霉制剂。
3.根据权利要求2所述的含有木霉的微生物制剂的制备方法，其特征在于所述PDA斜 面培养方法为木霉FSlO-C株在PDA平板活化后，接种PDA斜面，恒温培养5d左右见 斜面布满绿色孢子。
4.根据权利要求2或3所述的含有木霉的微生物制剂的制备方法，其特征在于所述 PDA培养基配制方法称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水煮沸2(Γ30分钟，用四层 纱布过滤得土豆汁，加入20g葡萄糖和18 20g琼脂，冷却后补足水分至1000毫升。
全文摘要
一株促进污染土壤植物修复的木霉菌株FS10-C及其微生物制剂的制备方法，木霉制剂由土壤中筛选出的木霉FS10-C株，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号CGMCC NO.3970。具体制备方法为将粉碎的苜蓿粉(过10目筛),1:1用去离子水调匀后121℃，30min灭菌处理制成灭菌基质。木霉FS10-C经PDA斜面培养，用无菌水洗孢子，配制为的孢子悬液(孢子浓度106cfu·mL-1)，按照接种量为6%wt接种到灭菌基质中。28℃恒温培养，第3天起每天搅动1次，混匀计数孢子量为109cfu·g-1，制成木霉制剂。
文档编号C12N1/14GK102080052SQ20101059200
公开日2011年6月1日 申请日期2010年12月17日 优先权日2010年12月17日
发明者吴龙华, 李振高, 滕应, 田晔, 赵静, 骆永明 申请人:中国科学院南京土壤研究所