专利名称：在木糖上生长的重组破囊壶菌和其组合物、制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本申请涉及在木糖上生长的重组破囊壶菌和包含所述重组破囊壶菌的细胞培养物，以及使用所述重组破囊壶菌生产细胞培养物、生物质、微生物油、组合物和生物燃料的方法。
背景技术：
脂肪酸基于碳链长度和饱和特性分类。根据存在于链中的碳的数目将脂肪酸称为短链、中链或长链脂肪酸，当碳原子间不存在双键时称为饱和脂肪酸，而当存在双键时称为不饱和脂肪酸。当仅存在一个双键时不饱和长链脂肪酸是单不饱和的，而当存在多于一个双键时是多不饱和的。多不饱和脂肪酸(PUFA)基于所述脂肪酸甲基末端的第一个双键的位置分类Ω-3(η-3)脂肪酸在第三个碳处包含第一个双键，而Ω-6(η-6)脂肪酸在第六个碳处包含第一个双键。例如，二十二碳六烯酸(“DHA”)是Ω-3长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)，具有22个碳的链长和6个双键，通常标为“22: 6η-3”。其他Ω -3LC-PUFA包括标为“20: 5η_3”的二十碳五烯酸(“ΕΡΑ”)和标为“22:5η-3”的Ω-3 二十二碳五烯酸(“DPA η_3”)。DHA和EPA已被称为“必需”脂肪酸。Q-6LC-PUFA包括标为“20: 4n_6”的花生四烯酸(“ARA”)和标为“22:5n-6”的Ω-6 二十二碳五烯酸(“DPA n_6，，)。Ω-3脂肪酸是生物学上重要的分子，由于其存在于细胞膜而影响细胞生理学，调节生物活性化合物的生成和基因表达，且充当生物合成底物。Roche，H. Μ.，Proc. Nutr.Soc. 58 :397-401(1999)。例如，DHA占人大脑皮层中脂质的约15%_20%、并占视网膜中月旨质的约30%-60%，其集中于睾丸和精子中，且是乳汁中的重要成分。Jean-Pascal Berge和Gilles Barnathan，“来自海洋生物脂质的脂肪酸分子生物多样性，作为生物标记的作用，生物活性化合物和经济方面”(Fatty Acids from Lipids of Marine Organisms Molecular Biodiversity, Roles as Biomarkers, Biologically Active Compounds， andEconomical Aspects)，《海洋生物技术》(Marine Biotechnology) I 49 (Τ· Scheper 编，2005) o DHA占大脑中Ω-3脂肪酸的多达97%和视网膜中Ω-3脂肪酸的多达93%。此外，DHA对胎儿和婴儿发育以及维持成人中的认知功能是必需的。同上。包括DHA和EPA在内的Ω -3脂肪酸还具有抗炎特性。参见例如同上以及Simopoulos, Α. P.，J. Am. Coll. Nutr. 21 495-595(2002)。特别的是，EPA与花生四烯酸竞争通过环氧合酶和脂氧合酶进行的二十烷类如前列腺素和白三烯的合成。同上。由于Ω-3脂肪酸不在人体内从头合成，这些脂肪酸必须获得自营养源。破囊壶菌(thraustochytrids)是破囊壶菌目(Thraustochytriales)微生物，其被认为是脂质生产的替代来源。例如，已经报道了破囊壶菌菌种的菌株以占该生物体所产生总脂肪酸的高百分比生成Ω-3脂肪酸。参见例如美国专利第5，130，242号；Huang, J.等，J. Am. Oil. Chem. Soc. 78 :605-610 (2001) ；Huang, J.等，Mar. Biotechnol. 5 450-457(2003)，以整体引用的方式并入本文。破囊壶菌还被认为是生产生物燃料的脂质来源。参见例如美国公开第2009/0064567号和WO 2008/067605，以整体引用的方式并入本文。植物生物质由三种主要组分构成；纤维素、半纤维素、和木质素。纤维素主要是由葡萄糖聚合物构成，半纤维素富含木糖聚合物，而木质素主要 是由复杂的多酚类化合物构成。来自这些生物质级分的碳水化合物被统称为木素纤维素糖，并已被作为乙醇发酵的低成本可再生原料的来源进行了研究。来自例如甘蔗渣、玉米秸杆、柳枝稷、麦秸杆、硬木和软木等来源的植物半纤维素可以是富含木糖的糖的来源。可以通过酸水解和/或酶消化从半纤维素释放这些糖类。虽然破囊壶菌代谢葡萄糖和/或果糖，但是其似乎无法天然代谢木糖。参见，例如，Honda 等，Mycol. Res. 4:439-448(1998) ；Goldstein, American J. of Botany 50:271-279 (1963) ；Damare, Indian Journal of Marine Sciences 35:326-340 (2006)。由此，破囊壶菌培养，包括商业和工业培养，目前需要葡萄糖浆作为碳源和能源。对于产生能够在替代碳源如木糖上生长的破囊壶菌以在商业和工业应用中使用的需求一直存在。发明概述本发明涉及一种生产破囊壶菌细胞培养物的方法，包括(a)用包含编码与木糖输入、木糖向木酮糖转换、木酮糖磷酸化、或其组合相关的多肽的多核苷酸序列的核酸分子转化破囊壶菌细胞，并(b)在包含木糖作为碳源的培养基中培养转化的破囊壶菌细胞。在一些实施方案中，与木糖输入、木糖向木酮糖的转换、或木酮糖磷酸化相关的多肽选自下组异源木糖转运蛋白、异源木糖异构酶、异源木酮糖激酶、异源木糖还原酶、异源木糖醇脱氢酶及其组合。在一些实施方案中，破囊壶菌细胞表达异源木糖转运蛋白、异源木糖异构酶、和异源木酮糖激酶。在一些实施方案中，破囊壶菌细胞表达异源木糖转运蛋白、异源木糖还原酶、异源木糖醇脱氢酶、和异源木酮糖激酶。在一些实施方案中，编码与木糖输入相关的多肽的多核苷酸序列与选自下组的序列是至少90%相同的登录号AJ875406、BT015128、AF127802、AJ249910、X59465、或 X55392 的多核苷酸序列；编码登录号 CAB76571的氨基酸序列的多核苷酸序列；SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、或SEQ ID NO: 23的多核苷酸序列，及其组合。在一些实施方案中，破囊壶菌是裂殖壶菌属或破囊壶菌属的。在一些实施方案中，本发明涉及通过所述方法生产的破囊壶菌细胞培养物。本发明也涉及包含含有编码与木糖输入、木糖向木酮糖的转换、木酮糖磷酸化、或其组合相关的多肽的多核苷酸序列的核酸分子的破囊壶菌细胞。在一些实施方案中，与木糖输入、木糖向木酮糖的转换、木酮糖磷酸化相关的多肽选自下组异源木糖转运蛋白、异源木糖异构酶、异源木酮糖激酶、异源木糖还原酶、异源木糖醇脱氢酶及其组合。在一些实施方案中，破囊壶菌细胞表达异源木糖转运蛋白、异源木糖异构酶、和异源木酮糖激酶。在一些实施方案中，破囊壶菌细胞表达异源木糖转运蛋白、异源木酮糖激酶、异源木糖还原酶、和异源木糖醇脱氢酶。在一些实施方案中，编码木糖与输入相关的多肽的多核苷酸序列与选自下组的序列是至少90%相同的登录号AJ875406、BT015128、AF127802、AJ249910、X59465、或X55392的多核苷酸序列；编码登录号CAB76571的氨基酸序列的多核苷酸序列；SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22、或SEQ ID NO:23的多核苷酸序列，及其组合。在一些实施方案中，破囊壶菌是裂殖壶菌属或破囊壶菌属的。本发明也涉及一种破囊壶菌培养物，其包含(a)本文所述的任何一种破囊壶菌细胞，和(b)包含木糖作为碳源的细胞培养基。本发明也涉及一种生产破囊壶菌生物质的方法，该方法包括(a)将本文所述的 任何一种破囊壶菌细胞在包含木糖作为碳源的培养基中培养，并(b)从所述培养基收获生物质。本发明也涉及一种生产微生物油的方法，该方法包括(a)将本文所述的任何一种破囊壶菌细胞在包含木糖作为碳源的培养基中培养以生成生物质，并(b)从所述生物质提取油。 本发明也涉及一种生产用于动物或人的食品、化妆品、工业组合物、或药物组合物的方法，该方法包括(a)将本文所述的任何一种破囊壶菌细胞在包含木糖作为碳源的培养基中培养，(b)从所述培养基收获生物质，并(C)从所述生物质制备食品、化妆品、工业组合物、或药物组合物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括从生物质提取油并从所述油制备食品、化妆品、工业组合物、或药物组合物。在一些实施方案中，所述食品是婴儿配方食品。在一些实施方案中，所述婴儿配方食品适合早产儿。在一些实施方案中，所述食品是牛奶、饮料、治疗性饮品、营养饮品或其组合。在一些实施方案中，所述食品是用于动物或人食物的添加剂。在一些实施方案中，所述食品是营养补充剂。在一些实施方案中，所述食品是动物饲料。在一些实施方案中，所述动物饲料是水产养殖饲料。在一些实施方案中，所述动物饲料是家畜饲料、动物园动物饲料、役畜饲料、牲畜饲料或其组合。本发明也涉及一种生产生物燃料的方法，该方法包括(a)将本文所述的任何一种破囊壶菌细胞在包含木糖作为碳源的培养基中培养以生成生物质，(b)从所述生物质提取油，并(c)通过对油进行酯交换(transesterifying),裂化油，经由热解聚加工油，将油加入石油精炼过程，或其组合生产生物燃料。在一些实施方案中，通过对油进行酯交换生产生物燃料。在一些实施方案中，生物燃料是生物柴油。在一些实施方案中，通过裂化油生产生物燃料。在一些实施方案中，生物燃料是喷气生物燃料。在一些实施方案中，通过经由热解聚加工油生产生物燃料。在一些实施方案中，生物燃料是可再生柴油。在一些实施方案中，通过将油加入石油精炼过程生产生物燃料。在一些实施方案中，生物燃料是共处理的可再生柴油(co-processed renewable diesel)。附图简述
图I 显示了 pCL0120(SEQ ID NO: 12)的质粒图谱。图2显不了裂殖壶菌属的密码子选择表。图3显示了密码子优化的多核苷酸序列(SEQ ID NO:2)，其编码中间假丝酵母(Candida intermedia)的木糖转运蛋白 GXS1,与 GenBank 登录号 AJ875406 对应。图4显示了密码子优化的多核苷酸序列(SEQ ID NO: 3)，其编码拟南芥属(Arabidopsis thaliana)的木糖转运蛋白 At5gl7010,与 GenBank 登录号 BT015128 对应。图5 显示了 pCL0130(SEQ ID NO: 14)的质粒图谱。图6 显示了 pCL0131(SEQ ID NO: 15)的质粒图谱。图7A和图7B显示了 pCL0121的多核苷酸序列(SEQ ID N0:4)。该载体赋予对抗生素ZE0CIN 的抗性并还包含编码eGFP的分泌形式的基因。 图8A和图8B显示了 pCL0122的多核苷酸序列(SEQ ID N0:5)。该载体赋予对抗生素巴龙霉素的抗性并还包含编码eGFP的分泌形式的基因。图9显示了 pCL0121的质粒图谱。
图10显示了 pCL0122的质粒图谱。图11显示了密码子优化的多核苷酸序列(SEQ ID N0:6)，其编码瘤胃真菌属菌种(Piromyces sp. )E2木糖异构酶蛋白“XylA”，与GenBank登录号CAB76571对应。图12显示了密码子优化的多核苷酸序列(SEQ ID NO:7)，其编码瘤胃真菌属(Piromyces sp. )E2木酮糖激酶蛋白“XylB”,与GenBank登录号AJ249910对应。图13 显示了 pCL0132(SEQ ID NO: 16)的质粒图谱。图14 显示了 pCL0136(SEQ ID NO:20)的质粒图谱。图15显示了密码子优化的多核苷酸序列(SEQ ID NO: 21)，其编码树干毕赤酵母(Pichia stipitis)木糖还原酶蛋白“Xyll”,与GenBank登录号X59465对应。图16显示了密码子优化的多核苷酸序列(SEQ ID NO:22)，其编码树干毕赤酵母木酮糖激酶蛋白“Xuk3”，与GenBank登录号AF127802对应。图17 显示了 pCL0133(SEQ ID NO: 17)的质粒图谱。图18 显示了 pCL0135(SEQ ID NO: 19)的质粒图谱。图19 显示了 pCL0123(SEQ ID NO: 13)的质粒图谱。图20显示了密码子优化的多核苷酸序列(SEQ ID NO: 23)，其编码树干毕赤酵母木糖醇脱氢酶蛋白“Xyl2”，与GenBank登录号X55392对应。图21 显示了 pCL0134(SEQ ID NO: 18)的质粒图谱。图22显示了来自用pCL0130(图22A)或pCL0131(图22B)转化的SMM抗性裂殖壶菌属克隆和裂殖壶菌属野生型菌株ATCC 20888 (WT)的培养物的培养沉淀裂解物的Western印迹,其用识别中间假丝酵母木糖转运蛋白GXSl (pCL0130转化体)或拟南芥木糖转运蛋白At5gl7010(pCL0131转化体)的抗体探查。发明详述本发明涉及在木糖上生长的重组破囊壶菌和包含所述重组破囊壶菌的细胞培养物，以及使用所述重组破囊壶菌生产细胞培养物、生物质、微生物油、组合物和生物燃料的方法。破囊壶菌
根据本发明，术语“破囊壶菌”是指破囊壶菌目(Thraustochytriales)的任何成员，其包括破囊壶菌科(Thraustochytriaceae)。破囊壶菌当前的分类学地位可以简述如下界管毛生物界(Stramenopila)(Chromista)门网粘菌(Labyrinthulomycota)(不等毛门(Heterokonta))纲网粘菌纲(Labyrinthulomycetes) (Labyrinthulae)目网粘菌目(Labyrinthulales)科网粘菌科(Labyrinthulaceae)目破囊壶菌目(Thraustochytriales)
科破囊壶菌科(Thraustochytriaceae)对于本发明的目的而言，作为破囊壶菌描述的菌株包括如下生物体目破囊壶菌目；科破囊壶菌科；属破囊壶菌属(种菌种，arudimentale, aureum，benthicola，globosum， kinnei， motivum， multirudimentale, pachydermum， proliferum， roseum，striatum)、吾肯氏壶菌属(Ulkenia)(种菌种，amoeboidea，kerguelensis，minuta，profunda， radiata， sailens， sarkariana， schizochytrops, visurgensis， yorkensis)、裂殖壶菌属(种菌种，aggregatum，limnaceum，mangrovei, minutum，octosporum)，Japonochytrium 属(种菌种、marinum)、Aplanochytrium 属(种菌种、haliotidis，kerguelensis，profunda, stocchinoi)、Althornia 属(种菌种、crouchii)、或 Elina 属(种菌种、marisalba，sinorifica)。出于本发明的目的，吾肯氏壶菌属中描述的物种将被看作是破囊壶菌属的成员。Aurantiochytrium、Oblongichytrium、Botryochytrium、Parietichytrium和Sicyoidochytrium是本发明包括的额外的属。破囊壶菌属的菌株包括但不限于，保藏菌株PTA-10212、PTA-10213、PTA-10214、PTA-10215、 PTA-9695、 PTA-9696、 PTA-9697、 PTA-9698、 PTA-10208、 PTA-10209、PTA-10210、PTA-10211、破囊壶菌属菌种(23B) (ATCC 20891) ；Thraustochytriumstriatum (Schneider) (ATCC 24473) ；Thraustochytrium aureum(Goldstein) (ATCC34304) ；Thraustochytrium roseum(Goldstein)(ATCC 28210)；和 Japonochytrium 属菌种(LI) (ATCC 28207)。裂殖壶菌属包括但不限于 Schizochytrium aggregatum、Schizochytrium limacinum、裂殖壶菌属菌种(S31) (ATCC 20888)、裂殖壶菌属菌种(S8)(ATCC20889)、裂殖壶菌属菌种(LC-RM) (ATCC 18915)、裂殖壶菌属菌种(SR 21)，保藏菌株ATCC 28209 和保藏的 Schizochytrium limacinum 菌株 IFO 32693。在一些实施方案中，本发明的破囊壶菌细胞是Sicyoidochytrium或破囊壶菌属细胞。在一些实施方案中，破囊壶菌的属选自裂殖壶菌属菌种、Schizochytriumaggregatum、Schizochytrium limacinum、Schizochytrium minutum、破囊壶菌属菌种、Thraustochytrium striatum、Thraustochytrium aureum、Thraustochytrium roseum、Japonochytrium属菌种及其衍生株。如本发明所使用的，术语“转化”是指能够将核酸分子(即，重组核酸分子)插入本发明的破囊壶菌细胞的任何方法。在微生物体系中，术语“转化”用来描述由于微生物获得外源核酸所致的一种遗传性改变而且基本上与术语“转染”同义。用于将核酸分子引入破囊壶菌细胞的合适的转化技术，包括但不限于粒子轰击、电穿孔、显微注射，脂转染、吸附、感染和原生质体融合。虽然短语“核酸分子”主要是指物理的核酸分子而短语“核酸序列”或“多核苷酸序列”主要是指核酸分子中的核苷酸序列，但所述短语可以互换使用，尤其是能够编码蛋白的核酸分子、多核苷酸序列、或核酸序列。在一些实施方案中，利用重组DNA技术(例如，聚合酶链反应(PCR)扩增或克隆)或化学合成产生本文所述的分离的核酸分子。根据本发明，“分离的”核酸分子是已自其天然环境移出的核酸分子(即已经过人为操作)，其天然环境是该核酸分子在自然界中存在于其中的基因组或染色体。如此，“分离的”并不一定反映核酸分子已被纯化的程度，但表示该分子不包括该核酸分子在自然界中存在于其中的整个基因组或整个染色体。分离的核酸分子可以包括DNA、RNA (例如mDNA)，或DNA或RNA的衍生物(例如cDNA)。分离的核酸分子包括天然核酸分子及其同源物，包括但不限于，天然的等位基因变体和修饰的核酸分子，其中已经将核苷酸以如下方式插入、删除、取代和/或倒置，该方式使得这样的修饰在所编码的肽或蛋白的序列、功能和/或生物活性上提供期望的效果。术语“蛋白质”包括单链多肽分子以及其中单独的组分多肽通过共价或非共价手 段连接的多重多肽复合物。术语“多肽”包括两个或更多个氨基酸长度的肽，通常具有超过5、10或20个氨基酸。在一些实施方案中，本文所述的多肽是异源多肽。本文使用的术语“异源”是指序列，例如，其不在本发明的破囊壶菌细胞中天然存在。本发明涉及用包含编码与木糖代谢相关的多肽的多核苷酸序列的核酸分子转化的破囊壶菌细胞。根据存在于破囊壶菌中的天然基因，可以将完成或补充木糖代谢途径的一种或多种基因引入到破囊壶菌中以允许在木糖上生长。在某些实施方案中，多肽或多肽的组合参与木糖向木酮糖-5-磷酸的转换(例如，为了进入磷酸戊糖途径)。在某些实施方案中，木糖向木酮糖-5-磷酸的转换包括3个步骤木糖输入，木糖向木酮糖的转换，和木酮糖磷酸化。在某些实施方案中，本发明的多肽参与木糖输入(例如，木糖共转运体(symporter)或木糖转运蛋白)，木糖向木酮糖直接(例如，木糖异构酶)或经由中间体的糖醇木糖醇(例如，木糖还原酶或木糖醇脱氢酶)的转换，和/或木酮糖磷酸化(例如，木酮糖激酶)。在某些实施方案中，用一种或多种编码涉及木糖输入、木糖向木酮糖的转换、和/或木酮糖磷酸化的多肽的多核苷酸序列转化破囊壶菌细胞。在一些实施方案中，所述多肽是异源多肽。在一些实施方案中，本发明的破囊壶菌细胞包含编码异源木糖转运蛋白(例如，登录号AJ875406和/或BT015128)、异源木糖异构酶(例如，登录号CAB76571)、异源木酮糖激酶(例如，登录号AF127802和/或AJ249910)、异源木糖还原酶(例如，登录号X59465)、异源木糖醇脱氢酶(例如，登录号X55392)、或其任意组合的多核苷酸序列。在一些实施方案中，破囊壶菌细胞包含编码木糖转运蛋白(例如，登录号AJ875406和/或BT015128)、木糖异构酶(例如，登录号CAB76571)、和木酮糖激酶(例如，登录号AF127802和/或AJ249910)的多核苷酸序列。在一些实施方案中，木糖异构酶是WO 03/062430A1中描述的。在一些实施方案中，多核苷酸序列经密码子优化以使在破囊壶菌细胞中的翻译效率最大化。在一些实施方案中，将编码木糖转运蛋白、木糖异构酶、木酮糖激酶、木糖还原酶、木糖醇脱氢酶或其任意组合的多核苷酸序列整合到破囊壶菌细胞的基因组中。在一些实施方案中，将编码木糖转运蛋白、木糖异构酶、木酮糖激酶、木糖还原酶、木糖醇脱氢酶或其任意组合的多核苷酸序列稳定整合到破囊壶菌细胞的基因组中。在一些实施方案中，本发明的破囊壶菌细胞包含一种或多种包含编码与木糖输入、木糖向木酮糖的转换、或木酮糖磷酸化相关的三种或更多种多肽的一种或多种多核苷酸序列的核酸分子。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括一种或多种与木糖输入相关的多肽、一种或多种与木糖向木酮糖的转换相关的多肽、和一种或多种与木酮糖磷酸化相关的多肽。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括两种或多种与木糖输入相关的多肽、一种或多种与木糖向木酮糖的转换相关的多肽、和零或多种与木酮糖磷酸化相关的多肽。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括两种或多种与木糖输入相关的多肽、零或多种与木糖向木酮糖的转换相关的多肽、和一种或多种与木酮糖磷酸化相关的多肽。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括一种或多种与木糖输入相关的多肽、两种或多种与木糖向木酮糖的转换相关的多肽、和零或多种与木酮糖磷酸化相关的多肽。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括一种或多种与木糖输入相关的多肽、零或多种与木糖向木酮糖的转换相关的多肽、和两种或多种与木酮糖磷酸化相关的多肽。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括零或多种与木糖输入相关的多肽、两种或多种与木糖向木酮糖的转换相关的多肽、和一种或多种与木酮糖磷酸化相关的多肽。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括零或多种与木 糖输入相关的多肽、一种或多种与木糖向木酮糖的转换相关的多肽、和两种或多种与木酮糖磷酸化相关的多肽。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括异源木糖转运蛋白、异源木酮糖激酶、和异源木糖异构酶。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括异源木糖转运蛋白、异源木酮糖激酶、和异源木糖还原酶。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括异源木糖转运蛋白、异源木酮糖激酶、和异源木糖醇脱氢酶。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括异源木糖转运蛋白、异源木酮糖激酶、异源木糖还原酶、和异源木糖醇脱氢酶。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括异源木糖转运蛋白、异源木酮糖激酶、异源木糖异构酶、和异源木糖醇脱氢酶。在一些实施方案中，三种或多种多肽的组合可以包括异源木糖转运蛋白、异源木酮糖激酶、异源木糖还原酶、和异源木糖异构酶。在一些实施方案中，前述组合的任一组包括其中任何与木糖输入、木糖向木酮糖的转换、和木酮糖磷酸化相关的多肽来自不同生物的组合。在一些实施方案中，用于在破囊壶菌细胞中产生木糖转运蛋白、木糖异构酶、木酮糖激酶、木糖还原酶、木糖醇脱氢酶或其任意组合的表达系统包含源自破囊壶菌序列的调节元件。在一些实施方案中，用于在破囊壶菌细胞中产生木糖转运蛋白、木糖异构酶、木酮糖激酶、木糖还原酶、木糖醇脱氢酶或其任意组合的表达系统包含源自非破囊壶菌序列的调节元件，包括源自非破囊壶菌藻类序列的序列。在一些实施方案中，表达系统包含编码木糖转运蛋白、木糖异构酶、木酮糖激酶、木糖还原酶、木糖醇脱氢酶或其任意组合的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸序列与任意启动子序列、任意终止子序列、和/或任意在破囊壶菌细胞中有功能的其他调节序列可操作地连接。可以使用诱导型或组成型活性的调节序列。调节序列包括但不限于美国申请
发明者J.C.利普梅尔, K.E.埃普特 申请人:Dsm Ip资产公司