专利名称：过山蕨的应用以及一种肝功修正茶的制作方法
技术领域：
本发明涉及中医药技术领域，具体涉及过山蕨的应用以及一种肝功修正茶。
技术背景
肝损伤是临床常见的危害人类健康的疾病。肝损伤就是肝脏受到外界因素的入侵，从而引起的肝脏受损。肝损伤分为病理性肝损伤和化学性肝损伤。化学性肝损伤是指包括药物、毒物在内的多种因素引起的肝损伤；而病理性肝损伤主要包括甲、乙、丙、丁、戊五种病毒性肝炎引起的肝损伤和肝癌等引起的肝损伤；肝损伤发生通常会引发肝功能失常， 还会导致肝纤维化，甚至肝硬化、肝癌的发生。
肝损伤过程大多与氧化应激和免疫有关，其能诱导肝细胞生物膜系统发生脂质过氧化，干扰细胞内的能量代谢，活化细胞死亡程序等，最终以丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶升高以及肝组织中转化生长因子β KTGF-β 1)、组织金属蛋白酶抑制物 (TIMP-I)、层粘蛋白(LN)、及1-3型胶原(Col-I、Col-II, Col-III)等的含量增高为表现， 形成不同程度的肝功能失常。
中药具有明显的保肝护肝作用，无论是中药化学成分还是中药复方多是通过调节免疫、提高抗氧化能力、降低组织细胞中自由基等维护肝细胞膜完整、减缓肝细胞凋亡， 从而保护肝脏免受损伤。过山蕨，又名马蹬草、还阳草、过桥草，为铁角蕨科植物过山蕨 (Camptosorus sibiricus Rupr)的地上全草，主产于东北、华北、西北、内蒙古等地，历代本草未见有关其药用记载，民间用于治疗外伤出血、子宫出血、血栓闭塞性脉管炎、神经性皮炎、脑栓塞引起的偏瘫以及糖尿病并发症等。现代药理研究表明过山蕨水醇提取液对兔耳血管、蟾蜍后肢血管以及家兔肢体后肢血管有扩张作用，其有效部位为总黄酮和有机酸。但是，对于过山蕨在预防和治疗肝损伤方面并未见任何报道。发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供过山蕨的一种新应用以及一种肝功修正茶。
过山蕨在历代本草中未见有关其药用记载，其主要用于治疗外伤出血、子宫出血、 血栓闭塞性脉管炎、神经性皮炎、脑栓塞引起的偏瘫以及糖尿病并发症等。而经本申请人对过山蕨的深入研究发现，过山蕨对各种原因引起的肝损伤以及肝功能失调具有明显的修复和保护作用。
因此，本发明提出了过山蕨在制备预防和治疗肝损伤以及由肝损伤引起的肝功能失常药物中的应用。
本发明所述肝损伤优选为化学性肝损伤和病理性肝损伤。其中，作为优选，所述化学性肝损伤为由四氯化碳引起的急性肝损伤、由四氯化碳引起的慢性肝损伤、由酒精引起的急性肝损伤、由扑热息痛引起的急性肝损伤或由地塞米松联合酒精引起的脂肪肝。所述病理性肝损伤为由刀豆蛋白A引起的免疫性肝损伤。
此外，本发明还提供一种肝功修正茶，由过山蕨全草经烘干、粉碎后制得或由过山蕨全草经烘干、粉碎后水煎，水煎提取液浓缩为原体积40-60%即得。由过山蕨全草经烘干、 粉碎后制得的肝功修正茶以热水浸泡饮用；由过山蕨全草经烘干、水煎后，浓缩提取液制得的肝功修正茶可直接饮用浓缩提取液，作为优选，所述浓缩百分比为50%。两者口服、注射对各种原因引起的肝损伤的药效显著，能够广泛应用于预防和治疗肝损伤以及由肝损伤引起的肝功能失常中。
本发明所述肝功修正茶动物有效剂量范围按过山蕨全草干品折算为口服 0. l-10g/kg(体重)/日、皮下注射0. l_5g/kg(体重)/日、静注0. l_5g/kg(体重)/日，优选剂量为口服0. 25"5g/kg (体重)/日、皮下注射0. 25-2. 5g/kg (体重)/日、静注0. 25-2. 5/ kg(体重)/日。人用有效剂量范围为口服0.8-80g/日、皮下注射0.8-40g/日、静注 0. 8-40g/日，优选剂量为口服2-40g/日、皮下注射2-20g/日、静注2_20g/日。
在研发预防和治疗肝损伤的药物过程中，本领域技术人员公知由四氯化碳引起的肝损伤模型最能代表典型化学性肝损伤的病理特征，因此本发明将所述肝功修正茶以高、 中、低3个剂量组对由四氯化碳引起的小鼠急性肝损伤和小鼠慢性肝损伤进行药效试验， 结果显示，本发明所述肝功修正茶对四氯化碳引起的急性肝损伤小鼠有降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)作用，可以显著阻止四氯化碳引起的急性肝损伤；
而对慢性肝损伤小鼠也有降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)作用，还可以显著降低肝组织中转化生长因子i3 1(TGF_i3 1)、组织金属蛋白酶抑制物(TIMP-I)、层粘蛋白(LN)、及1-3型胶原(Col-I，Col-II，Col-III)含量等含量，改善小鼠慢性肝损伤肝纤维化病理状态。
除此之外，本发明同样以高、中、低3个剂量组对由酒精引起的急性肝损伤、由扑热息痛引起的急性肝损伤和由地塞米松联合酒精引起的脂肪肝进行了药效试验，试验结果表明本发明所述肝功修正茶能够有效阻止各种上述原因引起的肝损伤。
病理性肝损伤主要发病原因是甲肝病毒、乙肝病毒等分泌出类似于刀豆蛋白A — 样的免疫原物质，从而与肝细胞发生免疫反应，损害肝细胞。因此，本发明同样将所述肝功修正茶以高、中、低3个剂量组由刀豆蛋白A引起的免疫性肝损伤进行药效试验，结果显示本发明所述肝功修正茶试验组和模型组具有显著差异，能够有效防止免疫性肝损伤，表明本发明所述肝功修正茶能够预防和治疗病理性肝损伤。
由于本发明所述肝功修正茶能够有效阻止多种原因引起的肝损伤，故其对由肝损伤引起的肝功能失常也具有显著疗效。
由以上技术方案可知，本发明所述以过山蕨为活性物质制成的肝功修正茶对由多种原因引起的化学性肝损伤和病理性肝损伤均有显著疗效，表明过山蕨能够应用于制备预防和治疗肝损伤以及由肝损伤引起的肝功能失常药物中。
图1所示为肝功修正茶中剂量组对CCl4引起的急性肝损伤小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的影响的柱形其中，1所示为正常对照组，2所示为CCl4模型组，3所示为肝功修正茶中剂量组； **表示肝功修正茶中剂量组与CCl4模型组具有显著性差异，P <0.01；
图2所示为肝功修正茶中剂量组对CCl4引起的慢性肝损伤小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的影响的柱形其中，1所示为正常对照组，2所示为CCl4模型组，3所示为肝功修正茶中剂量组； **表示肝功修正茶中剂量组与CCl4模型组具有显著性差异，P <0.01；
图3所示为肝功修正茶中剂量组对CCl4引起的慢性肝损伤小鼠肝组织中转化生长因子β KTGF-β 1)、组织金属蛋白酶抑制物(TIMP-I)及层粘蛋白(LN)含量的影响的柱形其中，1所示为正常对照组，2所示为CCl4模型组，3所示为肝功修正茶中剂量组； ”表示肝功修正茶中剂量组与CCl4模型组具有显著性差异，P < 0. 01 ；*表示肝功修正茶中剂量组与CCl4模型组具有显著性差异，P < 0. 05 ；
图4所示为肝功修正茶中剂量组对CCl4引起的急性肝损伤小鼠肝组织中1-3型胶原(Col-Ι，Col-II，Col-III)含量的影响的柱形其中，1所示为正常对照组，2所示为CCl4模型组，3所示为肝功修正茶中剂量组广表示肝功修正茶中剂量组与CCl4模型组具有显著性差异，P < 0. 05 ；
图5所示为肝功修正茶中剂量组对扑热息痛引起的急性肝损伤小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的影响的柱形其中，1所示为正常对照组，2所示为扑热息痛模型组，3所示为肝功修正茶中剂量组广表示肝功修正茶中剂量组与扑热息痛模型组具有显著性差异，P < 0. 01 ；
图6所示为肝功修正茶中剂量组对酒精引起的急性肝损伤小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的影响的柱形其中，1所示为正常对照组，2所示为酒精模型组，3所示为肝功修正茶中剂量组广表示肝功修正茶中剂量组与酒精模型组具有显著性差异，P < 0.01 ；
图7所示为肝功修正茶中剂量组对酒精引起的急性肝损伤小鼠肝组织过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的影响的柱形其中，1所示为正常对照组，2所示为酒精模型组，3所示为肝功修正茶中剂量组广表示肝功修正茶中剂量组与酒精模型组具有显著性差异，P < 0. 05 ；
图8所示为肝功修正茶中剂量组对刀豆蛋白A(ConA)引起的免疫性肝损伤小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的影响的柱形其中，1所示为正常对照组，2所示为ConA模型组，3所示为肝功修正茶中剂量组； **表示肝功修正茶中剂量组与ConA模型组具有显著性差异，P < 0. 01 ；
图9所示为肝功修正茶中剂量组对地塞米松联合酒精引起的脂肪肝小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的影响的柱形其中，1所示为正常对照组，2所示为地塞米松-酒精模型组，3所示为肝功修正茶中剂量组广表示肝功修正茶中剂量组与地塞米松-酒精模型组具有显著性差异，P < 0. 01 ；
图10所示为肝功修正茶中剂量组对地塞米松联合酒精引起的脂肪肝小鼠血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的影响的柱形其中，1所示为正常对照组，2所示为地塞米松-酒精模型组，3所示为肝功修正茶中剂量组；*表示肝功修正茶中剂量组与地塞米松-酒精模型组具有显著性差异，P具体实施方式
本发明公开了过山蕨的应用以及一种肝功修正茶，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
下面就本发明提供的过山蕨的应用以及一种肝功修正茶做进一步说明。
实施例1 本发明所述肝功修正茶对四氯化碳小鼠急性肝损伤的影响
1、试验方法
将50只昆明小鼠适应性喂养1周后随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别为 正常对照组、四氯化碳模型组、肝功修正茶低剂量、中剂量、高剂量组。
将过山蕨全草地上部分洗净、烘干、粉碎后过40目筛得粗粉备用。每30g粗粉加新制沸开水IOOml浸泡15min后过滤，所得溶液为高剂量组药液；每15g粗粉加新制沸开水 IOOml浸泡15min后过滤，所得溶液为中剂量组药液；每7. 5g粗粉加新制沸开水IOOml浸泡15min后过滤，所得溶液为低剂量组药液；三组加水的体积、温度以及浸泡时间均一致。
正常对照组和四氯化碳模型组灌胃10ml/kg的生理盐水，其它各剂量组灌胃同等容量的相应药物，每天1次，连续10天。第9次给药后lh，各组小鼠腹腔注射10%的CCl4 橄榄油溶液0. ani/只(正常组只注射同容量橄榄油)。CCI4注射后，禁食不禁水Mh (末次给药后Ih)。将小鼠摘除眼球取血，制备血清，用南京建成生物工程研究所生产的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒检测血清ALT、AST活性，结果见图 1。处死小鼠，随即取部分肝组织，置于10%的甲醛溶液中进行固定，制备病理组织切片，苏木精-伊红染色，显微镜下观察病理学变化。
2、结果
腹腔注射CCl4可引起小鼠急性肝损伤，肝脏中的细胞色素P450可将CCl4激活为· CCl3* · Cl，这些自由基经过一系列复杂的反应，可以破坏肝脏细胞膜结构，使其通透性增加，导致ALT、AST等转氨酶渗入血液，使血清中转氨酶的活性显著升高。灌胃不同剂量的肝功修正茶后，急性肝损伤小鼠ALT和AST活性明显降低(见图1，图中仅以1. 5g/kg剂量治疗组做代表)，其余各剂量与1. 5g/kg剂量治疗组间无显著差异。
病理检测检测结果显示，正常对照组小鼠肝脏色泽暗红，被膜光滑，肝边缘轮廓清晰，表面无任何斑点；镜下观察可见肝组织结构完整，肝细胞未见变性、坏死。
CCl4模型组肝脏体积增大，颜色发白，呈粉色，表面有明显的斑点状花纹和大量出血点，局部有淤血，无光泽，有的与邻近器官轻度粘连；镜下观察可见肝小叶界限不清，肝细胞广泛性的水样变性，肝小叶内有大片灶性坏死区。
肝功修正茶各剂量组小鼠肝脏均呈深粉红色，表面有少量出血点，有光泽，肝叶轮廓清晰，斑点数量明显少于CCl4模型组。镜下观察可见肝小叶结构清晰、完整，肝细胞轻度浊肿，炎细胞浸润明显减轻，灶状坏死范围明显减小。
实施例2 本发明所述肝功修正茶对四氯化碳小鼠慢性肝损伤的影响
1、试验方法
将50只昆明小鼠适应性喂养1周后随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别为 正常对照组、四氯化碳模型组、肝功修正茶低剂量、中剂量、高剂量组(0. 75g/kg、l. 5g/kg、 3g/kg)ο
将过山蕨全草地上部分洗净、烘干、粉碎后过40目筛得粗粉备用。高剂量组每30g 粗粉加水200ml煮沸15min后过滤，浓缩为IOOml提取液为高剂量组药液；中剂量组每15g 粗粉加水200ml煮沸15min后过滤，浓缩为IOOml提取液为中剂量组药液；低剂量组每7. 5g 粗粉加水200ml煮沸15min后过滤，浓缩为IOOml提取液为低剂量组药液；三组加水的体积、水煎时间以及浓缩倍数均一致。
正常对照组和四氯化碳模型组灌胃10ml/kg的生理盐水，其它各组灌胃同等容量的相应药物，每天1次，连续4周。除正常对照组外，其余各组小鼠均自试验开始之日起，给予40% CCl4橄榄油溶液0. 05ml/只皮下注射，每周2次(周一和周四各1次)，共4周。正常对照组皮下注射等量的橄榄油，次数相同。末次给药后小鼠禁食不禁水Mh (全程给药结束后Mh)，摘眼球取血，离心取血清，用南京建成生物工程研究所生产的丙氨酸氨基转移酶 (ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒检测血清ALT、AST活性，结果见图2。
处死小鼠，取部分肝脏制备肝组织勻浆，用进口分装的转化生长因子 β I(TGF-M)、组织金属蛋白酶抑制物(TIMP-I)、层粘蛋白(LN)、及1、3、4型胶原(Col-I, Col-III, Col-IV)ELISA试剂盒检测肝组织中转化生长因子β KTGF-β 1)、组织金属蛋白酶抑制物(TIMP-I)、层粘蛋白(LN)、及1-3型胶原(Col-I，Col-II, Col-III)含量，结果见图3、图4。
另取部分肝组织，置于10%的甲醛溶液中进行固定，制备病理组织切片，苏木精-伊红染色，显微镜下观察病理学变化。
2、结果
多次注射CCl4可引起小鼠肝脏慢性损伤纤维化病变，同时伴随血清中转氨酶的活性升高。灌胃不同剂量的肝功修正茶对CCl4引起的慢性肝损伤小鼠均有降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)作用(见图2，图中仅以1. 5g/kg剂量治疗组做代表)，可以显著降低肝组织中转化生长因子β KTGF-β 1)、组织金属蛋白酶抑制物 (TIMP-I)、层粘蛋白(LN)、及 1-3 型胶原(Col-I，Col-II, Col-III)含量(见图 3、图 4，图中仅以1.5g/kg剂量治疗组做代表)，其余各剂量与1.5g/kg剂量治疗组间无显著差异。
病理检测结果显示，正常对照组小鼠肝脏表面光滑，色暗红，有光泽，质软；镜下观察可见肝小叶、汇管区结构正常，肝小叶结构完整，肝细胞排列呈索状，无脂肪变、坏死和炎细胞浸润。
CCl4模型组肝脏表面凹凸不平，见细小沙粒状颗粒，质脆，光泽度欠佳；镜下观察可见肝组织大量脂质空泡形成，弥漫性大泡性脂肪变，大量炎细胞浸润和坏死汇管区及纤维间隔可见大量炎性细胞浸润，肝小叶间隔明显增宽和大量胶原纤维沉积，肝内有类假小叶样结构。
肝功修正茶各组小鼠肝脏表面尚光滑，沙粒状颗粒明显减少。镜下观察病变程度较模型组脂质空泡明显减少，肝小叶基本完整，残存部分正常肝细胞纤维组织增生不明显。
实施例3 本发明所述肝功修正茶对扑热息痛致小鼠急性肝损伤的影响
1、试验方法
将50只昆明小鼠适应性喂养1周后随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别为 正常对照组、扑热息痛模型组、肝功修正茶低剂量、中剂量、高剂量组(0. 75g/kg、l. 5g/kg、 3g/kg)ο
将过山蕨全草地上部分洗净、烘干、粉碎后过40目筛得粗粉备用。每30g粗粉加新制沸开水IOOml浸泡15min后过滤，所得溶液为高剂量组药液；每15g粗粉加新制沸开水 IOOml浸泡15min后过滤，所得溶液为中剂量组药液；每7. 5g粗粉加新制沸开水IOOml浸泡15min后过滤，所得溶液为低剂量组药液；三组加水的体积、温度以及浸泡时间均一致。
正常对照组和扑热息痛模型组灌胃10ml/kg的生理盐水，其它各组灌胃同等容量的相应药物，每天1次，连续10天。第9次给药后lh，各组小鼠腹腔注射3%的扑热息痛溶液0. 2ml/只(正常对照组除外)。扑热息痛注射后，禁食不禁水24h (末次给药后Ih)。将小鼠摘除眼球取血，制备血清，用南京建成生物工程研究所生产的丙氨酸氨基转移酶(ALT) 和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒检测血清ALT、AST活性，结果见图5。
处死小鼠，随即取部分肝组织，置于10%的甲醛溶液中进行固定，制备病理组织切片，苏木精-伊红染色，显微镜下观察病理学变化。
2、结果
扑热息痛进入人体内后，过量的有毒代谢产物与细胞膜结合，引起细胞膜脂质过氧化反应，破坏细胞内钙离子平衡，导致细胞的死亡，血清转氨酶水平显著升高。灌胃不同剂量的肝功修正茶对扑热息痛引起的急性肝损伤小鼠均有降低血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)作用(见图5，图中仅以1. 5g/kg剂量治疗组做代表)， 其余各剂量与1. 5g/kg剂量治疗组间无显著差异。
病理检测结果显示，正常对照组小鼠肝小叶结构清晰，核大而清晰，胞质丰富，含有团块嗜碱质，肝细胞索围绕中央静脉呈放射状排列整齐，肝窦正常，胞核结构清晰，肝细胞无变性、坏死、充血及炎细胞浸润的病理现象。
扑热息痛模型组小鼠，肝脏有明显的充血及空泡样变，嗜酸性变增多，肝窦消失， 肝脏小叶中央静脉周围的肝细胞有不同程度的变性与坏死，胞核固缩或已溶解破碎，伴中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞等炎性细胞浸润，肝细胞索正常形态被破坏。
肝功修正茶各组小鼠肝脏充血不明显，肝细胞浊肿明显减轻，肝窦已变宽，炎性细胞浸润明显减少，肝细胞再生明显。
实施例4 本发明所述肝功修正茶对酒精致小鼠急性肝损伤的影响
1、试验方法
将50只昆明小鼠适应性喂养1周后随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别为 正常对照组、酒精模型组、肝功修正茶低剂量、中剂量、高剂量组(0. 75g/kg、l. 5g/kg、3g/ kg)。
将过山蕨全草地上部分洗净、烘干、粉碎后过40目筛得粗粉备用。高剂量组每30g 粗粉加水200ml煮沸15min后过滤，浓缩为IOOml提取液为高剂量组药液；中剂量组每15g 粗粉加水200ml煮沸15min后过滤，浓缩为IOOml提取液为中剂量组药液；低剂量组每7. 5g 粗粉加水200ml煮沸15min后过滤，浓缩为IOOml提取液为低剂量组药液；三组加水的体积、水煎时间以及浓缩倍数均一致。
正常对照组和酒精模型组灌胃10ml/kg的生理盐水，其它各组灌胃同等容量的相应药物，每天1次，连续10天。第9次给药后lh，各组小鼠腹腔注射市售52°的泸州老窖白酒O.aiil/只(正常组除外)。白酒注射后，禁食不禁水Mh (末次给药后Ih)。将小鼠摘除眼球取血，制备血清，用南京建成生物工程研究所生产的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒检测血清ALT、AST活性，结果见图6。
处死小鼠，取部分肝脏制备肝组织勻浆，用南京建成生物工程研究所生产的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒检测肝组织中过氧化氢酶 (CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量，结果见图7。
另取部分肝组织，置于10%的甲醛溶液中进行固定，制备病理组织切片，苏木精-伊红染色，显微镜下观察病理学变化。
2、结果
小鼠酒精性肝损伤是模拟人体过量饮酒导致肝脏损害的动物模型，以转氨酶升高和抗氧化酶降低为表现形式。灌胃不同剂量的肝功修正茶对酒精引起的急性肝损伤小鼠均有降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)作用(见图6，图中仅以 1. 5g/kg剂量治疗组做代表)，可以增加肝组织过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)， 降低肝组织丙二醛(MDA)含量(见图7，图中仅以1.5g/kg剂量治疗组做代表)，其余各剂量与1. 5g/kg剂量治疗组间无显著差异。
病理检测结果显示，正常对照组小鼠肝小叶结构清晰，细胞索排列整齐，肝细胞无明显病变。
酒精模型组肝组织结构紊乱，小叶界限不清，肝窦变窄，肝细胞出现散在和片状气球样变，可见肝细胞肿胀和炎症细胞浸润。
肝功修正茶各组小鼠肝脏小叶界限基本清晰，肝细胞肿胀和炎症细胞浸润现象明显减轻，肝窦已变宽，肝组织结构排列接近正常。
实施例5 本发明所述肝功修正茶对刀豆蛋白A(ConA)致小鼠免疫性肝损伤的影响
1、试验方法
将50只昆明小鼠适应性喂养1周后随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别为 正常对照组、ConA模型组、肝功修正茶低剂量、中剂量、高剂量组(0. 75g/kg、l. 5g/kg、3g/ kg)。
将过山蕨全草地上部分洗净、烘干、粉碎后过40目筛得粗粉备用。每30g粗粉加新制沸开水IOOml浸泡15min后过滤，所得溶液为高剂量组药液；每15g粗粉加新制沸开水 IOOml浸泡15min后过滤，所得溶液为中剂量组药液；每7. 5g粗粉加新制沸开水IOOml浸泡15min后过滤，所得溶液为低剂量组药液；三组加水的体积、温度以及浸泡时间均一致。
正常对照组和ConA模型组灌胃10ml/kg的生理盐水，其它各组灌胃同等容量的相应药物，每天1次，连续10天。末次给药后lh，各组小鼠尾静脉注射ConA 15mg/kg(正常组除外)。注射ConA他后小鼠摘眼球采血，分离血清，用南京建成生物工程研究所生产的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒检测血清ALT、AST活性，结果见图8。
处死小鼠，随即取部分肝组织，置于10%的甲醛溶液中进行固定，制备病理组织切片，苏木精-伊红染色，显微镜下观察病理学变化。
2、结果
ConA注射后通过活化T淋巴细胞导致免疫性肝损伤，是适合研究人类病毒性肝炎、自身免疫性肝病的病理机制和进行抗肝损伤药物筛选的动物模型。灌胃不同剂量的肝功修正茶对刀豆蛋白A(ConA)引起的免疫性肝损伤小鼠均有降低血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)作用(见图8，图中仅以1.5g/kg剂量治疗组做代表)， 其余各剂量与1. 5g/kg剂量治疗组间无显著差异。
病理检测结果显示，正常小鼠，肝脏内可见多个肝小叶，肝索排列规整，肝小叶的结构清晰，门管区结构清楚，无明显炎细胞浸润和肝细胞坏死。
ConA模型组小鼠，肝索排列紊乱，肝小叶结构破坏，有较多淋巴细胞和单核细胞浸润，可见小灶状肝细胞坏死。
肝功修正茶各组小鼠，肝小叶结构基本保留，肝索排列基本规整，门管区有少量淋巴细胞、单核细胞浸润，未见明显肝细胞坏死，病变较模型对照组明显减轻。
实施例6 本发明所述肝功修正茶对地塞米松联合酒精致小鼠脂肪肝的影响
1、试验方法
将50只昆明小鼠适应性喂养1周后随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别为正常对照组、地塞米松-酒精模型组、肝功修正茶低剂量、中剂量、高剂量组(0. 75g/kg、 1.5g/kg、3g/kg)。
将过山蕨全草地上部分洗净、烘干、粉碎后过40目筛得粗粉备用。高剂量组每30g 粗粉加水200ml煮沸15min后过滤，浓缩为IOOml提取液为高剂量组药液；中剂量组每15g 粗粉加水200ml煮沸15min后过滤，浓缩为IOOml提取液为中剂量组药液；低剂量组每7. 5g 粗粉加水200ml煮沸15min后过滤，浓缩为IOOml提取液为低剂量组药液；三组加水的体积、水煎时间以及浓缩倍数均一致。
正常对照组和地塞米松-酒精模型组灌胃10ml/kg的生理盐水，其它各组灌胃同等容量的相应药物，每天1次，连续9天。从第1天起，除正常对照组外每组小鼠给药后Ih 灌胃市售35°的泸州老窖白酒O.aiil/只，每天1次，连续9天。第5天起，除正常对照组外每组小鼠灌胃市售35°的泸州老窖白酒后腹腔注射地塞米松注射液10mg/kg，每天1次，连续4天。全程造模给药结束后，禁食不禁水24h将小鼠摘除眼球取血，制备血清，用南京建成生物工程研究所生产的丙氨酸氨基转移酶(ALT)，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)试剂盒检测血清ALT、AST活性和TC、TG含量，结果见图9、图10。
处死小鼠，随即取部分肝组织，置于10%的甲醛溶液中进行固定，制备病理组织切片，苏木精-伊红染色，显微镜下观察病理学变化。
2、结果
地塞米松联合酒精小鼠脂肪肝模型表现为血脂升高，同时出现转氨酶升高的肝功能异常。灌胃不同剂量的肝功修正茶对地塞米松联合酒精引起的脂肪肝小鼠均有降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)作用(见图9、图10，图中仅以1. 5g/kg剂量治疗组做代表)，其余各剂量与1. 5g/kg剂量治疗组间无显著差异。
病理检测结果显示，正常组小鼠，肝小叶清晰可见，肝窦清晰可见，肝索排列整齐，1肝细胞无脂肪变性，细胞形态无明显异常。
地塞米松-酒精模型小鼠，肝脏出现大泡性的肝细胞脂肪变性，变性的肝细胞弥漫累及几乎所有肝小叶，肝细胞肿胀呈圆形，细胞核被挤向一边，胞浆内充满大量脂肪空泡，界限不清楚。
肝功修正茶各组小鼠，肝脏脂肪变性明显改善，脂滴减少或消失，肝细胞结构基本恢复正常。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
权利要求
1.过山蕨在制备预防和治疗肝损伤以及由肝损伤引起的肝功能失常药物中的应用。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述肝损伤为化学性肝损伤和病理性肝损伤。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述化学性肝损伤为由四氯化碳引起的急性肝损伤、由四氯化碳引起的慢性肝损伤、由酒精引起的急性肝损伤、由扑热息痛引起的急性肝损伤或由地塞米松联合酒精引起的脂肪肝。
4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述病理性肝损伤为由刀豆蛋白A引起的免疫性肝损伤。
5.一种肝功修正茶，其特征在于，由过山蕨全草经烘干、粉碎后制得或由过山蕨全草经烘干、粉碎后水煎，水煎提取液浓缩为原体积40-60%即得。
6.根据权利要求5所述肝功修正茶，其特征在于，所述浓缩百分比为50%。
全文摘要
本发明试剂中医药技术领域，公开了过山蕨的应用以及一种肝功修正茶。本发明所述以过山蕨为活性物质制成的肝功修正茶对由酒精、四氯化碳、扑热息痛、地塞米松联合酒精、刀豆蛋白A等多种原因引起的化学性肝损伤和病理性肝损伤均有显著疗效，表明过山蕨能够应用于制备预防和治疗多种原因引起的肝损伤以及由肝损伤引起的肝功能失常药物中。
文档编号A23F3/34GK102526130SQ20111034822
公开日2012年7月4日 申请日期2011年11月7日 优先权日2011年11月7日
发明者卢丹丹, 卢建立, 卢琳琳, 孙婷, 张亚平, 时小燕, 杜钢军, 林海红, 黄秀曼 申请人:卢建立, 杜钢军