可溶性人st-2抗体和分析法的制作方法

专利名称：可溶性人st-2抗体和分析法的制作方法
技术领域：
本文描述的是能够结合人可溶性生长刺激表达基因2 (ST2)蛋白的抗体和抗体的抗原结合片段、含有所述抗体和抗体片段的试剂盒，以及使用这些抗体和抗体片段进行的分析检验。背景ST2是有跨膜(ST2L)和可溶性(sST2或可溶性ST2)两种亚型的白介素_1受体家族成员(Iwahana et al.，Eur.J.Biochem.264:397-406，1999)。近年发表的文章描述了目前对 ST2 与炎症性疾病关系的了解(Arend et al., Immunol.Rev.223:20-38, 2008;Kakkaret al.，Nat.Rev.Drug Discov.7:827-840，2008; Hayakawa et al.，J.Biol.Chem.282: 26369-26380, 2007;Trajkovic et al., CytokineGrowth Factor Rev.15:87-95，2004)。人可溶性ST2的循环浓度在患有与异常2型辅助T细胞(Th2)应答相关的多种疾病(包括系统性红斑狼疮和哮喘)的患者中以及基本独立于Th2应答的炎症状况(比如感染性休克或外伤)中出现升高(Trajkovic et al., Cytokine Growth FactorRev.15:87-95, 2004;Brunner et al., Intensive Care Med.30:1468-1473，2004)。 而且，白介素33/ST2L信号传导代表了机械超荷情况时的一种关键心肌保护机制(Sekiet al., Circulation HeartFai1.2:684-691，2009;Kakkar et al., Nat.Rev.DrugDiscov.7:827-40, 2008; Sanada et al.，J.Clin.1nvest.117:1538-1549，2007)。人可溶性ST2的升高还预示 了心衰(HF)和心肌梗塞患者的更差预后(Kakkar et al., Nat.Rev.Drug Discov.7:827-40, 2008;Weinberg et al., Circulation 107:721-726，2003;Shimpoet al., Circulation 109:2 186-2 190，2004;Januzzi et a 1., J.Am.Coll.Cardiol.50:607-613, 2007;Mueller et al., Clin.Chem.54:752-756, 2008;Rehmanet al., J.Am.Col 1.Cardiol.52:1458-65,2008;Sabatine et al., Circulation117:1936-1944, 2008) 人可溶性ST2水平升高还预示了个体在一年内发生死亡(参见例如W007/127749)。总之，人可溶性ST2被认为与某些炎症性疾病和心肌保护旁分泌系统有关，并且是心衰患者预后和受试者在一年内死亡的预测指标。概述本发明至少部分基于人可溶性ST2蛋白特异性新抗体的开发。这些抗体及其抗原结合片段可以用于例如对生物样品(例如临床样品)中的人可溶性ST2蛋白进行定量、预测受试者一年内死亡的风险、确定是否允许受试者出院或者开始或继续治疗(例如，住院治疗)，以及选择参与临床研究的受试者。文中提供了这些抗体及其抗原结合片段、含有这些抗体和抗体片段的试剂盒，以及各种使用这些抗体和抗体片段的方法。
本文提供了分离的抗体及其抗原结合片段，所述抗体及其抗原结合片段是由杂交瘤产生的抗体或者与所述杂交瘤产生的抗体竞争结合，所述杂交瘤保藏在American TypeCulture Collection(ATTC)并被指定为专利保藏命名(Patent Deposit Designation)PTA-10431和PTA 10432。在一些实施方案中，抗体或其片段不与D066-3或D067-3抗体(MBL International)之一或者两者竞争结合(美国专利7，087，396中有描述)，或者与人可溶性ST2结合的Kd等于或者小于1.51x10_9M。在一些实施方案中，抗体或其片段与人可溶性ST2结合的Kd等于或者小于8.59x10,11。在一些实施方案中，抗体或其片段是嵌合的或者人源化的。在一些实施方案中，片段选自:Fab片段、F(ab' )2片段和scFv片段。在一些实施方案中，抗体或其片段是糖基化的。在一些实施方案中，抗体或其片段含有杂交瘤产生的抗体的轻链或重链的一或多个互补决定区，其中所述杂交瘤被保藏在ATCC，指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432。在一些实施方案中，抗体是保藏在ATCC被指定为专利保藏命名PTA-10431的杂交瘤产生的抗体，或其抗原结合片段；或者是保藏在ATCC被指定为专利保藏命名PTA-10432的杂交瘤产生的抗体，或其抗原结合片段。还提供了与可溶性ST2特异结合的分离的抗体及其抗原结合片段，其中所述抗体及其抗原结合片段的产生过程包括用从人细胞(例如人成纤维细胞、神经细胞、上皮细胞或内皮细胞、胚胎或成年细胞，特别是人胚胎肾细胞)分离的重组人可溶性ST2免疫非人哺乳动物(例如小鼠、大鼠、兔、山羊、牛、猪、猴或马)。在一些实施方案中，分离到的重组人可溶性ST2是完全糖基化的，即和人血清中存在的天然内源人可溶性ST2有基本相同糖基化状态。在本文描述的所有抗体和片段的一些实施方案中，抗体或其片段带有标记。还提供了保藏在ATCC并被指定为专利保藏命名PTA-10431的杂交瘤的细胞，和保藏在ATCC并被指定为专利保藏命名PTA-10432的杂交瘤的细胞。还提供了定量来自受试者 的样品中的人可溶性ST2水平的方法。所述方法包括将样品与至少一种本文描述的抗体或其片段接触，和检测抗体或其片段与人可溶性ST2的结合情况。在一些实施方案中，方法包括使用至少两种本文描述的不同的抗体或其片段。还提供了预测受试者一年内死亡的风险的方法。所述方法包括获取受试者样品和利用至少一种本文描述的抗体或其片段确定样品中的人可溶性ST2水平，其中与人可溶性ST2参照水平相比，样品中人可溶性ST2水平升高表明受试者在一年内死亡的风险增加(例如相对那些与相同对照相比，人可溶性ST2水平下降或者基本相同的受试者(例如患有相同疾病的受试者)一年内死亡的风险增加)，下降的或者基本相同的人可溶性ST2水平表明受试者一年内死亡的风险减少(例如相对那些与相同对照相比，人可溶性ST2水平升高或者基本相同的受试者(例如患有相同疾病的受试者)一年内死亡的风险下降)。还提供了确定是否允许住院病人出院或者给受试者开始或继续住院治疗的方法，所述方法包括获取受试者样品和利用至少一种本文描述的抗体或其片段确定样品中的人可溶性ST2水平，其中与人可溶性ST2参照水平相比，升高的人可溶性ST2水平表明应当开始或者继续住院治疗，下降的或者相等的人可溶性ST2水平表明可以考虑允许受试者出院。在一些实施方案中，受试者有以下症状中的至少一种或多种:胸痛或者不适、呼吸急促、恶心、呕吐、嗳气、出汗、心悸、头晕、疲劳和昏厥。还提供了选择参与临床研究的受试者的方法，所述方法包括获取受试者样品，利用至少一种本文描述的抗体或其片段确定样品中的人可溶性ST2水平，以及如果与人可溶性ST2参照水平相比，受试者的人可溶性ST2水平表明他应当被选中参与临床研究则选择该受试者参与临床试验。在一些实施方案中，存在升高的人可溶性ST2水平表明受试者应当被选中参与临床研究。还提供了给受试者选择治疗方案的方法，所述方法包括利用至少一种本文描述的抗体或其片段确定来自受试者的生物样品中的人可溶性ST2水平，其中相对人可溶性ST2参照水平的受试者的人可溶性ST2水平被用于给受试者选择治疗方案。在一些实施方案中，存在升高的人可溶性ST2水平被用于给受试者选择治疗方案。在本文描述的任意一种方法的一些实施方案中，受试者未被诊断或者不存在疾病状态的两种或更多种(例如，至少三、四或五种)症状；受试者已被诊断患有某种疾病(例如心衰、冠状动脉疾病、心血管疾病、急性冠状动脉综合征、肾功能不全、中风或者本文描述的疾病中的任意一种)；或者受试者患有以下的一或多种:高甘油三酯血症、高胆固醇血症、高血压并且身体质量指数>30。在本文描述的任意一种方法的一些实施方案中，确定利用了至少两种本文描述的抗体或其片段。在本文描述的任意一种方法的一些实施方案中，人可溶性ST2参照水平是人可溶性ST2的阈值水平。在一些实施方案中，阈值水平上健康患者群体(例如健康男性患者群体或者健康女性患者群体)中的平均人可溶性ST2水平。在本文描述的任意一种方法的一些实施方案中，参照水平是这样的受试者样品中存在的人可溶性ST2水平，所述受试者未呈现两种或更多种疾病症状、未被诊断患有某种疾病、或者未被鉴定为有发展出疾病的风险。在本文描述的任意一种方法中，受试者未被诊断为患有疾病(例如，心衰、冠状动脉疾病、心血管疾病、急性冠状动脉综合征、肾功能不全、中风或者本文描述的疾病中的任意一种)。在本文描述的任意一种方法中，样品含有血液、血清或血浆。本文描述的任何抗体及其片段都可以用于这里描述的任意一种方法。还提供了诊断受试 者的疾病的方法，所述方法包括获取受试者样品，利用至少一种本文描述的抗体或其片段确定样品中的人可溶性ST2水平和至少一种额外标记物的水平，其中如果与人可溶性ST2参照水平相比，受试者的人可溶性ST2水平；其中与人可溶性ST2参照水平相比，样品中升高的人可溶性ST2水平，和相对所述至少一种额外标记物的参照水平发生改变的至少一种额外标记物水平表明受试者患有疾病(例如，心血管疾病、肺病、败血症、川崎病(Kawasaki disease)或Th2相关疾病，或者本文描述的其他疾病中的任意一种)。还提供了确定受试者是否有正常的人可溶性ST2水平(因此可能未患有严重疾病(例如心血管疾病)和例如一年内死亡或入院的风险正常)的方法，所述方法包括获取受试者样品，利用至少一种本文描述的抗体或其片段确定样品中的人可溶性ST2水平，其中如果人可溶性ST2水平落在特定的范围(例如，在大约14.5-大约25.3ng/mL，或者大约
18.1-大约19.9ng/mL之间)，则确定受试者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些实施方案中，如果男性受试者的人可溶性ST2水平处于表9列举的任何范围之间，则受试者被确定为具有正常的人可溶性ST2水平。在一些实施方案中，如果女性受试者的人可溶性ST2水平处于表9列举的任何范围之间，则受试者被确定为具有正常的人可溶性ST2水平。还提供了试剂盒，所述试剂盒含有本文描述的至少一种(例如两种、三种、四种或五种)抗体或其抗原结合片段。这些试剂盒的一些实施方案含有两种本文描述的抗体或其抗原结合片段。在这些试剂盒的一些实施方案中，至少一种抗体或其片段对人可溶性ST2(例如，重组人可溶性ST2)的结合Kd等于或者小于8.δθχΙΟ,Μ。在一些实施方案中，试剂盒提供为酶联免疫吸附检验(ELISA)的形式。在一些实施方案中，试剂盒还含有从人细胞(例如，人胚胎肾细胞)分离的重组人可溶性ST2。在一些实施方案中，重组人可溶性ST2完全糖基化。术语“可溶性ST2”意味着含有这样序列的可溶性蛋白，所述序列与NCBI登录号NP_003847.2 (SEQ ID NO:1)至少 90% 相同(例如，至少 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同)；或者含有这样序列的核酸，所述序列与NCBI登录号NM_003856.2(SEQ ID NO:2)至少90% 相同(例如，至少 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同)。术语“升高的”或者“升高”意味着与参照水平(例如，未患疾病的受试者、没有呈现疾病的两种或更多种症状的受试者、或者未没鉴定为有发展疾病的风险的受试者中的人可溶性ST2水平；或者人可溶性ST2的阈值水平)相比，确定的或者测量的水平(例如，人可溶性ST2蛋白水平)存在差异，例如统计学上的显著差异(例如，增加)。在一些实施方案中，参照是阈值水平，任何超过它的水平都认为是“升高的”。文中描述了人可溶性ST2的其他参照水平。术语“医疗机构”意味着受试者可以接受医护人员(例如护士、医师或医师助理)的医疗护理的地方。医疗机构的非限制性例子包括医院、诊所和辅助护理机构(例如，养老院)。术语“住院病人”意味着被收入医疗机构(例如，医院或辅助护理机构)的受试者。术语“住院治疗”意味着对收入医疗机构(例如，医院或辅助护理机构)的受试者进行的监测和/或医疗。例如，接受住院治疗的受试者可能被医护人员给予一或多种治疗剂或者进行医学程序(例如，手术(例如，器官移植、心脏搭桥术)，血管成形术、成像(例如，磁共振成像、超声成像和电脑断层扫描))。在其他实施例中，可以由医护人员周期性地测量疾病或状况严重程度的一或多种标记物从而评估疾病或者受试者的状况的严重程度或进展。术语“参照水平”意味着对照受试者或对照患者群体中的阈值水平。参照水平取决于进行的检验，可以由本领域技术人员确定。参照水平可以是基础水平或者相同患者中更早或晚的时间点测量的水平。人可溶性ST2参照水平的一些非限制性例子包括这样的患者中的人可溶性ST2水平，所述患者:未被诊断患有疾病；没有呈现疾病的两种或更多种症状；没有高风险CVD ;没有肾衰竭；没有高甘油三酯血症、高胆固醇血症、高血压和/或身体质量指数〈30 (例如，BMI低于25);没有发展出疾病的风险；和/或未患与ST2水平增加相关的疾病(例如，心血管疾病、肺病、败血症、川崎病或Th2相关疾病，或本文描述的任意一种其他疾病)。本文还描述了其他对照患者群体。人可溶性ST2参照水平的其他例子是人可溶性ST2阈值水平。可以利用本领域已知方法确定人可溶性ST2参照水平；本文描述了一些示范性的水平。在一些实施方案中，计算了受试者中两个人可溶性ST2水平的比率。可以将参照比率与受试者(例如文中描述的任何对照受试者或者同一受试者)中测量到的人可溶性ST2水平的参数比率进行比较，例如参照比率可以是疾病(例如，心脏病(例如，心衰竭、冠状动脉疾病、心血管疾病、急性冠状动脉综合征和心绞痛)、肾功能不全或中风，或者如本文描述的与提高的人可溶性ST2水平相关的任何其他疾病)症状出现前和后的人可溶性ST2水平的比率；疾病(例如，心衰竭、冠状动脉疾病、心血管疾病、急性冠状动脉综合征和心绞痛)、肾功能不全或中风，或者如本文描述的与提高的人可溶性ST2水平相关的任何其他疾病)诊断前后的人可溶性ST2水平的比率；疾病(例如，心衰竭、冠状动脉疾病、心血管疾病、急性冠状动脉综合征和心绞痛)、肾功能不全或中风，或者如本文描述的与提高的人可溶性ST2水平相关的任何其他疾病)治疗前后的ST2水平的比率；疾病(例如，心衰竭、冠状动脉疾病、心血管疾病、急性冠状动脉综合征和心绞痛)、肾功能不全或中风，或者如本文描述的与提高的人可溶性ST2水平相关的任何其他疾病)治疗(例如住院或者门诊治疗)过程中两个不同时间点的人可溶性ST2水平的比率；或者心脏事件(例如心肌梗塞)前后的人可溶性ST2水平的比率。在一些实施方案中，可以将受试者中测量到的人可溶性ST2水平的比率与阈值参照比率进行比较。人可溶性ST2的参照比率可以利用本领域已知方法确定；可以利用本文描述的数据计算人可溶性ST2的参照比率。例如，人可溶性ST2的参照比率可以是大约0.7 -大约1.1之间，或者大约I。术语“治疗性处置”或“治疗”意味着将一或多种药剂给予受试者或者对受试者的身体实施医学程序(例如，诸如器官移植或心脏手术的手术)。可以给予受试者的药剂的非限制性例子包括硝酸盐、钙通道阻滞剂、利尿剂、血栓溶解剂、毛地黄、肾素血管紧张素醛固酮系统(RAAS)调理剂(例如，β_肾上腺素能阻断剂、血管收缩素转化酶抑制剂、醛固酮拮抗剂、肾素抑制剂和血管紧张素II受体阻断剂)和胆固醇降低剂(例如，染料)。术语治疗性处置还包括调节(例如，增加或减少)受试者使用的一或多种药剂的剂量或频率、给予受试者一或多种新的药剂，或者从受试者的治疗方案中去掉一或多种药剂。用于本文，“受试者”是哺乳动物，例如人。用于本文，“生物样品 ”包括血液、血清、血浆、尿和身体组织中的一或多种。一般来说，生物样品是含有血清、血液或血浆的样品。用于本文，术语“抗体”是指通常含有重链多肽和轻链多肽的蛋白质。抗原识别和结合发生在重链和轻链的可变区。具有一个重链和一个轻链的单结构域抗体，和不含轻链的重链抗体也是已知的。给定抗体包含被称为α、δ、ε、Υ和μ的五种不同类型重链中的一种，其分类基于重链恒定区的氨基酸序列。这些不同类型的重链形成了五类抗体，分别是 IgA (包括 IgAl 和 IgA2)、IgD、IgE、IgG (IgGl、IgG2、IgG3 和 IgG4)和 IgM0 给定的抗体还包含被称为κ和λ的两类轻链中的一种，其分类基于轻链恒定结构域的氨基酸序列。IgG、IgD和IgE抗体通常含有两个相同的重链和两个相同的轻链和两个抗原结合结构域，每个由重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)组成。通常，IgA抗体由两个单体组成，每个单体由两个重链和两个轻链组成(对于IgG、IgD和IgE抗体)。这样，IgA分子有四个抗原结合结构域，每个同样由VH和VL组成。某些IgA抗体是单体性质的，因为它们由两个重链和两个轻链构成。分泌的IgM抗体一般由五个单体构成，每个由两个重链和两个轻链组成(对于IgG和IgE抗体)。这样,分泌的IgM分子具有十个抗原结合结构域,每个同样由VH和VL构成。还存在细胞表面形式的IgM，其与IgG、IgD和IgE抗体类似，具有两个重链/两个轻链的结构。.
用于本文，术语“嵌合抗体”是指经过改造包含至少一个人恒定区的抗体。例如，小鼠抗体(例如小鼠单克隆抗体)的一个或全部(例如，一个、两个或三个)轻链可变区和/或一个或全部(例如，一个、两个或三个)重链可变区可以各自与人恒定区连接，比如但不限于IgGl人恒定区。相对非嵌合抗体，嵌合抗体一般对人的免疫原性较低，因此在某些情况下赋予治疗上的益处。本领域技术人员了解嵌合抗体，并且了解制备它们的合适技术。参见例如美国专利4，816，567,4, 978，775,4, 975，369和美国专利4，816，397。用于本文，术语“完全人抗体”是只含有来源于人的氨基酸序列的抗体或抗体的抗原结合片段。例如，完全人抗体可以由人B细胞或者人杂交瘤细胞产生。在其他实施方案中，可以由转基因动物产生抗体，所述转基因动物含有人重链免疫球蛋白和人轻链免疫球蛋白的基因座，或者含有编码特定人抗体的重链和轻链的核酸。术语“互补决定区”或“⑶R”用于本文是指重链和轻链多肽可变区内的短的多肽序列，这些短的多肽序列主要负责介导特异抗原识别。Kabat，et al., J.Biol.Chem.252，6609-6616，1977;Chothia et al., J.Mol.Biol.196:901-917,1987;和MacCallum et al.，J.Mol.Biol.262:732-745，1996 中描述过 CDRs。在每个 VL 和每个 VH中有三个⑶Rs (名称为⑶R1、⑶R2和⑶R3)。术语“片段”或“抗体片段”用于本文是指来源于抗体多肽分子(例如，抗体重链和/或轻链多肽)的多肽，不包含全长抗体多肽，但仍含有能够结合抗原的全长抗体多肽的至少一部分。抗体片段可以包含全长抗体多肽的切割的一部分，虽然这个术语不限于这类切割片段。抗体片段可以包括，例如Fab片段、F (ab’)2片段、scFv (单链Fv)片段、线性抗体、单特异性或多特异性抗体片段，比如双特异性、三特异性和多特异性抗体(例如，二体、三体、四体)、微型抗体、螯合(chelating)重组抗体、三体或二体、内抗体、纳米抗体、小模块免疫药物(smal l modular immunopharmaceuticals, SMIP)、结合结构域免疫球蛋白融合蛋白、骆驼化抗体和含有VHH的抗体。抗原结合抗体片段的其他例子是本领域已知的。术语“框架区”用于本文是指重链和轻链多肽可变区内不是CDR序列的氨基酸序列，主要负责维持CDR序列的正确定位以便发生抗原结合。虽然框架区本身一般不直接参与抗原结合，但正如本领域已知的，某些抗体的框架区内的某些残基可以直接参与抗原结合或者会影响CDRs着一或多个氨基酸与抗原相互作用的能力。术语“人源化抗体”用于本文是指经过改造在可变区内与非人(例如，小鼠、大鼠或仓鼠)重链和/或轻链互补决定区(CDRs) —起包含一或多个人框架区。在一些实施方案中，人源化抗体包含除了 CDR区完全来自人的序列。相对非人源化抗体，人源化抗体对人的免疫原性一般更低，因此在某些情况中提供了治疗上的优势。人源化抗体是本领域已知的，制备人源化抗体的合适技术也是已知的。参见例如Hwang et al., Methods36:35，2005; Queen et al.，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.86:10029-10033，1989; Jones etal.，Nature321:522-25，1986;Riechmann et al.，Nature 332:323-27，1988;Verhoeyenet al.，Science 239: 1534-36，1988;Orlandi et al.,Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.86:3833-3837, 1989;美国专利 5，225，539、5，530，101、5，585，089、5，693，761、5，693，762 和 6，180，370;以及 WO 90/07861。用于本文，术语“Th2相关疾病”是指与异常2型辅助性T细胞(Th2)应答相关的疾病。用于本文，术语“心血管疾病”是指心脏和血管的紊乱，包括动脉、静脉、小动脉、小静脉和毛细血管的紊乱。用于本文，术语“肺病”是指肺部的紊乱。术语“其他标记物”意味着能够诊断特定疾病的存在的蛋白、核酸、脂类或碳水化合物或者它们的组合(例如，两种或以上)。本文描述的诊断受试者是患有疾病的方法包括检测来自受试者的样品中的可溶性人ST2和至少一种其他标记物的水平。可以用于疾病诊断的几个其他标记物是本领域已知的(例如，proANP、NT-proANP、ANP、proBNP、NT_proBNP、BNP、肌钙蛋白、CRP、肌酐、血尿氮(BUN)、肝功能酶、白蛋白和细菌内毒素；以及美国专利申请 2007/0248981、2011/0053170、2010/0009356、2010/0055683、2009/0264779 中描述的那些标记物，这些专利申请均通过引用并入本文)。术语“高甘油三酯血症”意味着大于或者等于180ng/mL的甘油三酯水平(例如，大于或等于200ng/mL)。术语“高胆固醇血症”意味着受试者中的至少一种胆固醇形式或者总胆固醇的水平增加。例如，有高胆固醇血症的受试者可能有彡40mg/dL(例如，彡50mg/dL或彡60mg/mL)的高密度脂蛋白(HDL)水平，彡130mg/dL(例如，彡160mg/dL或彡200mg/dL)的低密度脂蛋白(LDL)水平，和/或> 200mg/dL(例如，240mg/dL)的总胆固醇水平。术语“高血压”意味着升高的收缩和/或舒张压水平。例如，患有高血压的受试者可能收缩压> 12OmmHg(例如，^ 140mmHg或> 16OmmHg)和/或舒张压> 8OmmHg(例如，^ 9 OmmHg 或 > IOOmmHg)。术语“健康受试者”意味着受试者未患有疾病(例如,心血管疾病或肺病)。例如，健康受试者未被诊断为患有疾病，和未呈现疾病状态的一或多种(例如，两种、三种、四种或五种)症状。“死亡风险”意味着与参照群体(例如，健康对照群体)相比，受试者由于疾病或者与疾病相关的并发症 而死亡的风险。文中使用的术语“死亡风险”不包括故意或者意外死亡，例如由砸伤或压伤(比如车祸)造成的死亡。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。文中描述了本发明使用的方法和材料。也可以使用本领域已知的其他合适的方法和材料。所述材料、方法和实施例仅用于阐述，不是对发明的限制。文中提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库录入项和其他参考均通过引用全部并入本文。在冲突的情况下，本说明书包括定义优先。从以下详述和附图，以及权利要求可以清楚看出本发明的其他特征和优点。附图描述

图1的图像显示了重组人可溶性ST2蛋白纯化的组分的SDS-PAGE凝胶分析结果。泳道(每个样品道10 μ L)如下:1-MWM(5 μ L) ;2_His序列梯(3 μ L) ；3 -未转染阴性对照；4 -纯化前的上清；5 -柱子流过液；6 -第一次结合缓冲液洗涤；7 -第二次5mM洗涤；8 -第三次5mM洗涤；9-200mM洗脱流分2 ；10-200mM洗脱流分3 ；ll-200mM洗脱流分
4;12-200mM洗脱流分5 ; 13_200mM洗脱流分6 ; 14_200mM洗脱流分7 ;和15-0.3 μ g可溶性ST2。图2显示了用于检测重组人可溶性ST2蛋白中的组氨酸标签的纯化流分的Western印迹。泳道(每个样品道10 μ L)如下:1-MWM(5 μ L) ；2 - His序列梯(3 μ L) ；3 -纯化前的上清；4 -柱子流过液；5 -第一次结合缓冲液洗涤；6 -第二次结合缓冲液洗涤；7_第二次5mM洗涤；8 -第三次5mM洗涤；9-200mM洗脱流分2 ；10-200mM洗脱流分3 ；
ll-200mM洗脱流分4 ；12-200mM洗脱流分5 ；13-200mM洗脱流分6 ；14-200mM洗脱流分7 ；和15-0.3μ g可溶性ST2。图3A-3C显示了纯化重组可溶性ST2的考马斯胶(图3A)和两个Western印迹，是与商品抗ST2抗体D066(MBL International)(图3B)和六组氨酸抗体(图3C)比较。泳道(每个样品道10 μ L)如下:1- MWM ;2 - His序列梯；3 -血清ST2_His IOOOng ；4~血清ST2-His 500ng ；5-血清 ST2_His 200ng ；6-血清 ST2_His IOOng ；7-血清 ST2_His 50ng ；8-无血清 ST2-His IOOOng ;9-无血清 ST2-His 500ng ; 10-无血清 ST2_His 200ng;ll_无血清 ST2-Hisl00ng ;和 12 -无血清 ST2_His 50ng。图4的曲线图显示了 7E4和9F8抗体的抗原灵敏度评估结果。图5的曲线图显示了 7E4和9F8抗体的抗原灵敏度评估结果。7E4和9F8抗体以
5μ g/mL-0的浓度包埋在96孔板的单个孔中，对单个浓度的偶联了生物素的重组可溶性ST2进行测试。图6的线图显示了测试它们一起用于单克隆抗体夹心酶免疫分析(EIA)格式的能力的结果，其中7E4或9F8抗体被生物素化。图7A-7F的六个图形显示了对抗体-抗原复合体形成的表面等离子共振(SPR)分析的结果。图7A显示了对抗体9F8(L1)的SPR分析。图7B显示了对抗体7E4(L2)的SPR分析。图7C显示了对抗体11A7(L3)的SPR分析。图7D显示了对抗体D066 (L4)的SPR分析。图7E显示了对抗体D067(L5)的SPR分析。图7F显示了对无关抗体(L6)的SPR分析。图8A-8F的六个图形显示了抗体-抗原复合体形成的SPR分析结果。图8A显示了对抗体9F8 (LI)的SPR分析。图8B显示了对抗体7E4 (L2)的SPR分析。图8C显示了对抗体11A7 (L3)的SPR分析。图8D显示了对抗体15D6 (L4)的SPR分析。图8E显示了对抗体D066 (L5)的SPR分析。图8F显示了对抗体D067 (L6)的SPR分析。图9的箱须图显示了按照抗凝试管类型的人可溶性ST2浓度。图10的直方图显示了正常健康供体的人可溶性ST2浓度分布。图11的箱须图显示了正常健康供体中作为性别和年龄函数的人可溶性ST2浓度。详述本文描述了能够特异结合人可溶性ST2的抗体及其抗原结合片段、含有所述抗体和片段的试剂盒，以及这些抗体和片段的使用方法。ST2ST2基因是白介素-1受体家族的成员，其蛋白产物的存在形式有跨膜形式和可以在血清中检测到的可溶性受体形式(Kieser et al., FEBS Lett.372 (2-3): 189-193, 1995;Kumar et al.,J.Biol.Chem.270 (46):27905-27913,1995;Yanagisawa etal., FEBS Lett.302(I):51-53，1992;Kuroiwa et al., Hybridomal9(2):151-159,2000)。可溶性ST2据描述在心衰试验模型中被显著地上调(Weinberg et al., Circulation106(23):2961-2966, 2002)，并且数据表明人可溶性ST2浓度在那些患有慢性严重心衰(Weinberg et al., Circulation 107 (5): 721-726，2003)和患有急性心肌梗塞(Shimpo etal., Circulation 109(18):2186-2190, 2004) 的人中也有升高。
在不希望被理论约束的情况下，跨膜形式的ST2被认为在调理辅助性2型T细胞的应答中有重要作用(Lohning et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.95 (12): 6930-6935,1998; Schmitz et al., Immunity 23 (5): 479-490，2005)，可能在严重或慢性炎症状态下耐受性的发展中发挥作用(Brint et al., Nat.1mmunol.5 (4): 373-379，2004),而可溶性形式的ST2在生长刺激成纤维细胞中被上调(Yanagisawa et al.，1992，同前)。试验数据表明ST2基因在心肌牵张状态下被显著上调(Weinberg et al., 2002,同前)，上调的方式与BNP 基因的诱导类似(Bruneau et al., Cardiovasc.Res.28 (10): 1519-1525, 1994)。Tominaga et al.(FEBS Lett.258:301-304, 1989)分离到在 BALB/cIT3 细胞内受生长刺激特异表达的小鼠基因。Haga et al.(Eur.J.Biochem.270:163-170, 2003)描述了基于其被生长刺激所诱导的ST2基因命名。ST2基因编码两种蛋白产物:可溶的分泌形式ST2或sST2 ;和与白介素-1受体非常相似的跨膜受体形式ST2L。The HUGONomenclature Committee 将 ST2 的人同源物(其克隆在 Tominaga et al., Biochim.Biophys.Acta.1171:215-218，1992 中有描述)命名为白介素 I 受体样(InterleukinIReceptor-Like) I (ILlRLl)。这两个术语在本文中可交换使用。人ST2的较短可溶性亚型的mRNA序列可以在GenBank登录号NM_003856.2 (SEQID NO: 2)找到，多肽序列是·GenBank登录号NP_003847.2(SEQ ID NO:1)。人ST2的较长形式的mRNA序列是GenBank登录号ΝΜ_016232.4 (SEQ ID NO:4)，多肽序列是GenBank登录号 NP_057316.3(SEQ ID NO:3) 其他信息在公共数据库 GeneID:9173, MIM ID#601203 和UniGene N0.Hs.66有提供。总的来说，本文描述的方法中测量的是人可溶性形式的ST2多肽。抗体和抗原结合抗体片段本文提供了与人可溶性ST2结合的分离的抗体及其抗原结合片段。所提供的抗体及其片段可以与杂交瘤产生的抗体竞争结合，所述杂交瘤保藏在ATCC并被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432(分别对应7E4和9F8抗体)。在一些实施方案中，抗体或片段不与D066-3和D067-3抗体(MBLInternational)(在美国专利7，087, 396中有描述)竞争结合，并且结合人可溶性ST2的Kd等于或者小于1.51x10_9M。在一些实施方案中，抗体或片段结合人可溶性ST2的Kd等于或者小于8.59xl0-10Mo文中描述了确定抗体或片段结合人可溶性ST2的亲和力(Kd)的方法(例如，表面等离子共振)，其他方法是本领域已知的。还提供了由本文描述的方法产生的7E4和9F8单克隆抗体以及它们的抗原结合片段。用于本文，短语“竞争结合”是指这样的情况，其中一个抗体或抗体片段与给定抗原的结合降低了第二个抗体或抗体片段与相同抗原的结合。在一些实施方案中，当两个抗体或片段基本结合的是位于给定抗原(例如，人可溶性人ST2)上的相同表位时，抗体或片段与另一个抗体或片段竞争结合。正如以下实施例中更详细描述的，被指定为专利保藏命名PTA-10431和PTA-10432的杂交瘤所产生的每一个抗体都识别和被测试的各种其他抗体(例如，来自MBL International的D066-3和D067-3抗体)所识别的不同的表位，因此不会与那些测试抗体竞争结合。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段所结合的人可溶性ST2上的表位被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤产生的抗体识别。确定两个不同抗体或片段是否竞争结合的方法在文中有描述，并且是本领域已知的(例如，竞争性酶联免疫吸附法)。
在一些实施方案中，抗体或片段与表位结合或者显示出提高的结合，所述表位存在于由人细胞(例如，人成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、或神经细胞、胚胎或成年细胞，或者人胚胎肾细胞，例如HEK293)产生的重组人可溶性ST2蛋白中，但不存在于由非人类细胞类型产生的重组人可溶性ST2中。在一些实施方案中，抗体或片段与表位结合或者显示出提高的结合，所述表位存在于完全糖基化的人可溶性ST2蛋白(例如，从人细胞中分离的人可溶性ST2蛋白)，而不存在于没有糖基化或者错位糖基化或糖基化不足(例如没有完全糖基化或者糖基化的模式(例如糖的数量、位点和/或类型)在人体(例如在人血清)的天然人可溶性ST2中不存在)的重组人可溶性ST2蛋白中。在一些实施方案中，相比其他商品抗体，抗体和抗体片段与天然人可溶性ST2结合更好(例如，亲和力更高)。在一些实施方案中，抗体是保藏在ATCC并指定为专利保藏命名PTA-10431的杂交瘤所产生的单克隆抗体(7E4抗体)，或者是保藏在ATCC并指定为专利保藏命名PTA-10431的杂交瘤所产生的抗体的抗原结合片段(7E4抗体的片段)。在一些实施方案中，抗体是保藏在ATCC并指定为专利保藏命名PTA-10432的杂交瘤所产生的单克隆抗体(9F8抗体)，或者是保藏在ATCC并指定为专利保藏命名PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体的抗原结合片段(9F8抗体的片段)。本文描述的两种或更多种抗体或片段的组合(例如，7E4抗体、7E4抗体片段、9F8抗体和9F8抗体片段中的两种或更多种)可以用于文中描述的任何方法。指定为专利保藏命名PTA-10431和专利保藏命名PTA-10432的杂交瘤所产生的人可溶性ST2结合单克隆抗体均可通过用分离自人胚胎肾(HEK)-293细胞的重组人可溶性ST2免疫非人哺乳动物来生成。人可溶性ST2有相当大量/数量的翻译后修饰。根据其氨基酸序列，预测人可溶性ST2的分子量约为36kDa。而天然蛋白由于翻译后修饰，分子量大约是58kDa。正如本领域已知的，这种翻译后修饰对抗体或抗体片段结合给定蛋白的能力会有影响。因此，正如以下实施例部分详细描述的，由指定为专利保藏命名PTA-10431的杂交瘤产生的人可溶性ST2结合单克隆抗体比其他抗体对天然人可溶性ST2有更高的亲和力，因此可以作为诊断性和其他试剂。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段包含由指定为专利保藏命名PTA-10431和/或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体的重链和/或轻链(或其片段)。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段包含由指定为专利保藏命名PTA-10431和/或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体的重链和/或轻链可变区(或其片段)。正如本领域已知的，抗体对给定抗原的特异性是由重链和轻链可变区介导的。具体来说，抗体对给定抗原的特异性主要是由重链和轻链可变区内被称为互补决定区或CDRs的短序列决定的。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段含有指定为专利保藏命名PTA-10431和/或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体的重链和/或轻链的一或多个(例如，一个、两个、三个、四个、五个或六个)⑶Rs。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段包含被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体的重链的每个CDRs。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段包含被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体的轻链的每个CDRs。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段包含被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体的每个⑶Rs (所有重链和轻链⑶Rs)。 还提供了与人可溶性ST2特异结合的分离的抗体和抗原结合抗体片段，产生所述抗体和抗原结合抗体片段的过程包括用从肾细胞(例如，人肾细胞、胚胎肾细胞和人胚胎肾细胞)分离的重组人可溶性ST2免疫非人哺乳动物。在一些实施方案中，重组人可溶性ST2被完全糖基化或者含有天然可溶性ST2蛋白中存在的所有翻译后修饰。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段是嵌合的，因为它包含至少一个人恒定区。例如，由被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤产生的抗体的恒定区可以替换为人恒定区。相对非嵌合抗体，嵌合抗体一般对人的免疫原性更低，因此在某些情况可以带来治疗上的优势。在一些实施方案中，本文描述的嵌合抗体包含IgGl恒定区。本领域技术人员知道各种人恒定区。制备嵌合抗体的方法是本领域已知的。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段是人源化的，因为它包含至少一个人框架区。例如，由指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体的一或多个(例如一个、两个、三个、四个、五个或六个)框架区可以替换为一或多个(例如一个、两个、三个、四个、五个或六个)人框架区。相对非人源化抗体，人源化抗体一般对人的免疫原性更低，因此在某些情况可以带来治疗上的优势。本领域技术人员知道各种人框架区。制备人源化抗体的方法是本领域已知的。例如，可以利用基于CDR同源性的方法进行人源化(参见例如，Hwangetal.,Methods 36:35, 2005)。这些方法通常涉及根据结构类似的非人和人CDRs，而不是结构类似的非人和人框架区，将非人CDRs取代到人可变结构域框架中。确定非人和人CDRs的相似性通常是通过鉴定相同类型链的人基因中与非人(例如小鼠)结合分子有相同典型CDR结构组合，因此保持了 CDR肽骨架的三维构象。其次，对于具有匹配典型结构的每个候选可变区基因，将非人和候选的人CDRs的逐个残基进行同源性评估。最后，为了产生人源化结合分子，将选中的人候选CDR中与非人CDR还不相同的CDR残基转换为非人(例如小鼠)序列。在一些实施方案中，人源化结合分子中未引入人框架的突变。在一些实施方案中，将非人CDRs取代到人可变结构域框架中是根据非人可变结构域框架的正确空间取向的保持，这是通过鉴定能够保持和CDRs所来源的非人可变结构域框架相同构象的人可变结构域 框架。在一些实施方案中，这是通过从这样的人结合分子获取人可变结构域实现的，所述人结合分子的框架序列展示出与CDRs所来源的非人可变框架结构域的高度序列同一性。参见例如Kettleborough et al., Protein Engineering4:773，1991;Kolbingeret al., Protein Engineering 6:971，1993 和 WO 92/22653。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段是单特异性的，因为它只识别单个表位。单特异性抗体是本领域已知的(参见例如W0/9639858)。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段是双特异性的，因为它能识别一个以上的表位(例如，两个表位)。双特异性抗体是本领域已知的(参见例如美国专利申请公开2009/0162360)。在一些实施方案中，本文描述的单特异性或者双特异性抗体或片段能够结合的表位被这样的抗体或抗体片段识另Ij，所述抗体或抗体片段具有被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的单克隆抗体的CDRs。在一些实施方案中，双特异性抗体或片段结合人可溶性ST2，和不同的非ST2多肽。在一些实施方案中，双特异性抗体或片段结合人可溶性ST2的两个不同表位。在一些实施方案中，本文描述的抗体或片段是二价的(参见例如W0/1999/064460)。对于包含被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的单克隆抗体的一或多个CDRs的其他抗体和片段的更详细描述，参见美国专利申请公开20070105199和TO/2007/059782。在一些实施方案中，片段(例如，抗原结合片段)来源于完整抗体分子，例如单克隆抗体。所述抗体可以是例如在它的铰链区的羧基端(用胰蛋白酶)切割产生？(&13’)2片段，或者在它的铰链区的氨基端(用木瓜蛋白酶)切割产生Fab片段。在一些实施方案中，本文描述的抗原结合片段是Fab片段、F(ab’)2片段、scFv片段、线性抗体、多特异性抗体片段，比如双特异性、三特异性或多特异性抗体(例如，二体、三体或四体)、微型抗体、螯合重组抗体、内抗体、纳米抗体、小模块免疫药物(SMIP)、结合结构域免疫球蛋白融合蛋白、骆驼化抗体或含有Vhh的抗体。制备这些片段的方法是本领域已知的。在一些实施方案中，本文描述的人可溶性ST2结合抗体或抗原结合抗体片段与被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体的重链和/或轻链相t匕，包含具有一或多个氨基酸取代、缺失或插入的多肽。通过诸如定点突变或PCR介导的突变的常规技术，可以给编码包含被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体重链和/或轻链的多肽的核酸分子(例如或者编码所述重链或轻链的一或多个(例如一个、两个或三个)CDR区的核酸)引入取代、缺失或插入。在一些实施方案中，在一或多个位点进行了保守性氨基酸取代。“保守性氨基酸取代”是其中一个氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基代替的情况。具有类似侧链的氨基酸家族在现有技术中已有限定，包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，抗人可溶性ST2抗体或人可溶性ST2结合抗体片段的多肽中的氨基酸残基可以被来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基代替。在一些实施方案中，本文描述的人可溶性ST2结合抗体或人可溶性ST2结合抗体片段包含的氨基酸序列与被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体的重链和/或轻链至少90%相同、至少95%、96%、97%、98%、99%或100%相同(例如，或者与被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体重链和/或轻链的至少一个(例如，一个 、两个或三个)CDR至少90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同)。例如，本文描述的人可溶性ST2结合抗体或人可溶性ST2结合抗体片段可能含有一或多个⑶Rs，所述⑶Rs在位于被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体重链和/或轻链中可以看到的相应CDR序列中含有一或多个氨基酸取代、缺失或插入。在一些实施方案中，本文描述的组合物含有两个或更多个文中所述的不同人可溶性ST2结合抗体或人可溶性ST2结合抗体片段。例如，本文描述的组合物可以含有由被指定为专利保藏命名PTA-10431和PTA-10432的杂交瘤中的一个所产生的抗体。正如以下实施例部分更详细地描述的，这种抗体组合比任何一种单个抗体以及其他商品抗体都显示出对ST2抗原更高的亲和力。本文描述的这种含有抗体或抗原结合片段的组合物会在许多方法中都有用，例如诊断方法。在一些实施方案中，本文描述的组合物含有两个或更多个不同ST2结合片段(例如，Fab片段、F(ab)2片段或scFv片段)，比如来源于被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤所产生的抗体的片段。
在任何以上方法中，抗体或抗体片段都可以被糖基化或者标记。例如，抗体和抗体片段可以被标记上可检测的物质，包括但不限于各种酶、辅基、荧光物质、发光物质、生物发光物质和放射性物质。合适的酶的例子包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β -半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基复合体的例子包括链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素；合适的荧光物质的例子包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、若丹明、二氯三嗪氨基荧光素、丹酰氯、量子点或藻红蛋白；发光物质的例子包括鲁米诺(Iuminol);生物发光物质的例子包括萤光素酶、萤光素和水母发光蛋白；合适的放射性物质的例子包括1251、m1、35S或3H。杂交瘤本文还提供了能够产生结合人可溶性ST2的抗体的杂交瘤。正如本领域已知的，术语“杂交瘤”是指通过将产生抗体的淋巴细胞和不产生抗体的癌细胞(通常是骨髓瘤或淋巴瘤)融合产生的细胞。融合后,杂交瘤增殖并产生特定的本来由被融合的淋巴细胞产生的单克隆抗体。在一些实施方案中，提供的杂交瘤是保藏在ATCC并被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤。在一些实施方案中，还提供了单个细胞、收获细胞和培养物，其含有来源于保藏在ATCC并被指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的杂交瘤的细胞。所提供抗体和片段的使用方法特别是为了预测一年内死亡的风险、确定是否允许受试者出院或者开始或继续其住院治疗、选择参与临床试验的受试者、诊断受试者患有疾病或者确认有发展出疾病的风险的受试者，一或多个本文描述的任意抗体或抗体片段可以用于定量样品(例如来自受试者的样品)中的人可溶性ST2水平。人可溶性ST2水平的定量方法本文提供了确定受 试者样品中人可溶性ST2水平的方法，所述方法包括将样品与至少一种本文描述的抗体或抗体片段进行接触；和检测抗体或片段与人可溶性ST2的结合。在一些实施方案中，使用了至少两种(例如，两种、三种或四种)本文描述的抗体或抗体片段来确定受试者样品中的人可溶性ST2水平。在一些实施方案中，受试者未被诊断或者没有呈现出疾病的一或多个(例如两个、三个或四个)症状。在一些实施方案中，受试者已被诊断为患有与ST2水平升高相关的疾病(例如心衰、冠状动脉疾病、心血管疾病、急性冠状动脉综合征、肾功能不全、中风或者本文描述的其他疾病中的任意一种)。在一些实施方案中，受试者患有高甘油三酯血症、高胆固醇血症、高血压、肾功能不全中的一或多种(例如两种、三种或四种)，并且身体质量指数> 30。在一些实施方案中，样品含有血液、血清或血浆。在一些实施方案中，样品可以由医护人员(例如，刺络医师、医师、护士、医师助理或实验室技术员)从受试者采集。样品在与至少一种本文描述的抗体或片段接触前，可以(例如，在<4° C、<0° C或-80° C)保存一段时间，检测抗体或片段的结合。文中描述了将生物样品与抗体或抗体片段进行接触以及检测抗体或片段结合的方法，其他方法是本领域已知的。定量还可以包括检测至少一种本文描述的抗体或抗体片段与纯化的重组人可溶性ST2(例如，分离自人胚胎肾细胞的重组人可溶性ST2)的结合的对照实验。在一些实施方案中，对正常或健康受试者中的人可溶性ST2水平进行了定量。所述正常或健康受试者是这样的受试者，其未受累于ST2相关状况(例如,本文描述的ST2相关状况)、未被诊断为患有疾病(例如，任何本文描述的疾病)并且没有出现疾病的两个或更多个(例如，两个、三个或四个)症状。正常或健康受试者可以通过本领域已知的多种技术中的任何一种来确认，包括但不限于通过生物标记物筛选或体检(例如，通过没有与ST2相关状况或者任何其他本文描述的疾病关联的两种或多种症状的外在表现形式)。例如，通过筛选低水平的一或多个标记物可以筛选出没有潜血CVD或炎症性疾病的正常或健康受试者，其中所述标记物包括，但不限于脑钠肽(BNP)、前降钙素(PCT)、C反应蛋白(CRP)和白介素-6(IL-6)。本领域技术人员知道用于确定正常或健康受试者没有显示潜血CVD或炎症性疾病，或者任何本文描述的其他疾病的其他合适标记物。来自受试者 (例如，正常或健康受试者)的样品中的人可溶性ST2水平的定量在许多情况中都是有用的。在一些实施方案中，可以周期性地定量受试者(例如，正常或健康受试者、发展出疾病的风险增加的受试者、被诊断患有疾病的受试者或者呈现疾病的两种或更多种症状的受试者)的人可溶性ST2水平，例如每天、每周、每两周、每月、每两月、每年等，或者周期性的体检。本领域技术人员一种的多种技术中的任何一种，包括文中描述的那些，都可以用于利用本文描述的抗体和抗体的抗原结合片段来对受试者中的人可溶性ST2进行定量。在一些实施方案中，对照受试者(例如正常或健康受试者)中的人可溶性ST2水平经过定量得到参照水平，以便用于确定受试者不存在ST2相关状况、有发展成疾病的风险、或者有一年内死亡的风险。例如，可以定量未患疾病的受试者中的人可溶性ST2水平来得到人可溶性ST2参照水平，所述疾病是比如，但不限于心血管疾病、心衰、冠状动脉疾病、急性冠状动脉综合征、肾功能不全、中风、肺病、败血症、川崎病或Th2相关疾病，或者本文描述的任何其他疾病。在一些实施方案中，本文公开的抗体或抗原结合片段中的至少一个可以用于定量受试者(例如正常或健康受试者)中的人可溶性ST2水平。例如,受试者(例如正常或健康受试者)中人可溶性ST2水平可以在免疫分析法中利用至少一种本文描述的抗体或抗原结合片段(例如，与保藏在ATCC并指定为专利保藏命名PTA-10431或PTA-104312的杂交瘤所产生的抗体竞争结合的抗体或片段，或这两种)来定量。在一些实施方案中，对样品中的人可溶性ST2水平进行定量以便保证常规操作的再现性、参照范围、临床临界值等。例如可以定量两个或更多个样品(例如参照样品)中的人可溶性ST2水平，并评估两个或更多个样品之间人可溶性ST2水平的变异系数(“Cr’)。此外或者替代地，样品(或受试者)中的人可溶性ST2水平可以定量两次或更多次(例如，利用不同批次的参照样品，或者从相同受试者取的不同样)，并确定人可溶性ST2水平之间的CV。在一些实施方案中，人可溶性ST2水平之间的CV小于20%’例如，小于19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1% 或更低。在一些实施方案中，提供了确定受试者是否具有正常的人可溶性ST2水平的方法。确定受试者是否具有正常的人可溶性ST2水平在许多情况中都是有用的。在一些实施方案中，确定受试者是否具有正常的人可溶性ST2水平的方法包括分析检测受试者样品(例如，任何以上描述的样品，比如但不限于含有血液、血清或血浆的样品)中的人可溶性ST2的水平，其中如果发现样品中的人可溶性ST2水平与已知的正常或中值人可溶性ST2水平基本类似；或者如果样品中的人可溶性ST2水平落在某个范围内，例如在已知的正常或中值人可溶性ST2水平(例如，95%置信区间或者四分位距，或者任何表9中列出的范围)附近，可以确定受试者具有正常的人可溶性ST2水平。例如，如果来自受试者的样品经分析检验发现样品中的人可溶性ST2水平位于已知正常或中值人可溶性ST2水平(例如正常或健康受试者中的中值水平)的95%置信区间，可以确定受试者具有正常的人可溶性ST2水平。此外或者替代地，如果来自受试者的样品经分析检验发现样品中的人可溶性ST2水平位于已知的正常或中值人可溶性ST2水平的四分位距，可以确定受试者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些实施方案中，如果受试者样品中的人可溶性ST2水平是大约18.8ng/mL，可以确定该受试者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些实施方案中，如果样品中的人可溶性ST2水平在大约14.5-25.3ng/mL的范围内，可以确定该受试者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些实施方案中，如果样品中的人可溶性ST2水平在大约18.1-19.9ng/mL的范围内，可以确定该受试者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些实施方案中，如果来自受试者的样品中的人可溶性ST2水平是大约16.2ng/mL，可以确定该女性受试者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些实施方案中，如果样品中的人可溶性ST2水平位于表9列出的任何范围之内，可以确定该女性具有正常的人可溶性ST2水平。在一些实施方案中，如果来自受试者的样品中的人可溶性ST2水平是大约23.6ng/mL，可以确定该男性受试者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些实施方案中，如果样品中的人可溶性ST2水平位于表9列出的任何范围之内，可以确定该男性具有正常的人可溶性ST2水平。

在一些实施方案中，如果受试者样品中的人可溶性ST2水平低于阈值(例如，25.3ng/mL，或者19.9ng/mL(对于女性)或30.6ng/mL(对于男性))，可以确定受试者(例如，男性或女性受试者)具有正常的可溶性ST2水平。提到受试者中的人可溶性ST2水平的数值或范围(例如正常的人可溶性ST2水平的范围)时使用的术语“大约”或“基本相同”是指参照数值或范围周围的间距，例如为了评估人可溶性ST2水平(例如，正常的人可溶性ST2水平或患有疾病或者呈现两种或更多种疾病症状的患者群的人可溶性ST2水平)的目的，本领域技术人员会认为是等同于参照数值或范围(例如，表9中列出的任何范围)的数值或范围。用于本文，当人可溶性ST2水平(例如，正常的人可溶性ST2水平)的数值或范围位于参照数值或范围的+/_25%，例如在数值或范围的 +/_20%、+/-15%、+/-10%、+/-9%、+/-8%、+/-7%、+/_6%、+/_5%、+/_4%、+/_3%、+/-2%或+/-1%内，则所述数值或范围“大约”是参照数值或范围。在一些实施方案中，至少一或两个本文描述的任意抗体或抗原结合片段可以用于确定受试者是否具有正常的人可溶性ST2水平、是否具有与疾病相关的人可溶性ST2水平，或者是否具有与发展成疾病的风险增加或者一年内死亡的风险增加相关的人可溶性ST2水平。预测一年内死亡风险的方法亦提供了在受试者中预测一年内死亡风险的方法，其包括从受试者获得样品，并使用至少一种本文中所述的抗体或抗体片段确定样品中人可溶性ST2的水平。与人可溶性ST2的参照水平相比，样品中升高水平或基本上相同水平的人可溶性ST2表明所述受试者在一年内具有增加的死亡风险(例如，相对于在样品中与相同参照水平的ST2相比具有减少水平的人可溶性ST2的受试者(例如，具有或诊断患有相同疾病的受试者)，在一年内具有增加的死亡风险)。与人可溶性ST2的参照水平相比，样品中减少水平的人可溶性ST2表明所述受试者在一年内具有较低的死亡风险(例如，相对于在样品中与相同参照水平的ST2相比具有升高水平或基本上相同水平的人可溶性ST2的受试者(例如，具有或诊断患有相同疾病的受试者)，在一年内具有较低的死亡风险)。通过本文中所述的方法确定的在一年内的死亡风险水平会取决于疾病状态。
在一些实施方案中，受试者未经诊断或未呈现疾病的一种或多种(例如两种、三种、四种或五种)症状。在一些实施方案中，所述受试者经诊断具有疾病(例如心衰，冠状动脉病，心血管疾病，急性冠状动脉综合征，肾功能不全，或中风，或任何本文中所述疾病)。在一些实施方案中，所述受试者具有下述一种或多种(例如一种、两种、三种或四种):高甘油三酯血症，高胆固醇血症，高血压，和> 30的体重指数。在一些实施方案中，所述确定使用至少一种(例如两种、三种、四种或物种)本文中所述的抗体或片段进行。在一些实施方案中，所述人可溶性ST2的参照水平是人可溶性ST2的阈值水平(例如健康患者群体如健康男性患者全体或健康女性患者群体的人可溶性ST2的中位水平，或人可溶性ST2中位水平的百分位数(例如75、80、85、90或95百分位数，或任何表9中列出的范围或浓度))。在一些实施方案中，所述参照水平可以是未出现与ST2水平升高有关的疾病的一或多种症状的患者样品中的人可溶性ST2水平。在一些实施方案中，所述参照水平可以是在未诊断具有疾病(例如心衰，冠状动脉病，心血管疾病，急性冠状动脉综合征，肾功能不全，中风，或任何本文中所述疾病)的受试者或鉴定为不具有发生疾病(例如任何本文中所述疾病)风险的受试者的样品中存在的人可溶性ST2的水平。其它的参照水平可由本领域技术人员确定。在一些实施方案中，所述人可溶性ST2参照水平是约30ng/mL至约35ng/mL。在一些实施方案中，当受试者患有心衰时，人可溶性ST2参照水平为约30ng/mL至约35ng/mL。在一些实施方案中，所述人可溶性ST2参照水平为约35ng/mL或约60ng/mL。在一些实施方案中，样品含有血、血清或血浆。可获得所述样品，且使用至少一种本文中所述的抗体或片段确定人可溶性ST2的水平可如本文中所述进行。确定是否让住院的受试者出院或起始或继续治疗的方法亦提供了确定是否让住院的受试者出院或起始或继续治疗的方法，其包括从受试者获得样品，并使用本文中所述的至少一种(例如两种)抗体或抗体片段确定样品中的人可溶性ST2的水平，其中与人可溶性ST2的参照水平相比，样品中人可溶性ST2的升高水平表明应起始或继续所述受试者的住院治疗(例如医院收容(hospitalization)或收容入辅助护理机构(admittance into anassisted-care facility),而与人可溶性ST2的参照水平相比，样品中降低或相同水平的人可溶性ST2表明让所述受试者出院。为了确定是否应继续住院治疗，该方法可对于相同受试者进行数次(例如每周进行一次，每周进行两次，每周进行三次，每月进行一次，每月进行两次，每月进行三次，和每月进行四次)。在一些实施方案中，所述受试者未经诊断，未呈现疾病状态的两种或更多种症状，或未鉴定为具有发生疾病(例如任何本文中所述疾病)的风险。在一些实施方案中，所述受试者经诊断为患有疾病(例如心衰,冠状动脉病，心血管疾病，急性冠状动脉综合征，肾功能不全，中风，或任何本文中所述疾病)，呈现疾病(例如任何本文中所述疾病)的一种或多种症状，或经鉴定为具有发生疾病(例如任何本文中所述疾病)的风险。在一些实施方案中，所述受试者具有下述一种或多种(例如一种、两种、三种或四种):高甘油三酯血症，高胆固醇血症，高血压，和> 30的体重指数。在一些实施方案中，所述受试者并未诊断为患有心衰，冠状动脉病，心血管疾病，急性冠状动脉综合征，肾功能不全，或中风，或任何本文中所述疾病。在一些实施方案中，人可溶性ST2的水平的确定使用至少两种本文中所述的抗体或抗体片段进行。在一些实施方案中，人可溶性ST2的参照水平可为任何本文中所述的参照水平。其它人可溶性ST2参照水平可由本领域技术人员确定。在一些实施方案中，所述样品含有血、血清或血浆。可获得所述样品，且使用至少一种本文中所述的抗体或片段确定人可溶性ST2的水平可如本文中所述进行。选择参与临床研究的受试者的方法亦提供了用于选择参与临床研究的受试者的方法。这些方法包括从受试者获得样品，使用本文中所述的至少一种抗体或抗体片段确定样品中的人可溶性ST2的水平，并且如果该受试者的人可溶性ST2水平相对于人可溶性ST2的参照水平表明应选择该受试者参与临床研究，选择所述受试者参与临床研究。在一些实施方案中，人可溶性ST2的升高水平的存在表明应选择该受试者参与临床研究。在一些实施方案中，人可溶性ST2的升高水平的存在表明应排除该受试者参与临床研究。在一些实施方案中，所述受试者未经诊断，未呈现疾病(例如任何本文中所述疾病)状态的两种或更多种症状，或未鉴定为具有发生疾病(例如任何本文中所述疾病)的风险。在一些实施方案中 ，所述受试者经诊断为患有疾病(例如心衰，冠状动脉病，心血管疾病，急性冠状动脉综合征，肾功能不全，中风，或任何本文中所述疾病)，呈现疾病(例如任何本文中所述疾病)的一种或多种症状，或经鉴定为具有发生疾病(例如任何本文中所述疾病)的风险。在一些实施方案中，所述受试者具有下述一种或多种(例如一种、两种、三种或四种):高甘油三酯血症，高胆固醇血症，高血压，和> 30的体重指数。所述确定使用至少两种本文中所述的抗体或抗体片段进行。在一些实施方案中，人可溶性ST2的参照水平可为任何本文中所述的参照水平。其它人可溶性ST2参照水平可由本领域技术人员确定。在一些实施方案中，所述样品含有血、血清或血浆。可获得所述样品，且使用至少一种本文中所述的抗体或片段确定人可溶性ST2的水平可如本文中所述进行。选择治疗的方法亦提供了对于受试者选择治疗的方法，其包括从受试者获得样品，并使用本文中所述的至少一种抗体或抗体片段确定样品中的人可溶性ST2的水平，其中与人可溶性ST2的参照水平相比，样品中人可溶性ST2的升高水平表明应对受试者提供特定治疗。举例而言，所述特定治疗可选自下组:亚硝酸盐、钙通道阻断剂、利尿剂、血栓溶解剂、洋地黄、肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)调节剂(例如β_肾上腺素能阻滞剂(例如阿普洛尔(alprenolol)、布新洛尔(bucindolol)、卡替洛尔(carteolol)、卡维地洛(carvedilol)、拉贝洛尔(Iabetalol)、纳多洛尔(nadolol)、喷布洛尔(penbutolol)、口引哚洛尔(pindolol)、普萘洛尔(propanolol) (inderal)、索他洛尔(sotalol)、噻吗洛尔(timolol)、醋丁洛尔(acebutolol)、阿替洛尔(atenolol)、倍他洛尔(betaxolol)、比索洛尔(bisoprolol)、塞利洛尔(celiprolol)、艾司洛尔(esmolol)、美托洛尔(metoprolol)和萘必洛尔(nebivolol)、血管紧张素转化酶抑制剂(例如贝那普利(benazepril)、卡托普利(captopril)、依那普利(enalopril)、福辛普利(fosinopril)、赖诺普利(Iisinopril)、莫昔普利(moexipril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quiapril)、雷米普利(ramipril)和群多普利(trandolapril)),醒留酮拮抗剂(例如螺内酯(spironolactone)、依普利酮(eplerenone)、坎利酮(canrenone) (canrenoatepotassium)、prorenone (prorenoate potassium)和 mexrenone(mexrenoatepotassium))、肾素抑制剂(例如阿利吉仑(aliskiren)、瑞米吉仑(remikiren)和依那吉仑(enalkiren))、和血管紧张素II受体阻滞剂(例如纟颜沙坦(valsartan)、替米沙坦(teImisartan)、氯沙坦(1sartan)、厄贝沙坦(irbesartan)和奥美沙坦(olmesartan))、和降胆固醇剂(例如抑制素)。其它用于治疗的方法在本领域中也是已知的，例如Braunwald’s Heart Disease:ATextbook of CardiovascularMedicine, Single Volume, 9th Edition。具体治疗亦可为向受试者施用至少一种或多种治疗剂，改变(例如增加或减少)向受试者施用的一种或多种治疗剂的频率、剂量或长度，或从患者的治疗方案中去除至少一种或多种治疗剂。所述治疗亦可为受试者的住院护理(例如将受试者收容或重新收容至医院(例如重症监护或危症监护单元)或辅助护理机构)。在一些实施方案中，所述治疗是手术(例如器官或组织移植或血管成形术)。在一些实施方案中，所述人可溶性ST2的参照水平可为任何本文中所述的参照水平。其它人可溶性ST2参照水平可由本领域技术人员确定。在一些实施方案中，所述样品含有血、血清或血浆。可获得所述样品，且使用至少一种本文中所述的抗体或片段确定人可溶性ST2的水平可如上所述进行。诊断受试者的方法本文中 所述的方法可用于广泛种类的临床背景。举例而言，此类方法可用于一般性群体筛选(general population screening),包括由医师筛查,例如在医院和门诊诊所中，以及急诊室中。在一些实施方案中，本文中所述的方法可用于确定受试者中疾病存在的可能性。增加水平的人可溶性ST2通常与某些疾病的存在相关，所述疾病如但不限于:心血管疾病，肺病，败血病，川崎病，和Th2相关疾病，以及任何本文中所述的其它疾病。Th2相关疾病是与异常2型T辅助细胞(Th2)应答相关的疾病。Th2相关疾病由数个因素表征，包括但不限于TNF-alpha、IL-4、-5、-6、-10和-13,但非IFN-gamma的存在(Robinson, J.Allergy Clin.1mmunol.92:313, 1993)。CD4+T 细胞根据其分泌的细胞因子分类。Th2细胞分泌大量白介素-4(IL-4)，IL-5和IL-13，其促进B细胞的抗体产生和成纤维细胞的胶原合成，而Thl细胞分泌大量干扰素-Y和相关的促炎症细胞因子。Thl型和Th2型的细胞因子可交叉调节彼此的应答。认为Thl/Th2的失衡导致数种感染、变态反应和自身免疫性疾病的发病。某些示例性Th2相关疾病包括但不限于，系统性红斑狼疮和哮喘，以及主要独立于Th2应答的炎性病状(inflammatoryconditions),如感染性休克或外伤(Trajkovic 等，Cytokine Growth Factor Rev.15:87-95，2004;Brunner 等，IntensiveCare Med.30:1468-1473, 2004) 0其它示例性Th2相关疾病包括先兆子痫和多发性硬化。在一些实施方案中，Th2相关疾病是自身免疫性疾病。自身免疫性疾病通常在当受试者的免疫系统针对一种或多种受试者的组分(细胞、组织或不含细胞/组织的分子)活化，并攻击该受试者自身的正常器官、组织或细胞时发生。示例性自身免疫性疾病包括但不限于肾上腺素能药抗性(adrenergic drug resistance)，斑秀(alopecia areata)，强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis)，抗憐脂综合征(antiphospholipidsyndrome)，自身免疫性阿狄森病(autoimmune Addison’ s disease)，肾上腺的自身免疫性疾病(autoimmunediseases of the adrenal gland)，变应性脑脊髓炎(allergic encephalomyelitis),自身免疫性溶血性贫血(autoimmune hemolyticanemia),自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis)，自身免疫性炎性眼病(autoimmune inflammatory eye disease)，自身免疫性新生儿血小板减少症(autoimmune neonatal thrombocytopenia),自身免疫性嗜中性白血球减少症(autoimmune neutropenia),自身免疫性卵巢炎和睾丸炎(autoimmuneoophoritisand orchitis)，自身免疫性血小板减少(autoimmune thrombocytopenia),自身免疫性甲状腺炎(autoimmune thyroiditis)，贝切特病(Behcet’ s disease)，大疱性类天疱疮(bullous pemphigoid)，心肌病(cardiomyopathy)，心内血回收综合征(cardiotomy syndrome), 口炎性腹湾-皮炎(celiac sprue-dermatitis)，慢性活动性肝炎(chronic active hepatitis)，慢性疲劳免疫功能障碍综合征(chronic fatigueimmunedysfunction syndrome (CFIDS))，急性炎性脱髓鞘性多神经病(chronicinfIammatorydemyelinating polyneuropathy),丘-施二氏综合征(Churg-Strausssyndrome)，症痕性类天疱疮(cicatrical pemphigoid)，CREST 综合征(CRESTsyndrome)，冷凝集素病(cold agglutinin disease)，克罗恩病(Crohn，s disease)，致密沉积物病(dense deposit disease)，与来自器官移殖作用相关的疾病(diseases associatedwith effects from organ transplantation)，盘状狼疮(discoidlupus)，特发性混合型冷沉淀球蛋白血症(essential mixed cryoglobulinemia)，纤维肌痛-纤维肌炎(fibromyalgia-fibromyositis),肾小球肾炎(glomerulonephritis 例如 IgA 肾病(IgAnephrophathy))，麸胶敏感性肠病(gluten-sensitiveenteropathy)，古德帕斯丘综合征(Goodpasture’s syndrome)，移植物抗宿主病(graft vs.host disease (GVHD))，格雷夫斯病(Graves’ disease，包括例如格雷夫斯甲状腺炎(Graves thyroiditis)和格雷夫斯眼病(Graves opthalmopathy))，格-巴二氏多神经炎(Guillain-Barre)，甲状腺功能允进症(hyperthyroidism，即桥本甲状腺炎(Hashimoto’ s thyroiditis))，特发性肺纤维变性(idiopathic pulmonaryf ibrosis)，特发性阿狄森病(idiopathic Addison’ s disease)，特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenia purpura(ITP))，IgA 神经病(IgA neuropathy)，膜岛素耐受综合征(Insulin Resistance Syndrome)，幼年型关节炎(juvenilearthritis)，扁平苔藓(lichen planus)，红斑性狼疮(lupus erythematosus),梅尼尔病(Meniere’ s disease)，代谢综合征(Metabolic Syndrome)，混合性结缔组织病(mixed connective tissue disease)，多发性硬化(multiple sclerosis)，重症肌无力(Myasthenia Gravis)，心肌炎(myocarditis)，糖尿病(diabetes，例如 I 型糖尿病(Type
Idiabetes)或II型糖尿病(diabetes))，神经炎(neuritis)，其它内分泌腺衰竭(otherendocrine gland failure)，寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris)，恶性贫血(perniciousanemia)，结节性多动脉炎(polyarteritis nodosa)，多软骨炎(polychrondritis)，多内分泌腺病(Polyendocrinopathies)，多腺性综合征(polyglandular syndromes)，风湿性多肌痛(polymyalgia rheumatica)，多肌炎和皮肌炎(polymyositis and dermatomyositis)，心肌梗塞后心包炎(post-myocardial infarct ion)，原发性无丙种球蛋白血症(primaryagammaglobulinemia),原发性胆汁性肝硬变(primary biliary cirrhosis)，银屑病(psoriasis)，银屑病关节炎(psoriatic arthritis)，雷诺现象(Raynaud’s phenomenon)，复发性多软骨炎(relapsing polychondritis)，莱特尔综合征(Reiter’ s syndrome),风湿性心脏病(rheumatic heart disease)，风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)，结节病(sarcoidosis)，硬皮病(scleroderma)，口腔干燥-风湿性关节炎综合征(Sjogren’ ssyndrome)，僵体综合征(stiff-man syndrome)，系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus)，大动脉炎(Takayasu arteritis)，颞动脉炎/巨细胞动脉炎(temporalarteritis/giant cell arteritis)，溃痕性结肠炎(ulcerative colitis)，荨麻疫(urticaria)，葡萄膜炎(uveitis)，眼葡萄膜炎(uveitis opthalmia)，血管炎(vasculitides)如疱疫样皮炎血管炎(dermatitis herpetiformis vasculitis)，白癒风(vitiligo)，和韦格纳肉芽肿病(Wegener，s granulomatosis)。心血管疾病是心脏和血管的病症，并包括动脉、静脉、微动脉和毛细血管的病症。由本文中所述方法诊断的心血管疾病可包括但不限于充血性心衰(congestiveheart failure，HF)，急性冠状动脉病(acute coronary artery disease，CAD)，心律失常(arrhythmia)，不对称性室中隔肥大(asymmetric septalhypertrophy)(例如左心室肥大伴随舒张期功能障碍(left ventricular hypertrophywith resultant diastolicdysfunction))，心肌病(cardiomyopathy)，辧膜功能障碍(valvular dysfunction)，心包炎(pericarditis)，动脉粥样硬化(atherosclerosis)，和急性心肌梗死(acutemyocardial infarction，Ml)。肺病是肺的病症。由本文中所述的方法诊断的肺病可包括但不限于)，慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease (COPD))，哮喘(asthma)，(pneumonia)，气胸(pneumothorax)，肺栓塞(pulmonary embolism)，晚期呼吸窘迫综合征(advanced respiratory distress syndrome (ARDS))，胸腔积液(pleuraleffusion)，转移性疾病(metast atic disease)，肺水肿(pulmonary edema)，胃食管返流疾病伴吸引术(gastrooesophageal reflux disease with aspiration)，间质性纤维化(interstitialfibrosis)，肺尘埃沉着病(pneumoconiosis)，肉芽肿病(granulomatous disease)，胶原血管病(collagen vascular disease)，和限制性肺疾病(restrictive lung disease)。若受试者具有人可溶性ST2的升高水平，例如与参照水平相比升高，则可作出积极治疗受试者的决定，且所述受试者可由医院收容以供住院治疗，例如在医院(例如急症监护或危症监护单元)或辅助护理机构中。确定受试者是否患有疾病如心血管疾病或肺病，败血病，川崎病，或Th2相关疾病，或任何本文中所述疾病，在多种情况下是需要的。举例而言，便携式测试试剂盒可允许急救医疗人员在当场衡量受试者，以确定是否应将其运送至急诊科。而且，伤员检别分类决定(triage decision)，如在急诊科或其它临床情形中的伤员检别分类决定，亦可基于由本文中所述方法提供的信息作出。呈现增加的人可溶性ST2水平的那些患者应相对于具有较低水平的那些患者优先处置。
在一些实施方案中，人可溶性ST2的水平确定一次，例如，当怀疑受试者患有疾病时(例如，当交付予医学从业人员或健康护理设施时)。在一些实施方案中，人可溶性ST2的水平在怀疑受试者患有疾病(例如，当交付予医学从业人员或健康护理设施时)之后2、4、6、8、12、18和/或24小时，和/或1-7日或更久中的一个或多个时点确定。在一些实施方案中，人可溶性ST2的水平的确定多于一次。在一些实施方案中，当人可溶性ST2的水平的确定多于一次时，可使用最高水平，或可确定并使用水平之间的变化。人可溶性ST2的水平亦可确定多次以衡量受试者对治疗的响应。举例而言，可将在施用治疗(例如一剂或多剂或一轮或多轮治疗)之后获取的人可溶性ST2水平与在起始治疗之前的人可溶性ST2的水平(例如基线水平)相比较。人可溶性sT2水平之间的变化会表明治疗是否有效，例如，人可溶性ST2水平的减少会表明治疗是有效的。在一些实施方案中，测定受试者中人可溶性ST2的水平并与人可溶性ST2参照水平相比较。任何本领域技术人员已知的多种技术可用于测定受试者中的人可溶性ST2水平。示例性测定方法包括但不限于，本领域已知方法如定量PCR或Northern印迹分析。在一些实施方案中，受试者中人可溶性ST2的水平使用免疫分析法如酶联免疫吸附分析(ELISA)测定。举例而言，在一些实施方案中，将抗体或其抗原结合片段与来自受试者的样品相接触。样品可包含或来源于任何受试者的多种细胞或组织。举例而言，样品可含有血、血清或血浆中的一种或多种。然后，检测并任选地定量抗体或抗体片段的结合，并基于抗体或抗体片段结合的水平确定蛋白质水平。在一些`实施方案中，样品基本上不含ST2蛋白质的ST2L形式，使得根据本文中公开的方法检测出的样品中的ST2的大多数是人可溶性ST2。在一些实施方案中，样品不含可检测的ST2L，使得样品中仅有的可检测的ST2是人可溶性ST2。在一些实施方案中，基本上不含ST2L，或不含可检测的ST2L的样品，是血清或血样品。在一些实施方案中，使用至少一种本文中所述的抗体或抗原结合片段在免疫分析法中测定受试者中的人可溶性ST2水平。如下文实施例部分更加详细地叙述，包含由在ATCC保藏并赋予专利保藏号PTA-10431的杂交瘤产生的抗体的抗体组合物相对于其它商业上可获得的抗体，对人可溶性ST2抗原呈现增加的亲和力。此类抗体可依照本文中所述方法使用。本文中所述方法可用于确定受试者不患有ST2相关病状。ST2相关病状是与升高水平的ST2相关的病状。某些示例性的ST2相关病状包括但不限于心血管疾病，肺病，败血病，川崎病，和Th2相关疾病。ST2相关病状通常是严重的，且通常要求积极治疗。呈现某些非特异性症状的受试者可能患有或未患有ST2相关病状(例如心血管疾病，肺病，败血病，川崎病，或Th2相关疾病)。非特异性症状包括但不限于胸痛或不适，呼吸急促，恶心，呕吐，嗳气(eructation)，流汗，心悸，头晕，疲劳和昏厥。每个症状可具有不同的病因。在一些实施方案中，本文中所述的方法可用于风险分层(riskstratification),例如，确定受试者具有低严重性或低风险形式的ST2相关病状。举例而言，某些患有心血管疾病(例如心肌梗死或心衰)的受试者具有不利后果(如死亡或复发心脏事件)的风险低，并呈现较低浓度的人可溶性ST2，是与患有心血管疾病、且不利后果的风险高的受试者中观察到的相比。此类受试者可视为具有“低严重性”或“低风险”形式的ST2相关心血管病状。然而，无论在高风险还是在低风险群体中，均观察到与在未患有ST-2相关病状的受试者中观察到的相比较高浓度的人可溶性ST2。患有低严重性形式的ST2相关病状的受试者通常具有高于人可溶性ST2参照水平(例如健康或正常个体的人可溶性ST2中位浓度)的人可溶性ST2浓度，而患有高严重性形式的ST2相关病状的受试者通常具有高于人可溶性ST2参照水平(例如健康或正常个体中观察到的人可溶性ST2浓度)的80%的人可溶性ST2浓度。确定呈现某些非特异性症状的受试者并不患有，或患有低严重性形式的ST2相关病状，可导致改善的诊断和/或更加有效的治疗决策，例如此种受试者可能不需要积极治疗。举例而言，在急性心肌梗死之后人可溶性ST2浓度升高的患者与人可溶性ST2浓度低的患者相比呈现更多的心重塑(cardiac remodeling)(增加的纤维化)，而且在呈现人可溶性ST2高浓度的受试者中，依普利酮差异化地减弱心重塑(Weir等，J.Am.Coll.Cardiol.55:243-250,2010)。因此，可使用人可溶性ST2浓度鉴定哪个患者应接受不同的，可能是非标准的住院治疗，或更加积极的治疗。胸痛胸痛在约1%至2%的门诊病人中是主要的抱怨，且尽管原因通常不是心源性的，心脏疾病仍为在美国死亡的最主··要原因。因此，区分胸痛的严重和良性原因是至关重要的。本文中所述的方法可用于作出这种决定。出现在急诊科的具有胸痛的受试者可患有食道痛，溃疡，急性肺障碍(Iungproblem)如肺栓塞(PE)(潜在致命的)，破裂的或剖开的动脉瘤(高度致命的)，胆囊发作(gall bladder attack),心包炎(围绕心脏的包囊的验证)，心绞痛(无损伤的心脏疼痛)，或心肌梗死(潜在致命的)。精确的诊断可能无法立即作出，但是否收容受试者或积极治疗受试者的决策通常应立即作出。若本文中所述的方法表明该受试者具有升高的可溶性ST2水平，例如，罹患ST2相关病状，可作出积极处理受试者的决定，例如，以避免因缺乏治疗导致的潜在不利后果。其它关于胸痛的治疗和诊断的信息可见于，例如Cayley (Am.Fam.Phys.72(10):2012-2028，2005)。呼吸困难呼吸困难，或呼吸急促(亦定义为异常或不适的呼吸)，是出现在急诊科的受试者的常见症状。对于呼吸困难的区别诊断包括四大类:(I)心源性，(2)肺源性，(3)混合的心源性和肺源性，和(4)既非心源性亦非肺源性。心源性呼吸困难的原因包括右、左或双心室充血性心衰伴以其导致的收缩期功能障碍，冠状动脉病，近期或远期心肌梗死，心肌病，瓣膜功能障碍，左心室肥大伴以其导致的收缩期功能障碍，不对称性室中隔肥大，心包炎，和心律失常。肺源性原因包括阻塞性(例如慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘)和限制性过程(例如肺外原因如肥胖，脊柱或胸壁急性，和内在性肺病理学(intrinsicpulmonarypathology),如间质性纤维化,肺尘埃沉着病，肉芽肿病，或胶原血管病)。混合的心源性和肺源性病状包括COPD伴以肺动脉高压和肺源性心脏病，去条件化(deconditioning)，肺栓塞，ARDS，和外伤。既非心源性亦非肺源性病症包括代谢病状如贫血、糖尿病酮症酸中毒和其它较不常见的原因，包括代谢性酸中毒，胸壁或身体其它位置的疼痛，和神经肌肉障碍如多发性硬化和肌营养不良。阻塞性鼻喉问题(Obstructive rhinolaryngeal problem)包括由于息肉或鼻中隔偏曲导致的鼻阻塞，扩大的扁桃体，和声门上或声门下气道狭窄(supraglottic or subglottic airway stricture)。呼吸困难亦可作为精神疾病的肉体表现而呈现，例如焦虑症，其导致通气过度。关于呼吸困难的衡量和治疗的信息可见于，例如Morgan和Hodge, Am.Fam.Phys.57(4):711-718, 1998。任何本文中公开的抗体或抗原结合片段可用于确定患者不患有ST2相关病状。在一些实施方案中，测定受试者中的人可溶性ST2的水平(例如通过上述任一种方法)并与人可溶性ST2参照水平比较。若受试者中人可溶性ST2的水平类似于人可溶性ST2参照水平，可确定受试者具有非常低的患有ST2相关病状的可能性。当受试者中人可溶性ST2的水平与人可溶性ST2参照水平在范围上充分接近时，这两者是“类似的”，该受试者不太可能患有ST2相关病状。通常，当受试者中人可溶性ST2的水平与人可溶性ST2参照水平彼此相差约25%以内，例如约25%，20%, 15%，10%, 5%或更低以内时，这两者是“类似的”。本领域技术人员对于所讨论的ST2相关病状能够确定合适的人可溶性ST2参照水平。本领域技术人员亦会知道此类人可溶性ST2水平的正常差异，且当阅读本公开时，能够确定人可溶性ST2水平是否类似于人可溶性ST2参照水平。在一些实施方案中，人可溶性ST2水平确定一次，例如，当怀疑受试者患有ST2相关病状时进行确定。在一些实施方案中，人可溶性ST2水平在怀疑受试者患有ST2相关病状之后2、4、6、8、12、18和/或24小时，和/或1-7日或更久中的一个或多个时点确定。在一些实施方案中，人可溶性ST2的水平确定进行多于一次，例如以确认或检查在第一次测定中确定的人可溶性ST2的水平。在一些实施方案中，本文中所述的人可溶性ST2-结合抗体及其抗原结合片段可用于一种或多种描述于美国专利申请
发明者J.V.斯奈德 申请人:重症监护诊断股份有限公司