一种对可溶性抗体进行纯化的方法
【专利摘要】本发明公开了一种对可溶性抗体进行纯化的方法，首先将优化条件下诱导表达的菌液离心后收集菌体；经Protein?L柱纯化，监测纯化的效果；同时将人大肠癌P-gp21经电泳，电转至NC膜；高速离心；悬至浑浊；10％分离纯化的抗人大肠癌抗体，电转；纯化的抗体作一抗，标记的马抗小鼠抗体为二抗；阴性对照为裂菌上清，阳性对照为抗体；需要24℃表达21小时；重悬超声裂解时的条件为：80W，时间不少于30min。本发明的有益效果是，实验数据准确，可以定性、定量分析，同时为后续展开的人源化提供依据和支持。
【专利说明】一种对可溶性抗体进行纯化的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生化的检测方法，具体来说，是指一种对可溶性抗体进行纯化的方法。
【背景技术】
[0002]化疗是人民目前治疗肿瘤尤其是恶性肿瘤的主要方法，在化疗过程中出现的多药耐药是肿瘤化疗的最主要障碍，其中可溶性抗体的过表达是引发肿瘤细胞的最主要原因。目前用于肿瘤多药耐药性检测和治疗的大多为完整抗体，组织穿透能力差，在血液和非瘤组织的清除速度比较慢。本发明试图探究一种构建大肠癌抗体的原核表达载体，制备纯化处具有一定生物活性的抗体，该抗体的筛选有望为大肠癌等肿瘤细胞的多药耐药性的检测和治疗提供新的选择。
【发明内容】
[0003]为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案:
[0004]一种对可溶性抗体进行纯化的方法，首先将优化条件下诱导表达的菌液离心后收集菌体j^Protein L柱纯化，监测纯化的效果；同时将人大肠癌P_gp21经电泳，电转至NC膜；高速离心；悬至浑浊；10%分离纯化的抗人大肠癌抗体，电转；纯化的抗体作一抗，标记的马抗小鼠抗体为二抗；阴性对照为裂菌上清，阳性对照为抗体。
[0005]本发明中，需要24°C表达21小时。
[0006]本发明中，重悬超声裂解时的条件为:80W，时间不少于30min。
·[0007]本发明的有益效果是，实验数据准确，可以定性、定量分析，同时为后续展开的人源化提供依据和支持。
【具体实施方式】
[0008]一种对可溶性抗体进行纯化的方法，首先将优化条件下诱导表达的菌液离心后收集菌体j^Protein L柱纯化，监测纯化的效果；同时将人大肠癌P_gp21经电泳，电转至NC膜；高速离心；悬至浑浊；10%分离纯化的抗人大肠癌抗体，电转；纯化的抗体作一抗，标记的马抗小鼠抗体为二抗；阴性对照为裂菌上清，阳性对照为抗体；需要24°C表达21小时；重悬超声裂解时的条件为:80W，时间不少于30min。
[0009]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种对可溶性抗体进行纯化的方法，其特征在于，首先将优化条件下诱导表达的菌液离心后收集菌体j^Protein L柱纯化，监测纯化的效果；同时将人大肠癌P_gp21经电泳，电转至NC膜；高速离心；悬至浑浊；10%分离纯化的抗人大肠癌抗体，电转；纯化的抗体作一抗，标记的马抗小鼠抗体为二抗；阴性对照为裂菌上清，阳性对照为抗体。
2.如权利要求1所述的一种对可溶性抗体进行纯化的方法，其特征在于，需要24°C表达21小时。
3.如权利要求1所述的一种对可溶性抗体进行纯化的方法，其特征在于，重悬超声裂解时的条件为:80W，时间不`少于30min。
【文档编号】C07K16/18GK103665162SQ201310674278
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月2日 优先权日:2013年12月2日
【发明者】仲集华 申请人:仲集华