专利名称：一种从剑麻榨汁提取蛋白酶的方法
技术领域：
本发明涉及蛋白质提取纯化技术，具体说是一种从剑麻榨汁提取蛋白酶的方法。
背景技术：
剑麻蛋白酶是一种疏基蛋白酶，酶活力闻，溶解性好，热稳定性闻，酶制剂成品为白色或乳黄色粉末，在低温冷藏条件下，稳定性好，一年内酶活力降低少于10%，广泛用于食品、医药、化妆品、纺织、饲料、皮革等行业。蛋白质的提取纯化方法主要有盐析、有机溶剂沉淀、等电点沉淀、离子交换层析、单宁沉淀、亲和层析、超滤浓缩等方法。但是，单独使用上述方法中的其中一种技术，提取纯化剑麻蛋白酶的效果并不好。本发明首先将去除沉淀物的剑麻榨汁超滤浓缩，然后再加入硫酸铵来沉淀其中的剑麻蛋白酶，一方面可以在超滤过程中除去一部分小分子的蛋白质，另一方面则可大量减少硫酸 铵的用量，降低了生产成本，也减少了环境污染，剑麻蛋白酶成品的活力高、质量好。我国剑麻主产区在广西、广东、和海南等地区，目前广西的剑麻种植面积最大。剑麻在加工抽取剑麻纤维之后，有大量的剑麻渣，目前还未得到开发利用。丰富的剑麻原料资源，为本发明的产业化提供了坚实的原料保障。
发明内容
本发明首先将去除沉淀物的剑麻榨汁超滤浓缩，然后再加入硫酸铵来沉淀其中的剑麻蛋白酶，可以在超滤时除去分子量小的蛋白质，还可以大量减少硫酸铵的用量，降低了成本，减少了环境污染，剑麻蛋白酶成品的活力高、质量好。本发明通过以下技术方案予以实现:一种从剑麻榨汁提取剑麻蛋白酶的方法，包括如下步骤:(I)榨汁，将新鲜剑麻渣压榨，得到剑麻榨汁；(2)过滤，将剑麻榨汁过滤，去掉粗渣，得到去除粗渣的滤液；(3)离心，将去粗渣的粗酶液离心，得到透明粗酶液；(4)超滤浓缩，将透明粗酶液超滤浓缩，得到浓缩酶液；(5)硫酸铵沉淀，在浓缩酶液中加入硫酸铵，使酶盐析、沉淀得到酶沉淀物；(6)离心，将酶沉淀物进行离心收取膏状的酶膏；(7)干燥和粉碎，将酶膏干燥，粉碎，得粉状的蛋白酶成品。优选的是，所述的新鲜剑麻渣为去纤维后的新鲜剑麻渣。优选的是，所述步骤(2)的过滤为采用200目滤布的过滤。优选的是，所述步骤(3)的离心是用高速碟片离心机离心，转速为5000转/分钟 8000转/分钟。优选的是，所述步骤(4)的超滤浓缩，使用6000 20000道尔顿的超滤膜，工作压力为正0.03MPa 0.1MPa，温度为15°C 30°C，浓缩比为10倍。
优选的是，所述步骤(5)的硫酸铵浓度为20 % 50 %。优选的是，所述步骤￠)的离心，转速为3000转/分钟 7000转/分钟。优选的是，所述步骤(7)的干燥为冷冻干燥，温度为-10°C _50°C。本发明的有益效果为:能耗少、成本底，工艺简单，回收率高，节能环保。提取的剑麻蛋白酶成品的纯度高，质量好。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式并不局限于实施例表示的范围。实施例1将新鲜剑麻渣进行压榨，得到蛋白酶活力约为3000活力单位/毫升的剑麻榨汁；用200目滤布将剑麻榨汁过滤，去除其中的粗杂质，得到去除粗渣的滤液；用碟片离心机将滤液离心，去除其中的颗粒细微的杂质，得到透明粗酶液；超滤浓缩，使用10000道尔顿的超滤膜，在工作压力为0.05MPa，温度为15°C条件下，将透明粗酶液超滤浓缩至原体积的10%，得到蛋白酶活力为22000活力单位/毫升的浓缩酶液；在浓缩酶液中加硫酸铵至终浓度50%，使酶盐析、沉淀；用无孔三 足离心机离心收集膏状的酶膏；将酶膏冷冻干燥，然后将所得的干燥酶块粉碎，得粉状的蛋白酶成品，酶活力达到151万单位/克。实施例2将新鲜剑麻渣进行压榨，得到蛋白酶活力约为3500活力单位/毫升的剑麻榨汁；用200目滤布将剑麻榨汁过滤，去除其中的粗杂质，得到去除粗渣的滤液；用碟片离心机将滤液离心，去除其中的颗粒细微的杂质，得到透明粗酶液；超滤浓缩，使用20000道尔顿的超滤膜，在工作压力为0.08MPa，温度为17°C条件下，将透明粗酶液超滤浓缩至原体积的8%，得到蛋白酶活力为31000活力单位/毫升的浓缩酶液；在浓缩酶液中加硫酸铵至终浓度20%，用碟片离心机离心，去除沉淀(杂质)；在其酶液中补加硫酸铵至终浓度46%，使酶盐析、沉淀；用无孔三足离心机离心收集膏状的酶膏；将酶膏冷冻干燥，然后将所得的干燥酶块粉碎，得粉状的蛋白酶成品，酶活力达到183万单位/克。实施例3将新鲜剑麻渣进行压榨，得到蛋白酶活力约为3100活力单位/毫升的剑麻榨汁；用200目滤布将剑麻榨汁过滤，去除其中的粗杂质，得到去除粗渣的滤液；用碟片离心机将滤液离心，去除其中的颗粒细微的杂质，得到透明粗酶液；超滤浓缩，使用20000道尔顿的超滤膜，在互作压力为0.lOMPa，温度为22°C条件下，将透明粗酶液超滤浓缩至原体积的9%，得到蛋白酶活力为26000活力单位/毫升的浓缩酶液；在浓缩酶液中加硫酸铵至终浓度25%，用碟片离心机离心，去除沉淀(杂质)；在其酶液中补加硫酸铵至终浓度45%，使酶盐析、沉淀；用无孔三足离心机离心收集膏状的酶膏；将酶膏冷冻干燥，然后将所得的干燥酶块粉碎，得粉状的蛋白酶成品，酶活力达到168万单位/克。尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与 描述的实施例。
权利要求
1.一种从剑麻榨汁提取剑麻蛋白酶的方法，其特征在于包括如下步骤: (1)榨汁，将新鲜剑麻渣压榨，得到剑麻榨汁； (2)过滤，将剑麻榨汁过滤，去掉粗渣，得到去除粗渣的滤液； (3)离心，将去粗渣的粗酶液离心，得到透明粗酶液； (4)超滤浓缩，将透明粗酶液超滤浓缩，得到浓缩酶液； (5)硫酸铵沉淀，在浓缩酶液中加入硫酸铵，使酶盐析、沉淀得到酶沉淀物； (6)离心，将酶沉淀物进行离心收取膏状的酶膏； (7)干燥和粉碎，将酶膏干燥，粉碎，得粉状的蛋白酶成品。
2.根据权利要求1所述的从剑麻榨汁提取剑麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述的新鲜剑麻渣为去纤维后的新鲜剑麻渣。
3.根据权利要求1所述的从剑麻榨汁提取剑麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(2)的过滤为采用200目滤布的过滤。
4.根据权利要求1所述的从剑麻榨汁提取剑麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(3)的离心是用高速碟片离心机离心 ，转速为5000转/分钟 8000转/分钟。
5.根据权利要求1所述的从剑麻 榨汁提取剑麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(4)的超滤浓缩，使用6000 20000道尔顿的超滤膜，工作压力为正0.03MPa 0.1MPaJ^度为15°C 30°C，浓缩比为10倍。
6.根据权利要求1所述的从剑麻榨汁提取剑麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(5)的硫酸铵浓度为20% 50%。
7.根据权利要求1所述的从剑麻榨汁提取剑麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(6)的离心，转速为3000转/分钟 7000转/分钟。
8.根据权利要求1所述的从剑麻榨汁提取剑麻蛋白酶的方法，其特征在于，所述步骤(7)的干燥为冷冻干燥，温度为-10°C -50°C。
全文摘要
本发明公开了一种从剑麻渣榨汁提取剑麻蛋白酶的方法，它包括如下步骤榨汁，将新鲜剑麻渣压榨，得到剑麻榨汁；过滤，将剑麻榨汁过滤，去掉粗渣，得到去除粗渣的滤液；离心，将去粗渣的粗酶液离心，得到透明粗酶液；超滤浓缩，将透明粗酶液超滤浓缩，得到浓缩酶液；硫酸铵沉淀，在浓缩酶液中加入硫酸铵，使酶盐析、沉淀得到酶沉淀物；离心，将酶沉淀物进行离心收取膏状的酶膏；干燥和粉碎，将酶膏干燥，粉碎，得粉状的蛋白酶成品。用本发明所提取的剑麻蛋白酶品质好、纯度高。本发明具有工艺简单，生产成本低，回收率高，节能环保等优点。
文档编号C12N9/50GK103088006SQ20131000778
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月9日 优先权日2013年1月9日
发明者彭胜良 申请人:广西南剑生物科技有限公司