专利名称：实体肿瘤组织消化液的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于将实体肿瘤组织分散成单细胞悬液的组织消化液。
背景技术：
在对实体肿瘤组织的细胞生物学特性进行分析研究(如细胞放射敏感性检测等)时，需先将样品组织块制备成分散的单细胞悬液。只有当样品组织中的各种细胞成分处在单细胞状态下，才能有效地对其进行各种细胞效应的检测分析，而细胞悬液质量的好坏与消化液配方和消化方法密切相关。现有技术中的各消化液对肿瘤组织的消化效果尚有待改进
发明内容
本发明的目的在于，提供一种能有效、快速地将实体肿瘤样品分散为单细胞悬液的组织消化液。为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种实体肿瘤组织消化液，其特征在于，其包括以下5种组分胶原酶I 型(collagenase, typel) 25 重量份；蛋白激酶I 型(pronase, typel) 50 重量份；纤维素酶(celIulase) 75重量份；透明质酸酶(hyaluronidase) 15重量份；PVP-40 (聚乙烯比咯烷酮)50重量份；将上述各组分按照2. 15mg/mL的重量/体积比加入到PBS (磷酸盐缓冲液)中混匀后，即得所述实体肿瘤组织消化液。如上所述的实体肿瘤组织消化液在消化实体肿瘤组织中的应用，其特征在于，步骤如下(I)取实体肿瘤组织样品，用生理盐水洗净后，将其剪碎成糜状；(2)将剪碎后的实体肿瘤组织样品移入玻璃离心管内，并加入所述实体肿瘤组织消化液，充分吹打混匀；(3)在35_40°C下水浴消化30-60分钟；(4)消化后的组织经200目尼龙滤膜过滤，即得到实体肿瘤组织的单细胞悬液。如上所述的应用，优选地，步骤(2)中所述实体肿瘤组织消化液的加入量为剪碎后的实体肿瘤组织样品的体积的O. 5-2倍。如上所述的应用，优选地，步骤(3)中所述的水浴消化是在38_39°C下水浴消化。如上所述的应用，优选地，步骤(3)中所述的水浴消化持续30-40分钟，在消化期间吹打1-2次。如上所述的应用，更优选地，步骤(3)中所述的水浴消化持续30分钟。如上所述的应用，优选地，所述的实体肿瘤组织是肿瘤鳞癌组织。
如上所述的应用，优选地，所述的实体肿瘤组织是肿瘤腺癌组织。如上所述的应用，优选地，所述的实体肿瘤组织是肿瘤未分化癌组织。本发明的有益效果为本发明提供了一种组织消化液的配方。经多年实验和改进后形成的本发明消化液，具有能有效分解肿瘤组织块内细胞间连接成分的功效。组织块经本发明消化液消化分解后，细胞膜损伤小、细胞悬液分散度好，且操作方便、效果稳定。
图1为鼻咽癌样品组织块照片，箭头处为鼻咽癌样品组织块。
图2为鼻咽癌样品组织剪碎后的状态照片，箭头处为剪碎成糜状的鼻咽癌样品组织。图3为鼻咽癌样品经本发明消化液消化后的单细胞悬液，经荧光染色后在显微镜下4倍放大的照片。图4为鼻咽癌样品经本发明消化液消化后的单细胞悬液，经荧光染色后在显微镜下10倍放大的照片。
具体实施例方式实施例1本发明提供了一种实体肿瘤组织消化液，本实施例中，其配制方法为(I)按以下配方取各组分胶原酶I 型(collagenase, typel) 25mg ；蛋白激酶I 型(pronase, typel) 50mg ；纤维素酶(cellulase)75mg ;透明质酸酶(hyaluronidase)l5mg ;PVP-40 (聚乙烯比咯烷酮)50mg。(2)将上述各组分加入PBS (磷酸盐缓冲液)IOOmL,并混和均匀后，置于4°C冰箱冷藏保存。上述各组分的用量可等比例放大或缩小。实施例2实施例1中制得的组织消化液，按照以下方法进行实体肿瘤组织消化(I)取如图1照片所示的鼻咽癌样品组织块，用生理盐水洗净后，将其剪碎成如图2照片所示的糜状。(2)将剪碎后的组织样品移入5mL玻璃离心管内，加入实施例1中制得的实体肿瘤组织消化液l_2mL，充分吹打混匀。(3)在38 39 V下水浴消化30分钟，消化期间吹打f 2次。(4)消化后的组织经200目尼龙滤膜过滤，即得到实体肿瘤组织的单细胞悬液。参见图3和图4，分别为鼻咽癌样品经本发明消化液消化后的单细胞悬液，经荧光染色后在显微镜下4倍和10倍放大的照片。如照片所示，肿瘤组织块已被有效地分散成为单细胞悬液，且细胞膜损伤较小，可对其进行后续的各种细胞效应的检测分析。
权利要求
1.一种实体肿瘤组织消化液，用于制备单细胞悬液，其特征在于，其包括以下5种组分 胶原酶I型25重量份； 蛋白激酶I型50重量份； 纤维素酶75重量份； 透明质酸酶15重量份； PVP-40 50重量份； 将上述各组分按照2. 15mg/mL的重量/体积比加入到PBS中混匀后，即得所述实体肿瘤组织消化液。
2.权利要求1所述的实体肿瘤组织消化液在消化实体肿瘤组织、制备单细胞悬液中的用途。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，步骤如下 (1)取实体肿瘤组织样品，用生理盐水洗净后，将其剪碎成糜状； (2)将剪碎后的实体肿瘤组织样品移入玻璃离心管内，并加入所述实体肿瘤组织消化液，充分吹打混匀； (3)在35-40°C下水浴消化30-60分钟； (4)消化后的组织经200目尼龙滤膜过滤，即得到实体肿瘤组织的单细胞悬液。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，步骤(2)中所述实体肿瘤组织消化液的加入量为剪碎后的实体肿瘤组织样品的体积的1. 0-3. O倍。
5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，步骤(3)中所述的水浴消化是在38-39°C下水浴消化。
6.如权利要求3所述的用途，其特征在于，步骤(3)中所述的水浴消化持续30-40分钟，在消化期间吹打1-2次。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，步骤(3)中所述的水浴消化持续30分钟。
8.如权利要求2所述的用途，所述的实体肿瘤组织是肿瘤鳞癌组织。
9.如权利要求2所述的用途，所述的实体肿瘤组织是肿瘤腺癌组织。
10.如权利要求2所述的用途，所述的实体肿瘤组织是肿瘤未分化癌组织。
全文摘要
本发明提供一种实体肿瘤组织消化液，其配方为胶原酶1型25重量份；蛋白激酶1型50重量份；纤维素酶75重量份；透明质酸酶15重量份；PVP-4050重量份；将上述各组分按照2.15mg/mL的重量/体积比加入到PBS中混匀后，即得所述实体肿瘤组织消化液。本发明消化液，具有能有效分解肿瘤组织块内细胞间连接成分的功效。组织块经本发明消化液消化分解后，细胞膜损伤小、细胞悬液分散度好，且操作方便、效果稳定。
文档编号C12N5/09GK103013924SQ20131000993
公开日2013年4月3日 申请日期2013年1月10日 优先权日2013年1月10日
发明者杨伟志 申请人:中国医学科学院肿瘤医院, 北京大恒图像视觉有限公司