一种能量平衡型肥胖基因体质评估的方法
【专利摘要】本发明公开了一种能量平衡型肥胖基因体质评估方法，其特征在于，通过同时检测分析个体的UCP1基因、UCP2基因、ADRB2基因、GNB3基因SNPs位点基因携带型为所有的受检者提供能量平衡型肥胖体质评估，可以让受检者在考虑以饮食和运动方式进行瘦身之前，先了解自身基因体质情况，了解个人的肥胖潜能成因，选择最适合的个体化营养及运动瘦身方式，将各种肥胖基因表现的型态一一击破，达到最有效健康的减重效果。
【专利说明】一种能量平衡型肥胖基因体质评估的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种能量平衡型肥胖基因体质评估方法，可用于评估能量平衡型肥胖基因体质情况，针对性的提示受检者根据遗传体质选择不同的减肥策略，属于分子生物学【技术领域】。
【背景技术】
[0002]肥胖症是一种热量代谢障碍，摄入热量超过消耗的热量，引起体内脂肪积聚过多所致。一般认为超过按身高所测标准体重20%即可成为肥胖。肥胖症是一种与遗传因素及生活方式密切相关的慢性疾病，它会引发血脂升高，容易造成脂肪肝、动脉血管病变、心脏病、糖尿病，肥胖的儿童还会引发性功能发育不良并导致成人期各种疾病发病率和死亡率上升。因此，若通过有效的方法来预防，就能避免过早地出现高血压、冠心病、糖尿病、脑血管病等疾患，从而提闻人们的生存质量。
由于至少有40%躯体脂肪量的差异是由遗传因素引起的，所以很容易明确遗传对肥胖有很大影响。遗传体质不同的人在患肥胖症时应采取不同的减肥策略，利用现代科学研究成果，开发一项基于分子遗传基础 的体重管理分子检测产品会对减肥者的减肥计划提供基因减肥概念的个性化体重管理建议，具有较强的社会意义和市场前景。目前肥胖症的临床治疗方法主要是饮食和运动疗法，但存在着碳水化合物、脂肪以及蛋白质摄入量控制“一刀切”和盲目采用减肥药物的非个体化治疗方式。原因主要在于无法明确地将患者区分成为不同的减重体质，从而对不同患者是否需要严格控制碳水化合物的摄入，是否需要控制脂肪的摄入，是否需要使用减肥药物，以及应该使用哪类减肥药物的治疗措施选择上没有明确指导。
人体在摄取食物中的能量用于维持所有生命活动，如果人体摄入的能量不足，机体会动用自身的能量储备甚至消耗自身组织以满足生命活动能量的需要，相反，如果能量摄入过多，除少量以肝、肌糖原的形式储藏外，几乎完全转化为脂肪，使人体发生异常的脂肪堆积，变得肥胖，因此，人每天能量的摄入与每天的能量消耗正好一致才能保持良好的健康状况。研究发现，能量平衡型肥胖相关基因变异对碳水化合物制品的基础代谢率功能差，影响细胞脂肪代谢，导致热量的代谢缓慢，使细胞囤积脂肪造成肥胖。增加罹患高血压的风险。BMI随年龄增加较多，不易形成肌肉，易导致全身性肥胖、下半身肥胖。相关变异导致大型脂肪细胞较多，肥胖几率增加。对减肥药效果反应不佳。高碳水化合物增加基因变异者2倍以上肥胖机会，且运动后脂肪氧化速度较低。
研究发现UCPI，UCP2，GNB3, ADRB2基因与能量平衡型肥胖体质有关。
解偶联蛋白(UCP)为线粒体解偶联蛋白家族成员，由该基因编码的蛋白作为线粒体内膜的跨膜蛋白，可以介导质子从线粒体内外膜间隙转运入线粒体内膜中，以降低内外膜的势能差，同时不生产ATP，直接将势能转化为热能释放。目前的多个研究表明，胰腺细胞的UCP表达量与胰岛素的释放密切相关。而脂肪细胞中的UCP则与脂质代谢和产能相关。有研究表明，该基因在特定群体中与个体的肥胖指数BMI相关，与II型糖尿病的发病也有一定的相关性。
肾上腺素受体(ADRB2)在瘦素调节的神经通路中扮演着重要角色，通过传递交感神经信号，参与骨的重吸收和能量的代谢，对骨骼发育及体重的调节有着重要影响。
G蛋白β 3亚单位(GNB3)主要功能是影响细胞脂肪代谢。变异影响热量的代谢缓慢，使细胞囤积脂肪造成肥胖。该基因的讯息传递功能影响脂肪代谢，因此除了造成肥胖之外，对于肥胖者罹患高血压的频率亦有所影响。
目前的基础研究已能从理论上证明基因分型检测可以用于判断肥胖体质的类型，而且检测方法简便、检测成本在可接受程度中、检测结果可信。因此，基因分型检测用于评估肥胖体质的可行性是明确的。根据基因检测结果结合体重管理测评系统建立个性化体重健康评估报告，有针对的解决体重控制问题，提高人们生活质量。因此利用现有科学、技术研究成果来开发这样一个产品，时机是成熟的。 本发明的目的是提供一种能量平衡型肥胖基因体质评估方法，可以让受检者在考虑以饮食和运动方式进行瘦身之前，先了解自身基因体质情况，了解个人的肥胖潜能成因，选择最适合的个体化营养及运动瘦身方式，将各种肥胖基因表现的型态一一击破，达到最有效健康的减重效果。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种能量平衡型肥胖基因体质评估方法，可以让受检者在考虑以饮食和运动方式进行瘦身之前，先了解自身基因体质情况，了解个人的肥胖潜能成因，选择最适合的个体化营养及运动瘦身方式，将各种肥胖基因表现的型态一一击破，达到最有效健康的减重效果。
为实现以上目的，本发明提供一种能量平衡型肥胖基因体质评估方法。其具体步骤
为:
步骤1:检测的样品类型与采样方法
用采样拭在口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本；
步骤2:基因组DNA的抽提方法
采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时一 2.5小时，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测；
步骤3:荧光定量PCR反应
将每一个被测者样本分别放入4个反应孔，同时检测4个位点，即解偶联蛋白I(UCPl)rsl800592 ;解偶联蛋白 2 (UCP2) rs660339 ;肾上腺素受体(ADRB2) rsl042713 ；G 蛋白 β 3亚单位(GNB3) rs5443，另外根据实验需要增设不含DNA模版的NTC空白对照孔；
每一个反应孔的基因分型可以根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan?_MGB技术，进行检测试剂合成；
在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10μ1,即浓度为20ng/μ? 的 DNA 模板 2μ1、?μ1 IOX 荧光定量 PCR 反应缓冲液 ABI Taqman ? MGB、0.?μ? 25mMd NTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5μ1 25mM MgCl2溶液、0.02μ1 (5unitsM) TaqDNA聚合酶、去离子水4.98μ1、4个位点分别采用不同的正向引物(20μΜ, 0.225μ1 )、反向弓丨物(20μΜ，0.22541)、￥1(:荧光探针(1(^]\1，0.25μ1)和 FAM 荧光探针(ΙΟμΜ，0.25μ1)工具进行检测(详见下表)；
【权利要求】
1.一种能量平衡型肥胖基因体质评估方法，其特征在于，具体步骤为 步骤1:检测的样品类型与采样方法 用采样拭在口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本； 步骤2:基因组DNA的抽提方法 采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时一 2.5小时，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测； 步骤3:荧光定量PCR反应 将每一个被测者样本分别放入4个反应孔，同时检测4个位点，即解偶联蛋白I(UCPl)rsl800592 ;解偶联蛋白 2 (UCP2) rs660339 ;肾上腺素受体(ADRB2) rsl042713 ;G 蛋白 β 3亚单位(GNB3) rs5443,另外根据实验需要增设不含DNA模版的NTC空白对照孔； 每一个反应孔的基因分 型可以根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan?_MGB技术，进行检测试剂合成； 在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10μ1,即浓度为20ng/μ? 的 DNA 模板 2μ1、?μ1 IOX 荧光定量 PCR 反应缓冲液 ABI Taqman ? MGB、0.?μ? 25mMd NTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5μ1 25mM MgCl2溶液、0.02μ1 (5unitsM) TaqDNA聚合酶、去离子水4.98μ1、4个位点分别采用不同的正向引物(20μΜ, 0.225μ1 )、反向弓丨物(20μΜ，0.22541)、￥1(:荧光探针(1(^]\1，0.25μ1)和 FAM 荧光探针(ΙΟμΜ，0.25μ1)工具进行检测，引物探针如下: 解偶联蛋白 I (UCPl) rsl800592 带VIC荧光A型探针 ATCaAGTGCATTT 带FAM荧光G型探针 ATCgAGTGCATTT 正向引物 TCCCCTACTGCTCTCTCCAA 反向引物 AGGGTCACAGGAGAAGCTGA 解偶联蛋白2 (UCP2)rs660339 带VIC荧光A型探针 ACAGaCAGCGCCC 带FAM荧光G型探针 ACAGgCAGCGCCC 正向引物 GGACGTAGCAGGAAATCAGC 反向引物 CAGTCATCTCGATGCTCCAA 肾上腺素受体(ADRB2) rsl042713 带VIC荧光A型探针 AATaGAAGCCAT 带FAM荧光G型探针 AATgGAAGCCAT 正向引物 CTGCAGACGGTCACCAACTA 反向引物 ATGGCAAAGTAGCGATCCAC G蛋白β 3亚单位(GNB3) rs5443 带VIC荧光A型探针 CGTCaGTGGCCT 带FAM荧光G型探针 CGTCgGTGGCCT 正向引物 ATCCAGTACCCCTTGGTTCC 反向引物 GTTTCCCTGAGGCTGTCTTG将反应孔和空白对照在P C R扩增仪上进行反应，先进行预热:5 (TC、2分钟，9 5 °C、IO分钟，然后再进行60个循环的95°C、30秒，60°C、1分钟、反应结束后取出后再放入荧光定量PCR仪上读取样品荧光量，得到解偶联蛋白I (UCPl)rsl800592，解偶联蛋白2 (UCP2)rs660339，肾上腺素受体(ADRB2) rsl042713，G蛋白β 3亚单位(GNB3) rs5443四张图； 步骤4: SNP基因型分析 将荧光定量PCR仪上显示的最终样本荧光信号的4个图和一个NTC空白对照进行比较，每个位点理论上存在三种不同的信号，纯VIC荧光信号、VIC和FAM杂合荧光信号以及纯FAM荧光信号，分别代表该位点三种不同的基因型； (1)、解偶联蛋白I (UCPl) rsl800592 在检测结果图中，坐标轴左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为AA基因型、坐标轴右上区域为AG基因型、坐标轴右下区域为GG基因型， (2)、解偶联蛋白2 (UCP2)rs660339 在检测结果图中，坐标轴左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为AA基因型、坐标轴右上区域为AG基因型、坐标轴右下区域为GG基因型， (3)、肾上腺素受体(ADRB2)rsl042713 在检测结果图中，坐标轴 左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为AA基因型、坐标轴中间区域为AG基因型、坐标轴右下区域为GG基因型， (4)、G蛋白 β 3 亚单位(GNB3)rs5443 在检测结果图中，坐标轴左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为AA基因型、坐标轴右上区域为AG基因型、坐标轴右下区域为GG基因型。
2.权利要求书I中的所述的四个基因的组合模式。
【文档编号】C12Q1/68GK103525903SQ201310144890
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年4月24日 优先权日:2013年4月24日
【发明者】王校, 傅咏南, 毛丹丹 申请人:上海中优医药高科技有限公司