一种厌氧增菌培养基及其配制方法
【专利摘要】本发明属于微生物培养【技术领域】，具体涉及一种厌氧增菌培养基及其配置方法，该培养基包含蛋白胨、酵母浸粉、脑心浸液肉汤、葡萄糖、硫代乙醇酸钠、氯化血红素、维生素K1、抗凝剂、厌氧指示剂、蒸馏水；根据其特殊的配比，可制备出能够能促进厌氧细菌大量繁殖的培养基，该培养基应用在临床上厌氧病原菌的培养，可提高厌氧病原菌的阳性检出率。
【专利说明】一种厌氧增菌培养基及其配制方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物培养【技术领域】，具体涉及一种厌氧增菌培养基及其配制方法。
【背景技术】
[0002] 厌氧菌引起的菌血症近年呈上升趋势且造成的死亡率较高。20世纪70年代血培 养厌氧菌分离率高达20%?30%，其中脆弱拟杆菌群占78%，在革兰阴性菌中仅次于大肠 埃希菌占第二。近年厌氧菌耐药性的出现使经验治疗面临挑战，厌氧菌引起的临床感染及 临床后果重新受到重视。厌氧血培养是为临床提供快速、准确诊断厌氧菌血症的金标准方 法。
[0003] 对厌氧菌血症回顾性研究表明，厌氧菌血症因诊断错误导致的死亡率可高达 55%?63%，但在明确病原菌后采用针对性治疗，死亡率可降至14%?17%。因此，厌氧血培 养结果对临床治疗的指导作用显而易见，漏检血培养中的厌氧菌将导致严重后果。准确、及 时的厌氧血培养结果对针对性抗菌治疗即为重要，厌氧增菌培养基的质量决定了血培养的 厌氧菌的阳性检出率和检出时间。由于厌氧菌对环境条件的要求苛刻，生长速度慢，实验室 报告结果时间较长，不能对临床及时指导。
【发明内容】
[0004] 为解决上述现有技术的不足，本发明提供一种厌氧增菌培养基，该培养基能促进 临床标本中厌氧细菌的繁殖，提高厌氧病原菌的阳性检出率。
[0005] 按照本发明的厌氧增菌培养基，其包含：蛋白胨20-28份，酵母浸粉1. 5-4. 0份， 脑心浸液肉汤〇. 5-1. 5份，葡萄糖0. 6-2. 5份，硫代乙醇酸钠2. 5-4. 0份，氯化血红素 0. 003-0. 008份，维生素 K1为0. 0003-0. 0008份，抗凝剂0. 3-0. 5份，厌氧指示剂0. 00005- 0. 0003 份，蒸馏水 900-1100 份。
[0006] 上述方案中优选的是，还包含含量为0. 05-0. 15份的L-半胱氨酸或维生素 C。
[0007] 上述任一方案中优选的是，还包含碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙、碳酸氢铵中的 任一种或几种混合物，含量为〇. 3-0. 6份。
[0008] 上述任一方案中优选的是，蛋白胨25份，酵母浸粉2份，脑心浸液肉汤1份，葡萄 糖2份，硫代乙醇酸钠3份，氯化血红素0. 005份，维生素 K1为0. 0005份，抗凝剂0. 35份， 厌氧指示剂〇. 0001份，蒸馏水1000份。
[0009] 上述任一方案中优选的是，还包含含量为0. 1份的L-半胱氨酸或维生素 C。
[0010] 上述任一方案中优选的是，还包含碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙和碳酸氢铵中的 任一种或几种混合物，含量为0. 4份。
[0011] 上述任一方案中优选的是，所述蛋白胨为多价胨，所述多价胨是胰化酪蛋白和胃 蛋白的等重量混合蛋白胨。
[0012] 上述任一方案中优选的是，所述蛋白胨为胰蛋白胨、大豆蛋白胨等中的任一种或 几种的混合。
[0013] 上述任一方案中优选的是，所述抗凝剂为聚茴香脑磺酸钠、对氨基苯甲酸、硫酸 镁、吸附抗生素复合树脂等中的任一种或几种混合。
[0014] 上述任一方案中优选的是，所述厌氧指示剂为刃天青和/或亚甲基蓝(美兰)。
[0015] 上述厌氧增菌培养基的配置方法，包括以下步骤： (1) 准备原料：蛋白胨20-28份，酵母浸粉1. 5-4. 0份，脑心浸液肉汤0. 5-1. 5份，葡萄 糖0. 6-2. 5份，硫代乙醇酸钠2. 5-4. 0份，氯化血红素0. 003-0. 008份，抗凝剂0. 3-0. 5份， 厌氧指示剂〇· 00005- 0· 0003份； (2) 将步骤（1)中的原料放入烧杯中，加入蒸馏水900-1100份，搅拌混均，调节pH值 6. 8-7. 0 ;然后加热煮沸，以驱逐液体中的氧气； (3 )将步骤（2 )中煮沸后的培养基转移到充有氮气的厌氧瓶或厌氧管中，此过程应避免 引入氧气；转移完成后，还应继续通入氮气10-20秒；然后封闭厌氧瓶或厌氧管,使其避免 进入氧气； (4) 将步骤（3)中装有培养基的厌氧瓶或厌氧管进行灭菌处理； (5) 在步骤（4)中灭菌后的培养基中加入0.0003-0. 0008份的维生素 K1，该培养基即 可使用。
[0016] 上述方案中优选的是，步骤（1)中的原料还包含含量为0. 05-0. 15份的L-半胱氨 酸或维生素。
[0017] 上述方案中优选的是，步骤（1)中的原料还包含碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙、碳 酸氢铵中的任一种或几种混合物，含量为0. 3-0. 6份。
[0018] 上述方案中优选的是，步骤（2)中所述调节pH值是使用lmol/L的NaOH溶液进行 调整。
[0019] 上述方案中优选的是，步骤（2)中所述煮沸时间为8-13分钟。
[0020] 上述方案中优选的是，所述煮沸时间为10分钟。
[0021] 上述方案中优选的是，步骤（4)中所述灭菌处理是在110-125°c下，进行湿热灭 菌18-25分钟。
[0022] 上述方案中优选的是，所述湿热灭菌为20分钟。
[0023] 本发明厌氧增菌培养基营养成分充足，蛋白胨、脑心浸液等能为厌氧菌的生长提 供丰富的营养，氯化血红素、维生素 K1作为细菌生长刺激因子，硫代乙醇酸钠作为除氧剂， 抗凝剂聚茴香脑磺酸钠可有效中和溶菌酶、抑制吞噬细胞以及使某些氨基糖苷类抗生素失 活，使细菌更好地生长。提供的适宜的环境条件能促进临床标本中厌氧细菌的繁殖，提高厌 氧病原菌的阳性检出率。
【具体实施方式】
[0024] 为了进一步了解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明的技术内容进 行详细阐述；实施例只对本发明起示例性的作用，而不具有任何限制性的作用，本领域的技 术人员在本发明的基础上做出的任何非实质性修改，都应属于本发明的保护范围。
[0025] 实施例1 一种厌氧增菌培养基，其包含：蛋白胨25克，酵母浸粉2克，脑心浸液肉汤1克，葡萄糖 2克，硫代乙醇酸钠3克，氯化血红素0. 005克，维生素 K1为0. 0005克，抗凝剂0. 35克，厌 氧指示剂0. OOOl克，蒸馏水1000ml，L-半胱氨酸0. 1克，碳酸氢钠0. 4克。
[0026] 在本实施例中，所述蛋白胨为胰蛋白胨；所述抗凝剂为聚茴香脑磺酸钠；所述厌 氧指示剂为刃天青。
[0027] 上述厌氧增菌培养基的配置方法，包括以下步骤： (1)准备原料：蛋白胨25克，酵母浸粉2克，脑心浸液肉汤1克，葡萄糖2克，硫代乙醇 酸钠3克，氯化血红素0. 005克，抗凝剂0. 35克，厌氧指示剂0. 0001克，L-半胱氨酸0. 1 克，碳酸氢钠0.4克。
[0028] (2)将步骤（1)中的原料放入烧杯中，加入蒸馏水1000ml，搅拌混均，调节pH值 6. 8 ;然后加热煮沸，以驱逐液体中的氧气；通入氮气至培养基冷却； (3) 将步骤（2)中冷却后的培养基转移到厌氧瓶中，此过程应避免引入氧气；转移完成 后,还应继续通入氮气15秒；然后封闭厌氧瓶，使其避免进入氧气； (4) 将步骤（3)中装有培养基的厌氧瓶进行灭菌处理； (5) 在步骤（4)中灭菌后的培养基中加入0. 0005克的维生素 K1，该培养基即可使用。
[0029] 在本实施例中，步骤（2)中所述调节pH值是使用lmol/L的NaOH溶液进行调整； 所述煮沸时间为1 〇分钟。
[0030] 在本实施例中，步骤（4)中所述灭菌处理是在121°C下，进行湿热灭菌20分钟。
[0031] 下面结合试验，对本实施例中的厌氧增菌培养基与其他现有的培养基进行比较。
[0032] 本实施例中的厌氧增菌培养基和现有技术中的液体硫乙醇酸盐培养基、牛脑心 浸液培养基分别培养大肠埃希菌（ATCC25922)、铜绿假单胞菌（ATCC27853)、溶组织梭菌 (ATCC19401)和产气荚膜梭菌，并对其各自的生长情况进行分析。
[0033] 具体试验方法：将大肠埃希菌（ATCC25922)、铜绿假单胞菌（ATCC27853)、溶组织 梭菌（ATCC19401)和产气荚膜梭菌各自的菌悬液1.0 X 108cfu/ml，分别稀释100倍，并分 别取0. Iml接种在厌氧增菌培养基、液体硫乙醇酸盐培养基和牛脑心浸液培养基中，置于 厌氧罐内，37°C培养48小时后，观察实验结果，如下表1 :
【权利要求】
1. 一种厌氧增菌培养基，其包含：蛋白胨20-28份，酵母浸粉1.5-4.0份，脑心浸液肉 汤0. 5-1. 5份，葡萄糖0. 6-2. 5份，硫代乙醇酸钠2. 5-4. 0份，氯化血红素0. 003-0. 008份， 维生素 I为0. 0003-0. 0008份，抗凝剂0. 3-0. 5份，厌氧指示剂0. 00005- 0. 0003份，蒸馏 水 900-1100 份。
2. 如权利要求1所述的厌氧增菌培养基，其特征在于，还包含含量为0. 05-0. 15份的 L-半胱氨酸或维生素 C。
3. 如权利要求1或2所述的厌氧增菌培养基，其特征在于，还包含碳酸氢钠、碳酸氢钾、 碳酸氢钙、碳酸氢铵中的任一种或几种混合物，含量为〇. 3-0. 6份。
4. 如权利要求1所述的厌氧增菌培养基，其特征在于，包含蛋白胨25份，酵母浸粉2 份，脑心浸液肉汤1份，葡萄糖2份，硫代乙醇酸钠3份，氯化血红素0. 005份，维生素&为 0. 0005份，抗凝剂0. 35份，厌氧指示剂0. 0001份，蒸馏水1000份。
5. 如权利要求4所述的厌氧增菌培养基，其特征在于，还包含含量为0. 1份的L-半胱 氨酸或维生素 C。
6. 如权利要求4或5所述的厌氧增菌培养基，其特征在于，还包含碳酸氢钠、碳酸氢钾、 碳酸氢钙和碳酸氢铵中的任一种或几种混合物，含量为〇. 4份。
7. 如权利要求1或4所述的厌氧增菌培养基，其特征在于，所述蛋白胨为多价胨。
8. 如权利要求1或4所述的厌氧增菌培养基，其特征在于，所述蛋白胨为胰蛋白胨和/ 或大豆蛋白胨。
9. 如权利要求1或4所述的厌氧增菌培养基，其特征在于，所述抗凝剂为聚茴香脑磺酸 钠、对氨基苯甲酸、硫酸镁、吸附抗生素复合树脂中的任一种或几种混合。
10. -种如权利要求1所述的厌氧增菌培养基的配置方法，包括以下步骤： (1) 准备原料：蛋白胨20-28份，酵母浸粉1. 5-4. 0份，脑心浸液肉汤0. 5-1. 5份，葡萄 糖0. 6-2. 5份，硫代乙醇酸钠2. 5-4. 0份，氯化血红素0. 003-0. 008份，抗凝剂0. 3-0. 5份， 厌氧指示剂〇? 00005- 0? 0003份； (2) 将步骤（1)中的原料放入烧杯中，加入蒸馏水900-1100份，搅拌混均，调节pH值 6. 8-7. 0 ;然后加热煮沸，通入氮气至培养基冷却； (3) 将步骤（2)中冷却后的培养基转移到厌氧瓶或厌氧管中，转移完成后，还应继续通 入氮气10-20秒；然后封闭厌氧瓶或厌氧管； (4) 将步骤（3)中装有培养基的厌氧瓶或厌氧管进行灭菌处理； (5) 在步骤（4)中灭菌后的培养基中加入0. 0003-0. 0008份的维生素 K1。
【文档编号】C12Q1/04GK104419744SQ201310368942
【公开日】2015年3月18日 申请日期:2013年8月22日 优先权日:2013年8月22日
【发明者】张敏, 王娜, 杨伟伟 申请人:山东鑫科生物科技股份有限公司