用于培养牛樟芝的方法以及培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于培养牛樟芝（Antrodia cinnamomea)的方法，它包括：将一 牛棒芝菌株培养于一添加有一牛棒的蒸馈产物（distillation products of Cinnamomum kanehirae Hayata)的基础培养基（basal medium)中，其中该牛樟的蒸馈产物是选自于 由下列所构成的群组：一萃取自牛樟叶的精油（essential oil)、一萃取自牛樟叶的纯露 (hydrolate)、一萃取自牛樟枝条的精油、一萃取自牛樟枝条的纯露，以及它们的组合。本发 明也涉及一种用于培养牛樟芝的培养基，它包含有一如上所述的基础培养基以及一如上所 述的牛樟的蒸馏产物。
【背景技术】
[0002] 牛樟芝（Antrodia cinnamomea)(中文别名为樟芝、樟燕、樟内燕以及牛樟 ? ;同种异名为 Antrodia camphorata、Ganoderma comphoratum 以及 Taiwanofungus camphoratus)是属于多孔菌目（Polyporales)、多孔菌科（Polyporaceae)、薄孔菌属 (Antrodia)的台湾特有真菌，它主要生长在台湾高海拔的牛樟（Cinnamomum kanehirai Hayata)的树干上。
[0003] 在台湾民俗疗法中，牛樟芝具有化瘀活血、解毒消肿以及镇静止痛的功效，并且常 被用来治疗腹泻、呕吐、食物中毒、糖尿病、肝炎、肝硬化以及肝癌等。此外，有研究报告指 出，牛樟芝具有抗氧化（antioxidant)、抗肿瘤（antitumor)、抗细菌（antibacterial)、抗 发炎（anti-inflammation)以及增加免疫力等生物活性，因而在生物医药产业上具有极大 的应用价值。
[0004] 为了大量生成牛樟芝，许多人工培养方法已被用来培养牛樟芝，其中主要包括下 列4种方法：椴木培养法、太空包培养法、液态培养法以及（皿式）固态培养法。然而，这些 人工培养方法存在使用上的缺点，例如，椴木培养法必须砍伐天然的牛樟来作为培养基质， 因而无法被广泛地应用。此外，这些人工培养方法所培养出的牛樟芝在生长速度以及产量 上仍受到限制，无法满足市场上的广大需求。因此，发展出新的牛樟芝培养技术以提高牛樟 芝的产量即成一个极为重要的研发课题。
[0005] 已有文献指出，在用于培养牛樟芝的一基础培养基（basal medium)中添加额外的 添加物（additive)或改变该基础培养基的配方时会影响牛樟芝的生长。例如，在台湾大学 森林学研究所的吴升原所著硕士论文[名称："牛樟抽出物对樟芝生长影响之探讨（Effect of the extracts from Cinnamomum kanehirai on the mycelial growth of Antrodia camphorata)"]中，吴升原将牛樟木材以70%乙醇（70% ethanol)进行萃取而得到一乙醇 粗萃取物，接着对该乙醇粗萃取物依序以正己烧（n-hexane)、乙酸乙酯（ethyl acetate)、 丁醇（butanol)以及水进行萃取而分别得到一正己烷萃取物、一乙酸乙酯萃取物、一丁醇 萃取物以及一水萃取物，继而将所得到的5种萃取物分别添加至一麦芽萃取物琼脂（MEA) 培养基[malt extract agar(MEA)medium]中，并且观察牛樟芝菌丝体在含有不同浓度（包 括100ppm、500ppm以及lOOOppm)的萃取物的MEA培养基上的生长情形。而实验结果发现： 牛樟木材的乙醇粗萃取物、正己烷萃取物以及乙酸乙酯萃取物在一为500ppm的浓度下皆 可以促进牛樟芝的生长，而牛樟木材的丁醇萃取物与水萃取物没有被发现具有这方面的功 效。
[0006] 于该篇硕士论文中，吴升原进一步将牛樟木材的精油中所含有的10种化 学成分[包括：丁香酸（eugenol)、香叶草醇（geraniol)、黄樟油精（safrole)、香 茅醇（citronellol)、α-廠品醇（a-terpineol)、4_廠品醇（4-terpinenol)、沉 香醇（Linalool)、d_ 棒脑（d-camphor)、p-异丙基甲苯（p-cymene)以及 1，8_ 按謎 (1,8-cineole)]分别添加至一 MEA培养基中，并且观察牛樟芝菌丝体在含有不同浓度（包 括50ppm、100ppm以及500ppm)的化学成份的MEA培养基上的生长情形。而实验结果发现： 黄樟油精、α -廠品醇以及d-樟脑在一为lOOppm以及500ppm的浓度下皆可以促进牛樟芝 的生长，而4-萜品醇、p-异丙基甲苯以及1，8-桉醚在3种浓度下皆无法促进牛樟芝的生 长。至于丁香酚、香叶草醇、香茅醇以及沉香醇在低浓度（也就是说50ppm以及lOOppm)下 可以促进牛樟芝的生长，但是在高浓度（也就是说500ppm)下反而会抑制牛樟芝的生长。
[0007] 在台湾大学森林学研究所的高郁婷所著硕士论文[名称：牛樟抽出物及精油 对棒芝菌丝及子实体生长之影响（Effect of the extracts and essential oil from Cinnamomum kanehirai on the growth of mycelium and fruiting body of Antrodia camphorata)]中，高郁婦为了评估不同樟属植物的精油对于牛樟芝生长的影响，将牛樟木 材的精油、樟树木材的精油、两种品系（也就是说桂皮醛型与枷罗木醇型）的土肉桂叶的 精油以及山肉桂叶的精油（上述5种精油都是通过水蒸馏法而被获得）分别添加至一 MEA 培养基中并观察牛樟芝菌丝体在含有不同浓度（包括100ppm、500ppm以及lOOOppm)的精 油的MEA培养基上的生长情形。而实验结果发现：牛樟木材的精油、樟树木材的精油、枷 罗木醇型土肉桂叶的精油以及山肉桂叶的精油在上述3种浓度下皆可以促进牛樟芝的生 长，其中牛樟木材的精油在一为100ppm、500ppm以及lOOOppm的浓度下的生长指数分别为 114. 2 %、148. 9 %以及160. 3 %，至于同为樟属植物的桂皮醛型土肉桂叶的精油在上述3种 浓度下皆会完全地抑制牛樟芝的生长。
[0008] 在嘉义大学森林暨自然资源研究所的李名训所著硕士论文[名称：樟芝栽培之 研究（Study on the culture of Antrodia cinnamomea)]中，李名训主要是探讨不同的 基础培养基配方、环境因子以及刺激物质对于牛樟芝菌丝体固态培养的影响。特别地，在 刺激物质方面，李名训将牛樟木材精油（它是通过对牛樟实木进行水蒸馏而被获得）以及 市售的本棒精油[Cinnamomum camphora(eucamphor) essential oil]与市售的芳棒精油 [Cinnamomum camphora (linaloola) essential oil]分别添加至一 MEA 培养基中并且观察 牛樟芝菌丝体在含有不同浓度（也就是说，lOOOppm至6000ppm)的精油的MEA培养基上 的生长情形。实验结果发现：牛樟木材精油、市售的本樟精油以及市售的芳樟精油在上述 浓度下皆可以促进牛樟芝的生长，其中牛樟木材精油在一为3000ppm的浓度下可达致最高 的生长指数为126%，市售的本樟精油在一为4000ppm的浓度下可达致最高的生长指数为 133%，以及市售的芳樟精油在一为lOOOppm的浓度下可达致最高的生长指数147%。
[0009] 虽然已存在有上述文献报导，本技艺中仍然存在有一需要去发展出可以低成本、 快速并且大量地培育牛樟芝的方法以供产业界所需。
【发明内容】
[0010] 于是，在第一个方面，本发明提供一种用于培养牛樟芝的方法，它包括：将一牛樟 芝菌株培养于一添加有一牛樟的蒸馏产物的基础培养基中，其中该牛樟的蒸馏产物是选自 于由下列所构成的群组：一萃取自牛樟叶的精油、一萃取自牛樟叶的纯露、一萃取自牛樟枝 条的精油、一萃取自牛樟枝条的纯露，以及它们的组合。
[0011] 在第二个方面，本发明提供一种用于培养牛樟芝的培养基，它包含有一如上所述 的基础培养基以及一如上所述的牛樟的蒸馏产物。
【附图说明】
[0012] 图1显示将牛樟芝菌株的接种源分别接种于含有不同浓度的牛樟叶的精油的MEA 培养基中并进行培育历时5周后所测得的生长指数，其中对照组表示未添加牛樟叶的精油 的MEA培养基所培育出的牛樟芝菌株；以及实验组L0-1至L0-21分别表示被添加有一浓度 范围落在100至lOOOOppm的牛樟叶的精油的MEA培养基所培育出的牛樟芝菌株；
[0013] 图2显示将牛樟芝菌株的接种源分别接种于含有不同浓度的牛樟叶的纯露的MEA 培养基中并进行培育历时5周后所测得的生长指数，其中对照组表示未添加牛樟叶的纯露 的MEA培养基所培育出的牛樟芝菌株；以及实验组LL-1至LL-28分别表示被添加有一浓度 范围落在1000至180000ppm的牛樟叶的纯露的MEA培养基所培育出的牛樟芝菌株；
[0014] 图3显示将牛樟芝菌株的接种源分别接种于含有不同浓度的牛樟枝条的精油的 MEA培养基中并进行培育历时5周后所测得的生长指数，其中对照组表示未添加牛樟枝条 的精油的MEA培养基所培育出的牛樟芝菌株；以及实验组W0-1至W0-21分别表示被添加有 一浓度范围落在100至lOOOOppm的牛樟枝条的精油的MEA培养基所培育出的牛樟芝菌株； 以及
[0015] 图4显示将牛樟芝菌株的接种源分别接种于含有不同浓度的牛樟枝条的纯露的 MEA培养基中并进行培育历时5周后所测得的生长指数，其中对照组表示未添加牛樟枝条 的纯露的MEA培养基所培育出的牛樟芝菌株；以及实验组WL-1至WL-24分别表示被添加 有一浓度范围落在1000至46000ppm的牛樟枝条的纯露的MEA培养基所培育出的牛樟芝菌 株。
【具体实施方式】
[0016] 为了开发出可以低成本、快速并且大量地培养牛樟芝的新颖方法，申请 人尝试将在园艺修枝的过程中所遗留的牛樟叶与牛樟枝条分别拿来进行水蒸馏 (hydrodistillation)，而由此所获得的4种牛樟的蒸馈产物[包括：牛樟叶的精油、牛樟叶 的纯露、牛樟枝条的精油以及牛樟枝条的纯露]以及它们的组合，接着分别被拿来进行牛 樟芝的固态培养试验以及液态培养试验。实验结果发现：依据本发明所得到的4种牛樟的 蒸馏产物以及它们的组合在牛樟芝的固态培养以及液态培养上皆能够有效地促进牛樟芝 菌株的生长。
[0017] 因此，本发明提供一种用于培养牛樟芝的方法，它包括：将一牛樟芝菌株培养于一 添加有一牛樟的蒸馏产物的基础培养基中，其中该牛樟的蒸馏产物是选自于由下列所构成 的群组：一萃取自牛樟叶的精油、一萃取自牛樟叶的纯露、一萃取自牛樟枝条的精油、一萃 取自牛樟枝条的纯露，以及它们的组合。
[0018] 如本文中所用的，术语"培育（cultivation) "以及"培养（culturing) "可被交换 地使用。
[0019] 如本文中所用的，术语"牛棒枝条（branch wood of Cinnamomum kanehirae Hayata)"意指由牛樟的主干（trunk)所衍伸出来的分枝。依据本发明，所述的牛樟叶或牛 樟枝条可通过自然脱落或者园艺修枝的方式而被获得。在本发明的一个较佳具体例中，所 述的牛樟叶或牛樟枝条是通过园艺修枝的方式而被获得。
[0020] 如本文中所用的，术语"精油（essential oil)"与"挥发油（volatile oil)"以 及"香精油（ethereal oil)"可被交换地使用。
[0021] 如本文中所用的，术语"纯露（hydrolate) "与"花水（hydrosol) "、"花露（floral water)"以及"精露（essential water)"可被交换地使用。
[0022] 依据本发明，该萃取自牛樟叶的精油与纯露以及该萃取自牛樟枝条的精油与纯露 是通过对牛樟叶或牛樟枝条进行一萃取处理（extraction treatment)而被制得。适用 于本发明的萃取处理可以是，但不限于：水蒸馈（hydrodistillation)、蒸汽蒸馈（steam distillation)、水蒸汽蒸馈（water and steam distillation),以及它们的组合。
[0023] 有关这些萃取处理的操作程序与参数条件等是落在熟习此项技术的人士的专 业素养与例行技术范畴内。在此方面，可以参照，例如，吴升原（2002)(同上述）、高郁婷 (2004)(同上述）以及李名训（2006)(同上述）。
[0024] 在本发明的一