发菜培养基及其制备方法、发菜培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种发菜培养基，以及该培养基的制备方法，同时还涉及一种发菜培养方法，属于微藻培养技术领域。
【背景技术】
[0002]发菜，又名地毛、头发菜，学名发状念珠藻，是一种陆生丝状蓝细菌，因其色黑而细长，似人的头发而得名。在生物分类学上属于蓝藻门，蓝藻纲，断殖藻目，念珠藻科，念珠藻属。发菜多生长在荒漠和土壤贫瘠地区，在我国西北干旱、半干旱地区均有分布。发菜口味鲜美，具有极高的营养价值，研究证明发菜含有丰富的蛋白质和人体必需的八种氨基酸，以及各种维生素、矿质元素等。发菜同时也是一味极好的药材，具有平肝潜阳、清肠止痢的功效，可用于清热解毒、化痰止咳等。
[0003]多糖是生物体主要的天然高分子化合物，广泛存在于高等植物、动物细胞膜和微生物细胞壁中，在生命活动过程中有重要作用。藻类多糖具有抗病毒活性、抗凝血活性、抗肿瘤活性等。尤其发菜多糖能够阻断病毒对寄主细胞的吸附，阻止病毒在寄主细胞内复制，对流感病毒、人巨细胞病毒、单纯疱疹病毒HSV-1等多种包膜病毒具有较强的抗病毒活性。
[0004]微波是一种低电磁辐射，具有较强的生物效应。微波作用下生物体随之产生各种生理生化反应，能促进次生代谢物质的生成。目前，微波辐照已广泛应用于医学、化学及食品领域，在提高生物有效代谢产物分泌方面具有广阔的应用前景。但是，微波辐照对发菜培养及发菜胞外多糖分泌的影响还鲜有研究。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种营养丰富且能较好促进发菜细胞生长及增加胞外多糖分泌量的发菜培养基。
[0006]同时，本发明还提供一种发菜培养基的制备方法，该方法工艺简单，操作简便。
[0007]最后，本发明再提供一种发菜培养方法，该方法便于控制生理环境，通过微波辐照促进发菜代谢产物分泌，提高发菜胞外多糖分泌量。
[0008]为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是:
[0009]发菜培养基，每100mL培养基由以下组分组成=NaNO30.7?0.8g，CaCl2.2H2025 ?30mg，MgSO4.7Η20 70 ?80mg，Na2S13.9Η20 55 ?65mg，Κ2ΗΡ0435 ?45mg，Η3Β04280 ?290ng，ZnSO4.7Η20 15 ?25ng，NaMoO4.2Η20 35 ?45ng，EDTA *2Na 90 ?110ng，FeS04.7Η20470 ?490ng，MnCl.4H20 170 ?190ng，CuSO4.5H20 5 ?10ng，CoCl20.5 ?1.5ng，柠檬酸55?65ng，鹿糖10?15mg，维生素BI 90?130mg，维生素B6 90?130mg，余量为水。
[0010]优选的，每100mL发菜培养基由以下组分组成=NaNO30.75g，CaCl2.2Η20 27.2mg，MgSO4.7H20 75mg，Na2S13.9H20 58mg，K2HP0440mg，H3B04286ng，ZnSO4.7H20 20ng，NaMoO4.2H20 40ng，EDTA.2Na lOOng，FeSO4.7H20 480ng，MnCl.4H20 180ng，CuSO4.5H208ng，CoCl2Ing,梓檬酸60ng，鹿糖12mg，维生素BI 10mg,维生素B6 10mg,余量为水。
[0011]各组分作用及组分间协同作用简述如下:
[0012]NaNO3的作用主要是为发菜细胞生长提供充足的N源，能够与K2HPO4协同增强发菜的光合作用和呼吸作用，蔗糖提供碳源，维持培养液低渗环境，维生素B1、B6促进发菜细胞分裂，促进发菜细胞生长。
[0013]上述培养基的制备方法，步骤如下:
[0014]I)按照配方中组分配比称取CaCl2.2H20、MgSO4.7H20、蔗糖、维生素BI和维生素B6，溶于水中得母液A备用；
[0015]2)按照配方中组分配比称取 H3BO4' ZnSO4.7H20、NaMoO4.2H20、EDTA.2Na、FeSO4.7H20、MnCl.4H20、CuSO4.5H20、CoCl2和柠檬酸，溶于水中得母液 B 备用；
[0016]3)按照配方中组分配比称取NaN03、Na2S13.9H20和K2HPO4,溶于水中得母液C备用；
[0017]4)按照配方量将母液A、母液B混合得混合液，混合液与母液C单独灭菌，再按照配方量混合、定容，即得。
[0018]发菜培养方法，步骤如下:将发菜细胞接种于上述培养基中培养至对数期，采用微波辐照，即可。
[0019]优选的，在温度22?28 °C下对发菜细胞液进行微波辐照，微波功率100?140W，频率2400?2500MHz，辐照时间60?80s，每10?14h辐照一次，共照射18?22次。
[0020]本发明的有益效果:
[0021]本发明中发菜培养基易于配制，颜色清浅，便于观察发菜菌落形态，能够促进发菜细胞生长、繁殖，促进发菜增加胞外多糖分泌量。其中，NaNOjg为发菜细胞生长提供充足的N源，与1(2即04协同增强发菜的光合作用和呼吸作用，蔗糖提供碳源，维持培养液低渗环境，维生素B1、B6促进发菜细胞分裂，促进发菜细胞生长。
[0022]本发明采用微波辐照技术培养发菜，方法简单、操作简便，获得的发菜细胞液中含有丰富的胞外多糖。由于胞外多糖是发菜细胞通过自身对外界环境的应激反应得到的天然代谢物质，因而保有天然物质的生物活性，可用作保健品中功能性添加剂。
[0023]本发明采用微波辐照促进发菜细胞增加胞外多糖分泌量，辐射强度低、时间短，不会对发菜细胞产生不利影响，在保证细胞正常生长的同时还能促进胞外多糖分泌量，有助于发菜细胞的持续生长和利用，对降低细胞死亡率，提高胞外多糖产量具有显著的促进作用。
【附图说明】
[0024]图1为试验例中微波辐照时间对发菜细胞液中胞外多糖含量的影响。
【具体实施方式】
[0025]下述实施例仅对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
[0026]实施例1
[0027]本实施例中的发菜培养基，每100mL培养基由以下组分组成=NaNO30.7g，CaCl2.2H20 30mg，MgSO4.7H20 70mg，Na2S13.9H20 65mg，K2HP0435mg，H3B04290ng，ZnSO4.7H20 15ng，NaMoO4.2H20 45ng，EDTA.2Na 90ng，FeSO4.7H20 490ng，MnCl.4H20170ng，CuSO4.5H20 10ng，CoCl20.5ng，梓檬酸 65ng，鹿糖 10mg，维生素 BI 130mg，维生素 B690mg，余量为水。
[0028]发菜培养基的制备方法，步骤如下:
[0029]I)准确称取 CaCl2.2H20 3g，MgSO4.7H20 7g，蔗糖 lg,维生素 BI 13g，维生素 B69g，用蒸馏水溶解后定容至lOOOmL，配制成母液A，常温保存备用；
[0030]2)准确称取 H3B04290mg，ZnSO4.7H20 15mg，NaMoO4.2H20 45mg，EDTA.2Na 90mg，FeSO4.7H20 490mg，MnCl.4H20 170mg，CuSO4.5H20 10mg，CoCl20.5mg，柠檬酸 65mg，用蒸馏水溶解后定容至lOOOmL，配制成母液B，4°C冰箱冷藏备用；
[0031]3)准确称取Na2S13.9Η20 6.5g，用蒸馏水溶解后定容至lOOOmL，配制成Si液，常温保存备用；
[0032]4)准确称取K2HP043.5g，用蒸馏水溶解后定容至lOOOmL，配制成P液，常温保存备用；
[0033]5)移液管准确吸取A液1mL和B液ImL混合，补足蒸馏水至总体积为450mL，121°C下高温高压灭菌30min，得混合液A备用；
[0034]6)移液管准确吸取Si液1mL和P液1mL混合，加入NaNO3并补足蒸馏水至总体积500mL，使NaNOj^浓度为1.4g/L，121°C下高温高压灭菌30min，得混合液B备用；
[0035]7)将混合液A、混合液B混合，用灭菌蒸馏水定容至lOOOmL，即得。
[0036]注:为防止高温条件下培养基中各组分发生反应产生沉淀，步骤5)、6)单独灭菌。
[0037]发菜培养方法，步骤如下:
[0038]I)采集发菜，分离、纯化并活化，接种于上述发菜培养基中，于25 °C恒温、80 ymol/mVs光照强度条件下培养至对数期，得发菜细胞液；
[0039]2)打开超净工作台的紫外灯，预热1min ；
[0040]3)分别取1mL发菜细胞液，分装于直径90mm的玻璃培养皿中，用保鲜膜封口 ；
[0041]4)在25°C恒温条件下对发菜细胞液进行微波辐照，微波功率100W，频率2400MHz，辐照时间60s，每12h辐照一次，共照射22次，即可。
[0042]实施例2
[0043]本实施例中的发菜培养基，每100mL培养基由以下组分组成=NaNO30.8g，CaCl2.2H20 25mg，MgSO4.7H20 80mg，Na2S13.9H20 55mg，K2HP0445mg，H3B04280ng，ZnSO4.7H20 25ng，NaMoO4.2H20 35ng，EDTA.2Na llOng，FeSO4.7H20 470ng，MnCl.4H20190ng，CuSO4.5H20 5ng，CoCl2L 5ng，梓檬酸 55ng，鹿糖 15mg，维生素 BI 90mg，维生素 B6130mg，余量为水。
[0044]发菜培养基的制备方法，步骤如下:
[0045]I)准确称取 CaCl2.2H20 2.5g，MgSO4.7H20 8g，蔗糖 1.5g，维生素 BI 9g，维生素B6 13g，用蒸馏水溶解后定容至lOOOmL，配制成母液A，常温保存备用；
[0046]2)准确称取 H3B04280mg，ZnSO4.7H20 25mg，NaMoO4.2H20 35mg，EDTA.2Na 110mg，FeSO4.7H20 470mg，