MnCl.4H20 190mg，CuSO4.5H20 5mg，CoCl2L 5mg，柠檬酸 55mg，用蒸馏水溶解后定容至lOOOmL，配制成母液B，4°C冰箱冷藏备用；
[0047]3)准确称取Na2S13.9Η20 5.5g，用蒸馏水溶解后定容至lOOOmL，配制成Si液，常温保存备用；
[0048]4)准确称取K2HP044.5g，用蒸馏水溶解后定容至lOOOmL，配制成P液，常温保存备用；
[0049]5)移液管准确吸取A液1mL和B液ImL混合，补足蒸馏水至总体积为450mL，121°C下高温高压灭菌30min，得混合液A备用；
[0050]6)移液管准确吸取Si液1mL和P液1mL混合，加入NaNO3并补足蒸馏水至总体积500mL，使NaNOj^浓度为1.6g/L，121°C下高温高压灭菌30min，得混合液B备用；
[0051]7)将混合液A、混合液B混合，用灭菌蒸馏水定容至lOOOmL，即得。
[0052]注:为防止高温条件下培养基中各组分发生反应产生沉淀，步骤5)、6)单独灭菌。
[0053]发菜培养方法，步骤如下:
[0054]I)采集发菜，分离、纯化并活化，接种于上述发菜培养基中，于25 °C恒温、80 ymol/mVs光照强度条件下培养至对数期，得发菜细胞液；
[0055]2)打开超净工作台的紫外灯，预热1min ；
[0056]3)分别取1mL发菜细胞液，分装于直径90mm的玻璃培养皿中，用保鲜膜封口 ；
[0057]4)在25°C恒温条件下对发菜细胞液进行微波辐照，微波功率120W，频率2500MHz，辐照时间70s，每12h辐照一次，共照射18次，即可。
[0058]实施例3
[0059]本实施例中的发菜培养基，每100mL培养基由以下组分组成=NaNO30.75g，CaCl2.2H20 27.2mg，MgSO4.7H20 75mg，Na2S13.9H20 58mg，K2HP0440mg，H3B04286ng，ZnSO4.7H20 20ng，NaMoO4.2H20 40ng，EDTA.2Na 100ng，FeSO4.7H20 480ng，MnCl.4H20180ng，CuSO4.5H20 8ng，CoCl2Ing,梓檬酸 60ng，鹿糖 12mg，维生素 BI 100mg，维生素 B6100mg，余量为水。
[0060]发菜培养基的制备方法，步骤如下:
[0061]I)准确称取 CaCl2.2H20 2.72g，MgSO4.7H20 7.5g，蔗糖 1.2g，维生素 BI 10g，维生素B6 10g，用蒸馈水溶解后定容至lOOOmL，配制成母液A，常温保存备用；
[0062]2)准确称取 H3B04286mg，ZnSO4.7H20 20mg，NaMoO4.2H20 40mg，EDTA.2Na 100mg，FeSO4.7H20 480mg，MnCl.4H20 180mg，CuSO4.5H20 8mg，CoCl2Img,柠檬酸 60mg，用蒸馏水溶解后定容至lOOOmL，配制成母液B，4°C冰箱冷藏备用；
[0063]3)准确称取Na2S13.9Η20 5.8g，用蒸馏水溶解后定容至lOOOmL，配制成Si液，常温保存备用；
[0064]4)准确称取K2HP044g，用蒸馏水溶解后定容至lOOOmL，配制成P液，常温保存备用；
[0065]5)移液管准确吸取A液1mL和B液ImL混合，补足蒸馏水至总体积为450mL，121°C下高温高压灭菌30min，得混合液A备用；
[0066]6)移液管准确吸取Si液1mL和P液1mL混合，加入NaNO3并补足蒸馏水至总体积500mL，使他勵3的浓度为1.5g/L，121°C下高温高压灭菌30min，得混合液B备用；
[0067]7)将混合液A、混合液B混合，用灭菌蒸馏水定容至lOOOmL，即得。
[0068]注:为防止高温条件下培养基中各组分发生反应产生沉淀，步骤5)、6)单独灭菌。
[0069]发菜培养方法，步骤如下:
[0070]I)采集发菜，分离、纯化并活化，接种于上述发菜培养基中，于25 °C恒温、80 ymol/mVs光照强度条件下培养至对数期，得发菜细胞液；
[0071]2)打开超净工作台的紫外灯，预热1min ；
[0072]3)分别取1mL发菜细胞液，分装于直径90mm的玻璃培养皿中，用保鲜膜封口 ；
[0073]4)在25°C恒温条件下对发菜细胞液进行微波辐照，微波功率140W，频率2455MHz，辐照时间80s，每12h辐照一次，共照射20次，即可。
[0074]试验例
[0075]参照实施例3中发菜培养方法，分别检测不同微波辐照时间下发菜细胞液中胞外多糖的含量。
[0076]试验方法:
[0077]I)葡萄糖溶液标准曲线的获取:取75mg葡萄糖，放于烘箱中105°C反复烘干至恒重，用蒸馏水定容至500mL，得到150mg/mL葡萄糖标准溶液，精确吸取0.1,0.2,0.3,0.4、0.5,0.6,0.7,0.8mL标准溶液，各以蒸馏水补充至2mL，另取2mL蒸馏水作为空白对照。分别加6%苯酚ImL和浓硫酸5mL，摇匀后沸水浴lOmin，冷却至室温。用紫外可见分光光度计于490nm波长下测定其吸光度值，以标准葡萄糖溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标制得标准曲线:y = 0.0081x-0.0026，R2= 0.9994。
[0078]2)取经微波福射处理(20s、40s、60s、80s、100s)的发菜细胞液5mL，4000rpm离心lOmin，取上清液2mL，加入ImL 6%苯酸溶液和5mL浓硫酸，摇勾后沸水浴lOmin，冷却至室温，在490nm处测定其吸光度，对照标准曲线计算出胞外多糖含量，试验结果见图1。
[0079]上述处理中苯酚为重蒸苯酚，6 %苯酚溶液由80 %苯酚溶液配制，现配现用。
[0080]从图1不难看出，随着微波照射时间的增长(至100s)，发菜细胞液中胞外多糖含量呈现增长趋势。结果表明本发明中发菜培养方法能够促进发菜细胞分泌多糖，提高发菜多糖产量。
【主权项】
1.发菜培养基，其特征在于??每100mL培养基由以下组分组成=NaNO3 0.7?0.8g，CaCl2.2H20 25 ?30mg，MgSO4.7H20 70 ?80mg，Na2S13.9H20 55 ?65mg，K2HPO4 35 ?45mg, H3BO4 280 ?290ng，ZnSO4.7Η20 15 ?25ng，NaMoO4.2Η20 35 ?45ng，EDTA *2Na 90 ?llOng，FeSO4.7H20 470 ?490ng，MnCl.4H20 170 ?190ng，CuSO4.5H20 5 ?10ng，CoCl20.5?1.5ng，梓樣酸55?65ng，鹿糖10?15mg，维生素B190?130mg，维生素B690?130mg，余量为水。2.根据权利要求1所述的发菜培养基，其特征在于??每100mL发菜培养基由以下组分组成:NaNO3 0.75g, CaCl2.2H20 27.2mg，MgSO4.7H20 75mg，Na2S13.9H20 58mg，K2HPO440mg, H3BO4 286ng，ZnSO4.7H20 20ng，NaMoO4.2HZ0 40ng, EDTA.2Na lOOng，FeSO4.7H20480ng，MnCl.4H20 180ng，CuSO4.5H20 8ng，CoCl2 lng，梓檬酸 60ng，鹿糖 12mg，维生素8110011^，维生素8610011^，余量为水。3.如权利要求1或2所述的发菜培养基的制备方法，其特征在于:步骤如下: 1)按照配方中组分配比称取CaCl2.2H20、MgSO4.7H20、蔗糖、维生素BI和维生素B6，溶于水中得母液A备用；2)按照配方中组分配比称取H3B04、ZnSO4.7H20、NaMoO4.2H20、EDTA.2Na、FeSO4.7H20、MnCl.4H20、CuSO4.5H20、CoCl2和柠檬酸，溶于水中得母液B备用； 3)按照配方中组分配比称取NaN03、Na2S13.9H20和K2HPO4,溶于水中得母液C备用； 4)按照配方量将母液A、母液B混合得混合液，混合液与母液C分别单独灭菌，再按照配方量混合、定容，即得。4.采用如权利要求1或2所述发菜培养基培养发菜的方法，其特征在于:步骤如下:将发菜细胞接种于发菜培养基中，培养至对数期，再采用微波辐照，即可。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于:在温度22?28°C下对发菜细胞液进行微波辐照，微波功率100?140W，频率2400?2500MHz，辐照时间60?80s，每10?14h辐照一次，共照射18?22次。
【专利摘要】本发明公开了一种发菜培养基及其制备方法、发菜培养方法，属于微藻培养技术领域。每1000mL培养基由以下组分组成：NaNO3？0.7～0.8g，CaCl2·2H2O？25～30mg，MgSO4·7H2O？70～80mg，Na2SiO3·9H2O？55～65mg，K2HPO4？35～45mg，H3BO4？280～290ng，ZnSO4·7H2O？15～25ng，NaMoO4·2H2O？35～45ng，EDTA·2Na？90～110ng，FeSO4·7H2O？470～490ng，MnCl·4H2O？170～190ng，CuSO4·5H2O？5～10ng，CoCl2？0.5～1.5ng，柠檬酸55～65ng，蔗糖10～15mg，维生素B1？90～130mg，维生素B6？90～130mg，余量为水。该培养基能够促进发菜细胞生长、繁殖，促进发菜增加胞外多糖分泌量。同时，本发明采用微波辐照技术培养发菜，对协同提高胞外多糖产量具有显著的促进作用。
【IPC分类】C12N1/20
【公开号】CN105199984
【申请号】CN201510615183
【发明人】郭金英, 李彤辉, 陈秀金, 吴影, 崔国庭, 王萍, 任国艳, 罗登林, 李智利, 李松彪
【申请人】河南科技大学
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年9月24日