一种基于ttc染色法的高活力酵母细胞定量筛选方法
【专利摘要】本发明公开了一种基于TTC染色法的高活力酵母细胞定量筛选方法，将待检测酵母细胞菌液涂布于平板，培养待其长出单菌落；然后接种于96孔细胞培养板各孔培养液中，培养至测定得到菌体OD值在1-3之间，离心弃上清；在96孔细胞培养板各孔中加入TTF萃取剂，震荡10-15S后离心；将震荡离心后的上清液吸取到96孔酶标板中，利用酶标仪在486nm波长下测定TTF吸收值，根据TTF标准曲线及测定的细胞OD值，计算每个孔中TTF含量，以此确定细胞活力大小。本方法筛选结果定量可靠地直接反应细胞活力，不仅能明显降低筛选时间，而且能降低操作过程中的视觉判断产生的人为错误。
【专利说明】一种基于TTC染色法的高活力酵母细胞定量筛选方法
【技术领域】
[0001]本发明适用于生物工程技术及医学、药学领域，具体涉及一种基于TTC染色法的高活力酵母定量筛选方法。
【背景技术】
[0002]2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)是一种显色剂，能够对多种细胞(酵母，细菌，植物细胞等)发生呈色反应，TTC本身为无色，当其与正常细胞中的脱氢酶反应而呈红色，其原理是TTC在细胞呼吸中替代O2接受H+，TTC被还原为红色的TTF (三苯基甲月替)而呈现红色。反应方程式如下:
【权利要求】
1.一种基于TTC染色法的高活力酵母细胞定量筛选方法，其特征在于包括以下步骤:1)将待检测酵母细胞菌液涂布于平板，培养待其长出单菌落；2)将步骤I)中培养的单菌落接种于96孔细胞培养板各孔培养液中，培养至测定得到菌体OD值在1-3之间，离心弃上清；然后在96孔细胞培养板各孔中加入TTF萃取剂，震荡 10-15S后离心；3)将步骤2)中震荡离心后的上清液吸取到96孔酶标板中，利用酶标仪在486nm波长下测定TTF吸收值，根据TTF标准曲线及步骤2)中测定的细胞OD值，计算每个孔中TTF含量，以此确定细胞活力大小。
2.根据权利要求1所述的基于TTC染色法的高活力酵母细胞定量筛选方法，其特征在于:步骤2)中培养液中TTC浓度为0.3%-0.5% (ff (g) /V(mL) )，pH为6-8。
3.根据权利要求1所述的基于TTC染色法的高活力酵母细胞定量筛选方法，其特征在于步骤2)中所述TTF萃取剂为二甲基亚砜溶液，浓度范围为85%-100% (V/V)。
4.根据权利要求1所述的基于TTC染色法的高活力酵母细胞定量筛选方法，其特征在于步骤2)中TTF萃取剂与细胞培养液体积比为1:1。
【文档编号】C12Q1/06GK103525896SQ201310447516
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年9月27日 优先权日:2013年9月27日
【发明者】陈怡露, 徐俊, 韦萍, 陈亚利, 雍晓雨, 郑涛, 柏建新, 许琳, 费文斌 申请人:南京工业大学