一种高密度高回收率的乳酸菌生产方法
【专利摘要】本发明涉及生物领域，尤其涉及一种高密度高回收率的乳酸菌生产方法。包含如下步骤，菌种培养；菌种活化；发酵：将活化完的菌种接入如下质量份数的培养基中，葡萄糖3%~8%，酵母粉0.2~1%，蛋白胨0.5%~2%，玉米浆粉0.5%~2%，硫酸镁0.02%~0.6%，硫酸锰0.01%~0.03%，余量为水，发酵条件为37℃，20~30h，pH=6.5~7.0。本发明进一步技术方案在于，所述菌种保存的时候接种量为保存培养基整体质量的2%~5%。所述发酵步骤之后还包含离心的步骤，转速5000~8000r/min的条件下离心，所得菌泥密度可到1012cfu/g以上。采用如上制作方法，发现乳酸菌的密度更高，存活时间更长，回收率更高。
【专利说明】一种高密度高回收率的乳酸菌生产方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物领域，尤其涉及一种高密度高回收率的乳酸菌生产方法。
【背景技术】
[0002]乳酸菌(Lactobacillus)是发酵糖类且主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。是一种存在于人类体内的益生菌。乳酸菌可用于制造酸奶、乳酪、德国酸菜、啤酒、葡萄酒、泡菜、腌溃食品和其他发酵食品。
[0003]但是，现有存在的情况是，乳酸菌的密度往往不够，尤其是在其生产过程中，大量有益的菌种被灭失；造成大量成本浪费，由于低密度，甚至会严重影响该菌种在工业中的应用，甚至大量浪费发酵原料。
【发明内容】
[0004]发明的目的:为了提供一种密度高、存活率高、回收率高的乳酸菌生产方法。
[0005]为了达到如上目的，本发明采取如下技术方案:
一种高密度高回收率的乳酸菌生产方法，其特征在于，包含如下步骤，
菌种培养:用如下质量份数的培养基保存乳酸菌，蛋白胨1%，酵母膏0.5%，牛肉膏1%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二铵0.2%，吐温80 0.1%，硫酸镁0.058%,硫酸锰0.025%,磷酸氢二钾0.2%，余量为水，保存条件35~40°C，2(T30h，pH=6.5~7.0，培养完后讲菌种冷藏；菌种活化:将冷藏的菌种按1%~3%接种量，接于活化培养基中培养，
用如下质量份数的活化培养基加工保存的菌种接入活化乳酸菌，蛋白胨1%，酵母膏
0.5%，牛肉膏1%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二铵0.2%，吐温80 0.1%，硫酸镁0.058%,硫酸锰0.025%,磷酸氢二钾0.2%，余量为水，保存条件35~40°C，30~40h，pH=6.5~7.0 ；
发酵:将活化完的菌种接入如下质量份数的培养基中，葡萄糖3%~8%，酵母粉0.2^1%,蛋白胨0.5%~2%，玉米浆粉0.5%~2%，硫酸镁0.02%~0.6%，硫酸锰0.01%~0.03%,余量为水，发酵条件为 37°C，20~30h，ρΗ=6.5~7.0。
[0006]本发明进一步技术方案在于，所述菌种保存的时候接种量为保存培养基整体质量
的2%~5%。
[0007]本发明进一步技术方案在于，所述发酵步骤中接种的活化完的菌种的质量为发酵
的培养基总质量的2%~5%。
[0008]本发明进一步技术方案在于，所述发酵步骤之后还包含离心的步骤，转速5000~8000r/min的条件下离心,所得菌泥密度可到1012cfu/g以上。
[0009]采用如上技术方案的本发明，相对于现有技术有如下有益效果:采用如上制作工艺和方法，发现乳酸菌的密度更高，存活时间更长，回收率更高。
【具体实施方式】[0010]下面对本发明的实施例进行说明，实施例不构成对本发明的限制:
实施例1:
一种高密度高回收率的乳酸菌生产方法，其特征在于，包含如下步骤，
菌种培养:用如下质量份数的培养基保存乳酸菌，蛋白胨1%，酵母膏0.5%，牛肉膏1%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二铵0.2%，吐温80 0.1%，硫酸镁0.058%,硫酸锰0.025%,磷酸氢二钾0.2%，余量为水，保存条件35°C，20h，pH=6.5，培养完后讲菌种冷藏；所述菌种保存的时候接种量为保存培养基整体质量的2%。
[0011]菌种活化:将冷藏的菌种按1%接种量，接于活化培养基中培养，
用如下质量份数的活化培养基加工保存的菌种接入活化乳酸菌，蛋白胨1%，酵母膏
0.5%，牛肉膏1%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二铵0.2%，吐温80 0.1%，硫酸镁0.058%,硫酸锰0.025%,磷酸氢二钾0.2%，余量为水，保存条件35°C，30h, pH=6.5 ；
发酵:将活化完的菌种接入如下质量份数的培养基中，葡萄糖3%，酵母粉0.2%，蛋白胨0.5%，玉米浆粉0.5%，硫酸镁0.02%,硫酸锰0.01%,余量为水，发酵条件为37°C，20h，pH=6.5。所述发酵步骤
本发明进一步技术方案在于，所述发酵步骤之后还包含离心的步骤，转速5000-8000ι./min的条件下离心，所得菌 泥密度可到1012cfu/g以上。
[0012]实施例2:
一种高密度高回收率的乳酸菌生产方法，其特征在于，包含如下步骤，
菌种培养:用如下质量份数的培养基保存乳酸菌，蛋白胨1%，酵母膏0.5%，牛肉膏1%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二铵0.2%，吐温80 0.1%，硫酸镁0.058%,硫酸锰0.025%,磷酸氢二钾0.2%，余量为水，保存条件40°C，30h，pH=7.0，培养完后讲菌种冷藏，所述菌种保存的时候接种量为保存培养基整体质量的5%。
[0013]菌种活化:将冷藏的菌种按1%~3%接种量，接于活化培养基中培养，
用如下质量份数的活化培养基加工保存的菌种接入活化乳酸菌，蛋白胨1%，酵母膏
0.5%，牛肉膏1%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二铵0.2%，吐温80 0.1%，硫酸镁0.058%,硫酸锰0.025%,磷酸氢二钾0.2%，余量为水，保存条件40°C，40h, pH=7.0 ；
发酵:将活化完的菌种接入如下质量份数的培养基中，葡萄糖8%，酵母粉1%，蛋白胨2%，玉米浆粉2%，硫酸镁0.6%，硫酸锰0.03%,余量为水，发酵条件为37°C，30h，pH7.0，所述发酵步骤中接种的活化完的菌种的质量为发酵的培养基总质量的2%。
[0014]所述发酵步骤之后还包含离心的步骤，转速500(T8000r/min的条件下离心，所得菌泥密度可到1012cfu/g以上。
[0015]现有技术:发酵培养基采用MRS培养基，发酵终点的菌体量较低，并且在离心过程中乳酸菌损失严重，菌体回收率较低。
[0016]本专利:发酵培养基营养丰富，充足的碳源和氮源以及合适的碳氮比，使发酵终点的菌体量有较高的水平。并且由于培养基的特殊结构，菌体在离心时得到了保护，减少了离心损伤，提高了菌体存活率和回收率。
I发酵液菌体量I存活率I密度I回iff
现有技术 3.4 X IO9CfuZmL30.4% 4.1X 10ncfu/g26.8%
例 I 1.03 X IO1VfuZmL87.4% — 1.12X 1012cfu/g85.3%
更涵例 2 11.28 X IO1VfuZmL丨91.4% |?.31X 1012cfu/g丨89.1%[0017] 存活率与存活时间对照表_
【权利要求】
1.一种高密度高回收率的乳酸菌生产方法，其特征在于，包含如下步骤， 菌种培养:用如下质量份数的培养基保存乳酸菌，蛋白胨1%，酵母膏0.5%，牛肉膏1%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二铵0.2%，吐温80 0.1%，硫酸镁0.058%,硫酸锰0.025%,磷酸氢二钾0.2%，余量为水，保存条件35~40°C，2(T30h，pH=6.5~7.0，培养完后讲菌种冷藏； 菌种活化:将冷藏的菌种按1%~3%接种量，接于活化培养基中培养， 用如下质量份数的活化培养基加工保存的菌种接入活化乳酸菌，蛋白胨1%，酵母膏0.5%，牛肉膏1%，葡萄糖2%，乙酸钠0.5%，柠檬酸二铵0.2%，吐温80 0.1%，硫酸镁0.058%,硫酸锰0.025%,磷酸氢二钾0.2%，余量为水，保存条件35~40°C，30~40h，pH=6.5~7.0 ； 发酵:将活化完的菌种接入如下质量份数的培养基中，葡萄糖3%~8%，酵母粉0.2^1%,蛋白胨0.5%~2%，玉米浆粉0.5%~2%，硫酸镁0.02%~0.6%，硫酸锰0.Ο1-Ο.03%,余量为水，发酵条件为 37°C，20~30h，ρΗ=6.5~7.0。
2.如权利要求1所述的一种高密度高回收率的乳酸菌生产方法，其特征在于，所述菌种保存的时候接种量为保存培养基整体质量的2%~5%。
3.如权利要求2所述的一种高密度高回收率的乳酸菌生产方法，其特征在于，所述发酵步骤中接种的活化完的菌种的质量为发酵的培养基总质量的2%~5%。
4.如权利要求2所述的一种高密度高回收率的乳酸菌生产方法，其特征在于，所述发酵步骤之后还包含离心的步骤，转速500(T8000r/min的条件下离心，所得菌泥密度可到1012cfu/g 以上。
【文档编号】C12N1/20GK103525732SQ201310480581
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年10月15日 优先权日:2013年10月15日
【发明者】徐大财, 潘玉林, 张文静, 曹继东, 周全洲, 曹维超, 刘玉江, 韩玉竹 申请人:山东中科嘉亿生物工程有限公司