一种防治芒果细菌性黑斑病的新药剂配方及制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种防治芒果细菌性黑斑病的新药剂配方及制备方法，配方为100万单位硫酸链霉素7.50μg/mL，20%噻菌铜SC61.90μg/mL，配比为3:2；制备方法为：选取复配所需要的杀菌剂单剂，菌悬液的制备，复配药剂室内抑菌效果评价。本发明配方制备的药剂，克服了单剂防效不理想、防治谱单一、易使芒果细菌性黑斑病病原菌产生抗药性的缺点，不仅防效好、兼治疗和保护作用，也扩大了防治谱、延缓抗药性以及防治成本低，本发明采用含毒介质法，按比例混合法对多个常见杀菌剂进行了复配，目的是筛选出高效低毒，兼具治疗和保护作用的复配药剂，在有效防治芒果细菌性黑斑病的同时，延缓病原菌产生抗药性。
【专利说明】一种防治芒果细菌性黑斑病的新药剂配方及制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于芒果细菌性黑斑病的防治领域，尤其涉及一种防治芒果细菌性黑斑病的新药剂配方及制备方法。
【背景技术】
[0002]芒果(Mangifera indicaL.)属于漆树科植物，因其独特的风味和富含维生素C，被誉为热带水果之王。我国是世界芒果生产大国，近年来芒果种植面积逐渐扩大，产量稳步上升，每年达数百万吨，居世界第八位。芒果细菌性黑斑病(Xanthomonas campestrispv.mangiferaeindicae)是严重影响芒果生产的重要病害之一,该病在巴西、南非、印度、巴基斯坦等芒果种植区均有发生，在我国的海南、广东、广西、福建、云南等省区芒果园为害严重，一般造成15%~30%的损失，严重时可达50%以上，近年来为害有加重的趋势。该病害主要为害芒果叶片、枝条、花芽、花和果实。在叶片上最初产生水溃状小点，逐步变成黑褐色斑点，后扩大呈多角形或不规则、形表面隆起的黑色病斑，周围常有黄晕，严重时造成落叶；在枝条、花穗或果柄上，常形成黑褐色梭形溃疡斑，并开裂流胶；果实上病斑初呈水溃状小点，后扩大成黑褐色、表面隆起、星状开裂流胶的病斑，严重影响果面外观价值。此病全年均可发生，气度高于25°C，相对湿度大于90%有利于病害的发生和流行，台风雨与病害发生有极其密切的关系，秋梢期的台风雨次数和病叶率，与次年黑斑病发生的严重程度呈正相关，可以作为病害流行的预测指标。
[0003]目前，国内外对植物细菌病害的防治主要依靠化学药剂，容易诱发病原菌产生抗药性。虽然尚未见芒果细菌性黑斑病菌产生抗药性的相关报道，但同属Xanthomonas引起的水稻白叶枯病菌(X.campestris pv..0ryzae)和柑橘溃瘍病菌(X.campestris pv.citri)已对叶枯唑已经产生了抗药性，在辣椒疮痂病菌(X.campestris pv.vesicatoria)和水稻细菌性条斑病菌(X.0ryzae p·v.0ryzicola)中也发现了耐链霉素菌株。农药复配是延缓病原菌产生抗药性、提高药效、降低毒性、扩大使用范围、减少用药量、降低成本的有效途径。
[0004]单药剂长期使用存在芒果细菌性黑斑病病原菌产生抗药性的风险，防效会逐渐降低。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种防治芒果细菌性黑斑病的新药剂配方及制备方法，旨在解决传统的防治芒果细菌性黑斑病使用单药剂使得芒果细菌性黑斑病病原菌产生抗药性，而目前的复配农药的药效差、毒性高、使用范围狭窄、成本高的问题。
[0006]本发明是这样实现的，一种防治芒果细菌性黑斑病的新药剂配方，该防治芒果细菌性黑斑病的新药剂是17中杀菌剂中选取抑菌效果较好的100万单位硫酸链霉素、3%中生菌素WP、50%敌磺钠WS、20%噻菌铜SC、盐酸四环素等5种单剂，再对这5种单剂进行复配，获得一种抑菌效果最好的药剂配方及药剂浓度如下:。
[0007]100万单位硫酸链霉素7.50 μ g/mL, 20%噻菌铜SC61.90 μ g/mL, 二者的配比为3:2。
[0008]本发明的另一目的在于提供一种防治芒果细菌性黑斑病的新药剂的制备方法，该防治芒果细菌性黑斑病的新药剂的制备方法步骤如下:
[0009]步骤一、选取复配所需要的杀菌剂单剂；
[0010]步骤二、菌悬液的制备；
[0011 ] 步骤三、复配药剂室内抑菌效果评价。
[0012]进一步，复配所需要的5种杀菌剂单剂采用含毒介质法中的最低抑制浓度法测定17种常用杀菌剂对芒果细菌性黑斑病病原菌的室内抑菌效果获得。
[0013]进一步，菌悬液的具体制备方法如下:
[0014](I)采用病原细菌XCM-3进行单菌落培养，挑取一单菌落接种于30mLLB液体培养基内，28°C、150rpm培养24h，制得菌原液；
[0015](2)取ImL菌原液，用无菌 水按10、102、IO3…IOltl倍系列稀释后涂板于LB固体培养基上，28 °C培养48h，根据平板菌落计数法，推算出菌原液的浓度；
[0016](3)根据菌原液浓度，制备菌悬液，使菌悬液涂板后长出的菌落数约100个。
[0017]进一步，步骤三复配药剂的室内抑菌效果评价方法如下:
[0018]采用Horsfall法进行复配剂增效配比的筛选，测得盐酸四环素、硫酸链霉素、敌磺钠、中生菌素和噻菌铜共5种单剂的抑菌最低有效浓度C，按6个比例即5:0、4:1、3:2、2:3、1:4、0:5进行配比，将单剂盐酸四环素与硫酸链霉素、敌磺钠与中生菌素、硫酸链霉素与噻菌铜、硫酸链霉素与敌磺钠、中生菌素与噻菌铜、噻菌铜与盐酸四环素组成6种复配组合，每处理设3个重复；
[0019]采用含毒介质法制成不同配比的含毒平板，涂布50 μ L菌悬液于含毒平板上，以无毒平板为对照，置于28°C恒温培养箱中培养，96h后检查菌落生长情况并记录数据。计算各配比的抑菌率，若毒力比率明显大于1，为增效作用；若毒力比率明显小于1，为拮抗作用；若毒力比率接近I，则为相加作用；
[0020]抑菌率=(对照长的平均菌落数-处理长的菌落数)/对照长的平均菌落数X 100% ；预期抑菌率=(单剂A的C剂量实际抑菌率X配比中的百分比)+ (单剂B的C剂量实际抑菌率X配比中的百分率)；毒力比率=实际抑菌率(％)/预期抑菌率(％)；
[0021]测定硫酸链霉素与敌磺钠、硫酸链霉素与盐酸四环素、中生菌素与噻菌铜之间的各种比例的复配。
[0022]本发明的一种防治芒果细菌性黑斑病的新药剂配方，将单剂盐酸四环素与硫酸链霉素、敌磺钠与中生菌素、硫酸链霉素与噻菌铜、硫酸链霉素与敌磺钠、中生菌素与噻菌铜、噻菌铜与盐酸四环素依据抑菌的作用机理不同、兼治疗和保护作用而组成6种复配组合，从中筛选一种防效好、成本低、用药量少，环境友好性的新药剂配方，在有效防治芒果细菌性黑斑病的同时，也能延缓病原菌产生抗药性，所选用的药剂均为细菌性病害防治中的常见药剂，易于让果农接受，适宜广泛推广应用。
[0023]本发明提供的防治芒果 细菌性黑斑病的新药剂的制备方法采用含毒介质法，按“比例混合法”对多个常见杀菌剂进行了复配，目的是筛选出高效低毒，兼具治疗和保护作用的复配药剂，在有效防治芒果细菌性黑斑病的同时，延缓病原菌产生抗药性。【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1是本发明提供的防治芒果细菌性黑斑病的新药剂的制备方法流程图。
【具体实施方式】
[0025]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0026]图1示出了本发明提供的防治芒果细菌性黑斑病的新药剂的制备方法流程。为了便于说明，仅仅示出了与本发明相关的部分。
[0027]下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
[0028]步骤一、选取复配所需要的杀菌剂单剂
[0029]本发明通过含毒介质法中的最低抑制浓度法测定了 17中常用杀菌剂对芒果细菌性黑斑病病原菌(X.campestris pv.mangiferaeindicae)的室内抑菌效果,从中选取室内抑菌效果较好的硫酸链霉素、中生菌素、敌磺钠、噻菌铜和盐酸四环素等5个药剂用于复配制剂的研制，这5种单剂的生产厂家及用于复配的浓度设置见表1。
[0030]表1供试单剂药剂、生产厂家和浓度设置
【权利要求】
1.一种防治芒果细菌性黑斑病的新药剂配方，其特征在于，该防治芒果细菌性黑斑病的新药剂配方的成分及药剂浓度如下: 100万单位硫酸链霉素7.50 μ g/mL, 20%噻菌铜SC61.90μ g/mL，配比为3:2。
2.一种防治芒果细菌性黑斑病的新药剂的制备方法，其特征在于，该防治芒果细菌性黑斑病的新药剂的制备方法步骤如下: 步骤一、选取复配所需要的杀菌剂单剂； 步骤二、菌悬液的制备； 步骤三、复配药剂室内抑菌效果评价。
3.如权利要求2所述的防治芒果细菌性黑斑病的新药剂的制备方法，其特征在于，复配所需要的5种杀菌剂单剂采用含毒介质法中的最低抑制浓度法测定17种常用杀菌剂对芒果细菌性黑斑病病原菌的室内抑菌效果获得。
4.如权利要求2所述的防治芒果细菌性黑斑病的新药剂的制备方法，其特征在于，菌悬液的具体制备方法如下: (1)采用病原细菌XCM-3进行单菌落培养，挑取一单菌落接种于30mLLB液体培养基内，280C、150rpm培养24h，制得菌原液； (2)取ImL菌原液，用无菌水按10、IO2UO3…101°倍系列稀释后涂板于LB固体培养基上，28°C培养48h，根据平板菌落计数法，推算出菌原液的浓度；· (3)根据菌原液浓度，制备菌悬液，使菌悬液涂板后长出的菌落数100个。
5.如权利要求2所述的防治芒果细菌性黑斑病的新药剂的制备方法，其特征在于，步骤三复配药剂的室内抑菌效果评价方法如下: 采用Horsfall法进行复配剂增效配比的筛选，测得盐酸四环素、硫酸链霉素、敌磺钠、中生菌素和噻菌铜共5种单剂的抑菌最低有效浓度C，按6个比例即5:0、4:1、3:2、2:3、1:·4、0:5进行配比，将单剂盐酸四环素与硫酸链霉素、敌磺钠与中生菌素、硫酸链霉素与噻菌铜、硫酸链霉素与敌磺钠、中生菌素与噻菌铜、噻菌铜与盐酸四环素组成6种复配组合，每处理设3个重复； 采用含毒介质法制成不同配比的含毒平板，涂布50 μ L菌悬液于含毒平板上，以无毒平板为对照，置于28°C恒温培养箱中培养，96h后检查菌落生长情况并记录数据，计算各配比的抑菌率，若毒力比率明显大于1，为增效作用；若毒力比率明显小于1，为拮抗作用；若毒力比率接近I，则为相加作用； 抑菌率=(对照长的平均菌落数-处理长的菌落数)/对照长的平均菌落数X 100% ;预期抑菌率=(单剂A的C剂量实际抑菌率X配比中的百分比)+ (单剂B的C剂量实际抑菌率X配比中的百分率)；毒力比率=实际抑菌率(％)/预期抑菌率(％)； 测定硫酸链霉素与敌磺钠、硫酸链霉素与盐酸四环素、中生菌素与噻菌铜之间的各种比例的复配。
【文档编号】C12Q1/20GK103583543SQ201310547986
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年11月6日 优先权日:2013年11月6日
【发明者】蒲金基, 漆艳香, 张贺, 刘晓妹, 张欣, 喻群芳, 陆英, 谢艺贤, 张辉强 申请人:中国热带农业科学院环境与植物保护研究所