一种鉴定燕麦属物种a、c基因组的方法
【专利摘要】本发明提供一种快速鉴定燕麦属物种A、C基因组的方法，以待鉴定材料DNA为模板，以SEQ?ID?No.3和4所示序列为引物，扩增含有如SEQ?ID?No.1/2所示序列的片段，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，分析电泳结果，若扩增得到大小约830bp的片段，则表明此材料中含有A基因组，若扩增得到大小约730bp的片段，则表明此材料中含有C基因组，若扩增得到两条大小分别为830p和730bp左右的条带，则表明此材料含有A和C基因组。本发明方法能够快速、准确地鉴定燕麦材料中是否含有A、C基因组，根据该方法构建的检测试剂盒操作简便，特异性好，灵敏度高，适合于基层推广使用。
【专利说明】—种鉴定燕麦属物种A、C基因组的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及一种鉴定燕麦属物种A、C基因组的方法。
【背景技术】
[0002]燕麦属(Avena L.)隶属于禾本科(Poceae),燕麦簇(Aveneae)。全世界约有30个物种，包含AA、CC两种基因组类型的二倍体，AABB, AACC, CCCC三种基因组类型的四倍体以及AACCDD —种基因组类型六倍体。燕麦属物种中含有许多优质基因，如抗病基因，耐旱基因等，是作物遗传改良重要的基因库。广泛搜集并鉴定燕麦属种质资源不仅有利于筛选出具有更多优异基因的种质资源，更能够为燕麦属物种进化提供更多的材料。因此，亟待开发一种快速稳定的方法对搜集的燕麦属新材料所含染色体类型进行初步鉴定，然后结合形态学和细胞学等方法为新材料的准确分类奠定基础。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种快速鉴定燕麦属物种A、C基因组的方法。
[0004]为了实现本发明目的，本发明基于燕麦属物种中A、C基因组上相同基因在片段大小上的差异，提供一种用于PCR检测燕麦属物种A、C基因组的特异性引物对，所述引物对为:
[0005]正向引物rpb2-F:5，-AATCACATACGAGCAATAAACG-3’ (SEQ ID N0.3) [0006]反向引物rpb2-R:5’-GCTGAAACACCCGAAGGA-3’ (SEQ ID N0.4)
[0007]本发明还提供含有上述引物对的用于检测燕麦属物种A、C基因组的试剂盒。所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液等中的至少一种。
[0008]本发明进一步提供一种鉴定燕麦属物种A、C基因组的方法，包括以下步骤:
[0009]I)提取样品中的DNA ；
[0010]2)以步骤I)中提取的DNA为模板，利用权利要求1中所述引物对，进行PCR扩增反应;
[0011]3)分析PCR产物；若扩增产物大小约830bp (SEQ ID N0.1)，则表明样品中含有A基因组，若扩增产物大小约730bp(SEQ ID N0.2)，则表明样品中含有C基因组，若扩增得到两条大小分别为830p和730bp左右的条带，则表明样品中含有A和C基因组。
[0012]前述方法中，所述样品是指燕麦属材料的根、茎、叶。
[0013]PCR反应体系以25 μ I计为:
[0014]
【权利要求】
1.用于PCR检测燕麦属物种A、C基因组的特异性引物对，其特征在于，所述引物对为: 正向引物 rpb2-F:5’ -AATCACATACGAGCAATAAACG-3’ 和反向引物 rpb2_R:5， -GCTGAAACACCCGAAGGA-3，。
2.含有权利要求1所述引物对的用于检测燕麦属物种A、C基因组的试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液中的至少一种。
4.一种鉴定燕麦属物种A、C基因组的方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)提取样品中的DNA； 2)以步骤I)中提取的DNA为模板，利用权利要求1中所述引物对，进行PCR扩增反应； 3)分析PCR产物；若扩增产物大小约830bp，则表明样品中含有A基因组，若扩增产物大小约730bp，则表明样品中含有C基因组，若扩增得到两条大小分别为830p和730bp左右的条带，则表明样品中含有A和C基因组。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，PCR反应体系以25μ I计为:
模板 DNA50ng
2.5mM dNTPs2μΙ
2.5mol/L 正向引物 rpb2-FI μ?
2.5mol/L反向引物rpb2-RΙμ?
Taq DNA聚合酶IU
10 X PCR反应缓冲液2.5μ1
25rnM Mg22μ1
ddH20补足至 25μ1。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，PCR反应条件为:94°C5分钟；94°C I分钟，55°C 30 #,72°C I分钟，共35个循环；72°C 10分钟。
【文档编号】C12N15/11GK103740812SQ201310597359
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年11月21日 优先权日:2013年11月21日
【发明者】彭远英, 颜红海, 周萍萍, 蒲至恩, 王智英, 赵军, 唐雪琴, 魏育明 申请人:四川农业大学