基于dna条形码的鳗鱼物种鉴别方法
【专利摘要】本发明涉及一种基于DNA条形码的鳗鱼物种鉴别方法，更具体涉及一种基于DNA条形码的日本鳗、美洲鳗和欧洲鳗的物种鉴别方法。该方法通过鳗鱼DNA提取，然后利用DNA条形码引物进行PCR扩增，扩增出244bp的产物，所述DNA条形码引物为EEL244-F：CCTGTTCCTCGTGGGGGCTTTT，EEL244-R：ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG，最后按照物种核苷酸序列特征变异位点进行物种鉴别。该方法耗时短，操作简便，特异性强，可以鉴别经过加工的、无法从形态学上加以识别的蒲烧鳗鱼等鳗鱼常见加工产品，为维护企业与消费者利益以及正常的市场秩序提供技术支撑。
【专利说明】基于DNA条形码的鳗鱼物种鉴别方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种基于DNA条形码的鳗鱼物种鉴别方法，更具体涉及一种基于DNA条形码的日本獲(Anguilla、美洲獲(Anguilla rostrata)和欧洲獲(Anguillaanguilla)的物种鉴别方法。
【背景技术】
[0002]福建省是鳗鱼养殖与加工出口大省，主要产品有三种鳗鱼，即日本鳗(Anguilla
、美洲獲(Anguilla riosiraia)、欧洲獲(Anguilla,每年出口额达数
十亿元。由于鳗鱼加工如烧烤或制成其他形状熟食后，无法从形态上辨别其种类，不同种类的鳗鱼价格不同。为了防止以次充好，保护企业与消费者利益，应企业与执法部门要求，建立鳗鱼种类的生物鉴定方法。本发明是应对外经贸与检验检疫工作的需要，对作为鳗鱼出口大省的福建省的对外贸易具有重要意义。
[0003]DNA条形码(DNA barcode)是指生物体内能够代表该物种的，标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA片段。DNA条形码已经成为生态学研究的重要工具，不仅用于物种鉴定，同时也帮助生物学家进一步了解生态系统内发生的相互作用。但是目前国内外尚无利用DNA条形码鉴定鳗鱼物种的报道。
【发明内容】
[0004]基于上述目的，本发明提供了一种基于DNA条形码的鳗鱼物种鉴别方法。
[0005]本发明首先提供了一种日本鳗、美洲鳗和欧洲鳗的DNA条形码引物，DNA条形码目的片段的PCR产物碱基数为244 bp，所述DNA条形码引物的核苷酸序列为:
EEL 244-F: CCTGTTCC TCGTGGGGGC TTTT ；
EEL 244-R: ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG。
[0006]本发明通过对供试的日本鳗、美洲鳗和欧洲鳗的DNA条形码目的片段的PCR产物碱基序列进行比对分析，确定3种鳗鱼各自的特异性DNA条形码碱基序列，建立鳗鱼物种的分子生物学鉴别方法。本发明的基于DNA条形码的鳗鱼物种鉴别方法，该方法包括以下步骤:
(1)鳗鱼DNA提取；
(2)利用DNA条形码引物进行PCR扩增，扩增出244bp的产物，所述DNA条形码引物为EEL 244-F: CCTGTTCC TCGTGGGGGC TTTT，EEL 244-R: ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG ；
(3)进行物种鉴别的序列特征比对，其中，是按下表所示的核苷酸序列特征变异位点进行物种鉴别:
【权利要求】
1.一种DNA条形码引物，其特征在于:所述DNA条形码引物的核苷酸序列为:
EEL 244-F: CCTGTTCC TCGTGGGGGC TTTT ；
EEL 244-R: ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG。
2.一种基于DNA条形码的鳗鱼物种鉴别方法，其特征在于:该方法包括以下步骤: (1)鳗鱼DNA提取； (2)利用DNA条形码引物进行PCR扩增，扩增出244bp的产物，所述DNA条形码引物为EEL 244-F: CCTGTTCC TCGTGGGGGC TTTT，EEL 244-R: ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG ； (3)进行物种鉴别的序列特征比对，其中，是按下表所示的核苷酸序列特征变异位点进行物种鉴别:
3.根据权利要求2所述的针对日本鳗、美洲鳗和欧洲鳗的物种鉴别方法，其特征在于:步骤(2)所述PCR扩增的条件为:94°C预变性3 min，94°C变性30 s，45°C退火30 s，72°C延伸60 s，5个循环；94°C变性30 s，51°C退火60 s，72°C延伸60 S，35个循环；72°C延伸10min ;反应体系为:10 X Taq buffer 2.5 μ L, Taq 酶 1.0 U，模板 DNA 200 ng, MgCl2 3.5mmol/L,dNTPs 300 μ mol/L，上游引物 0.5 μ mol/L，下游引物 0.5 μ mol/L，用 ddH20 将总体积补至25 μ L0
【文档编号】C12N15/11GK103740855SQ201410045586
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2014年2月8日 优先权日:2014年2月8日
【发明者】陈文炳, 邵碧英, 缪婷玉, 彭娟 申请人:福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心