一种ε-多聚赖氨酸菌及其制备与发酵方法
【专利摘要】本发明提供了一种ε-多聚赖氨酸菌及其制备与发酵方法，该ε-多聚赖氨酸菌（Streptomyces?griseolusk6），于2013年10月10日保藏于四川抗菌素工业研究所，保藏编号为CCSIIA-51309，通过将该ε-多聚赖氨酸菌菌种接种到活化培养基中，37℃摇床培养18～20h后，在8000rpm/min条件下离心5min，取沉淀用无菌水洗涤并配成浓度为107CFU/ml菌液；将所述菌液按发酵培养基6%体积的接种量按装液量20mL/mL接种至发酵培养基中，在发酵温度30℃、初始pH7.0、摇床转速200r/min条件下培养10～16h，得到ε-多聚赖氨酸发酵液。本发明提供的ε-多聚赖氨酸菌及其发酵方法能够大幅度提高ε-PL产量，这为ε-PL的长远甚至食品工业化大规模生产提供了有利资料，垫下了坚实的基础，有着非常重要的意义。
【专利说明】一种ε-多聚赖氨酸菌及其制备与发酵方法
【技术领域】
[0001]本发明属于发酵【技术领域】，尤其涉及一种ε-多聚赖氨酸菌及其制备与发酵方法。
【背景技术】
[0002]食品防腐剂是食品添加剂领域中主要门类之一，我国的食品防腐剂产量已达4万多吨，但目前使用的防腐剂以化学合成防腐剂为主，科学家在长期的研究中，发现一些化学合成的防腐剂有诱癌性、致畸性和易引起事物中毒的现象。随着人们对生活水平和对食品安全性的认识与要求的提高，食品添加剂也掀起了强烈的回归自然、享受绿色与健康的浪潮，化学合成防腐剂也越来越受到人们的排斥。而ε -多聚赖氨酸(ε-Poly-L-1ysine,ε -PD是多以链霉菌属的好氧发酵培养得到的一种天然微生物代谢产物，是经分离纯化而获得的发酵产品。ε -聚赖氨酸(ε -PL)是由赖氨酸单体组成的均聚多肽，具有热稳定性好、水溶性强、安全性高、抗菌谱广等优点，广泛用于食品保鲜。此外，在基因治疗、微囊药物的制备、高分子材料等领域中，聚赖氨酸亦有着广泛的用途，优良防腐性能和巨大商业潜力。ε -PL具有广谱抑菌性，在酸性和微酸性环境中对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及酵母菌、霉菌均有一定的抑菌效果，而且其对耐热性芽孢杆菌和一些病毒也有抑制作用。因此，ε-PL成为相关行业人士关注的热点和重点。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种一种ε -多聚赖氨酸菌的发酵方法，旨在提供一种具有ε-多聚赖氨酸高产量潜力的发酵菌种。
[0004]本发明的再一目的在于提供上述ε -多聚赖氨酸菌的制备方法。
[0005]本发明的另一目的在于提供上述多聚赖氨酸菌的发酵方法，旨在解决现有发酵方法ε -多聚赖氨酸的产量很低、分离纯化繁琐的问题。
[0006]本发明是这样实现的，一种ε -多聚赖氨酸菌(Streptomycesgriseolusk6),于2013年10月10日保藏于四川抗菌素工业研究所，保藏编号为CCSIIA-51309。
[0007]本发明进一步提供了上述ε -多聚赖氨酸菌的制备方法，包括以下步骤:
[0008](I)通过SG平板添加亚甲基蓝和K2Cr7O7初步筛选得到ε-聚赖氨酸产生菌TUST-2 ；
[0009](2)通过不同剂量的亚硝基胍对ε -聚赖氨酸产生菌TUST-2的诱变处理，根据致死率确定诱变剂量，诱变结束时采用高倍稀释法终止诱变；
[0010](3)用SGB平板初筛透明圈较大且菌落长势较好的诱变菌，确定SGB平板中甘氨酸和ε-PL的浓度，用甘氨酸和ε-PL抗性平板复筛出生长状况良好的诱变菌；
[0011](4)将复筛出的诱变菌进行发酵检测ε -PL的产量，最后筛选出ε _PL产量最高的诱变株。
[0012]本发明进一步提供了一种ε -多聚赖氨酸的发酵方法，包括以下步骤:[0013](1)将上述ε -多聚赖氨酸菌菌种接种到活化培养基中，37°C摇床培养18~20h后,在8000rpm/min条件下离心5min,取沉淀用无菌水洗漆并配成浓度为107CFU/ml菌液；
[0014](2)将所述菌液按发酵培养基6%体积的接种量按装液量20mL/mL接种至发酵培养基中，在发酵温度30°C、初始pH7.0、摇床转速200r/min条件下培养10~16h，得到ε -多聚赖氨酸发酵液。
[0015]优选地，在步骤(1)中，IL所述活化培养基包括以下按质量计各组分:
[0016]蛋白胨9~10g，
[0017]牛肉浸出粉2~3g，
[0018]氯化钠4~5g。
[0019]优选地，在步骤(1)中，IL所述发酵培养基包括以下按质量计各组分:
[0020]
【权利要求】
1.一种ε -多聚赖氨酸菌(Streptomycesgriseolusk6),于2013年10月10日保藏于四川抗菌素工业研究所，保藏编号为CCSIIA-51309。
2.权利要求1所述的ε-多聚赖氨酸菌的制备方法，其特征在于包括以下步骤: (1)通过SG平板添加亚甲基蓝和K2Cr7O7初步筛选得到ε-聚赖氨酸产生菌TUST-2 ； (2)通过不同剂量的亚硝基胍对ε-聚赖氨酸产生菌TUST-2的诱变处理，根据致死率确定诱变剂量，诱变结束时采用高倍稀释法终止诱变； (3)用SGB平板初筛透明圈较大且菌落长势较好的诱变菌，确定SGB平板中甘氨酸和ε -PL的浓度，用甘氨酸和ε -PL抗性平板复筛出生长状况良好的诱变菌； (4)将复筛出的诱变菌进行发酵检测ε-PL的产量，最后筛选出ε-PL产量最高的诱变株。
3.一种多聚赖氨酸的发酵方法，其特征在于包括以下步骤: (1)将权利要求1所述的ε-多聚赖氨酸菌菌种接种到活化培养基中，37°C摇床培养18~20h后,在8000rpm/min条件下离心5min,取沉淀用无菌水洗漆并配成浓度为IO7CFU/ml菌液； (2)将所述菌液按发酵培养基6%体积的接种量按装液量20mL/mL接种至发酵培养基中，在发酵温度30°C、初始pH7.0、摇床转速200r/min条件下培养10~16h，得到ε -多聚赖氨酸发酵液。
4.如权利要求3所述的ε-多聚赖氨酸的发酵方法，其特征在于，在步骤(1)中，IL所述活化培养基包括以下按质量计各组分: 蛋白胨9~IOg, 牛肉浸出粉 2~3g， 氯化钠4~5g。
5.如权利要求4所述的ε-多聚赖氨酸的发酵方法，其特征在于，在步骤(1)中，IL所述发酵培养基包括以下按质量计各组分:葡萄糖40.00 g,(NH4)2SO412,00g?酵母膏7.00g,MgS04'7H200.30go
【文档编号】C12N15/01GK103834594SQ201410079901
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2014年3月6日 优先权日:2014年3月6日
【发明者】苟兴华, 黄莉, 蔡创, 蔡永旭, 于刚强, 钟凯强, 邹强, 刘达玉, 王卫 申请人:成都大学