一种胶红酵母及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种胶红酵母，它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号：CCTCCNO:M2014255的胶红酵母WD-B5(Rhodotorula?mucilaginosaWD-B5)。本发明还公开了利用前述胶红酵母将苯乙酮转化为(S)-苯乙醇的方法。本发明保藏号为CCTCC?M2014255的胶红酵母WD-B5(Rhodotorula?mucilaginosaWD-B5)可以高效地将苯乙酮转化为(S)-苯乙醇，克服了现有技术的缺陷，具有良好的市场应用前景。
【专利说明】一种胶红酵母及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一株胶红酵母及其应用，属于发酵领域。
【背景技术】
[0002](S)-苯乙醇及其衍生物是合成多种手性药物如(S)-氟西汀、(S)-异丙肾上腺素等的重要中间体。为获得光学活性纯苯乙醇，应用最广的是化学催化不对称合成法，但是其存在反应条件剧烈，环境不友好的缺陷。近年来，生物催化法因反应条件温和、产物立体选择性高、对环境友好等优点成为获得光学活性产物的另一种有效途径。目前，生物催化法制备手性芳香酮的相关报道较多，但仍然无法实现工业化生产，主要原因是生产菌株催化活性不稳定、产物积累量不高及立体选择性较差。
[0003]朱冬眉等，“胶红酵母催化苯乙酮的不对称还原吸附树脂的促进作用”，《四川大学学报(自然科学版)》2009年06期中，报道了采用胶红酵母可以将苯乙酮转化为(S)-苯乙醇，产物纯度达99.0%，但是，转化率低，最高仅能达到75.5%。
【发明内容】
[0004]本发明提供了一种新的胶红酵母及其在将苯乙酮转化为(S)-苯乙醇中的应用。
[0005]本发明胶红酵母，它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号:CCTCCN0:M2014255 的胶红酵母 WD-B5 (Rhodotorula mucilaginosaWD_B5)。
[0006]本发明胶红酵母WD-B5 (Rhodotorula mucilaginosaWD_B5),于 2014 年 6 月 13日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其地址为:中国.武汉.武汉大学，保藏号为CCTCC M 2014255。
[0007]本发明将苯乙酮转化为(S)-苯乙醇的方法，包括如下步骤:
[0008](I)取 CCTCCN0:M 2014255 的胶红酵母 WD-B5 (RhodotorulamucilaginosaffD-B5)，加水至菌体细胞的浓度达到0.2~0.3g/ml,调pH为6.8~7.2,加葡萄糖至浓度为I~3% (w/v)；
[0009](2)加入底物苯乙酮至浓度为40~60mmol/L,在温度25~35°C的条件下反应至少24h,即可。
[0010]步骤(1)中，所述菌体细胞的浓度为0.25g/ml。
[0011]步骤(1)中，调节pH为7.0。
[0012]步骤(1)中，所述葡萄糖的浓度为2% (w/v)。
[0013]步骤(2)中，所述底物苯乙醇的浓度为50mmol/L。优选地，所述底物苯乙醇分两次添加，第一次添加的时间为反应Oh时,添加的量为每IL溶液25mmol,第二次添加的时间为反应后第12h，添加的量为每IL溶液25mmol。
[0014]步骤(2)中，所述反应温度为30°C。
[0015]步骤(2)中，所述反应的时间为36h。
[0016]步骤⑵中，在添加底物苯乙酮时，同时添加助溶剂乙醇至浓度为I~3% (v/v)。优选地，所述乙醇浓度为2% (v/v) 0
[0017]采用本发明胶红酵母在本发明转化条件下，能够高效地将苯乙酮转化成(S)-苯乙醇，转化率高达99%，转化获得的产物纯度(产物e.e.值)大于99%，工业应用前景良好。
[0018]显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0019]以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
【专利附图】
【附图说明】
[0020]图1基于26S rDNA D1/D2区域序列构建的系统发育树【具体实施方式】
[0021]实施例1本发明胶红酵母WD-B5 (Rhodotorula mucilaginosaWD_B5)的鉴定特征
[0022]1、鉴定方法
[0023]将5份微生物土壤及污水样品中分离得到的本发明菌株WD-B5，进行如下生理生化和分子生物鉴定。
[0024](I)生理生化特征
[0025]利用显微镜及肉眼观察细胞及固体平板上的菌落形态，并根据《酵母菌的特征与鉴定手册》所列的酵母菌种鉴定方法进行生化特征分析。
[0026](2)分子生物学鉴定
[0027]利用PCR技术，获得了酵母WD-B5的26SrDNA D1/D2区域基因的部分片断，利用BLAST软件将该序列与GenBank中收录的DNA序列进行比对，并与相关菌种构建进化树，初步鉴定菌株WD-B5的种属。
[0028]2、鉴定结果
[0029](I)菌落特征和生理生化特征
[0030]菌落特征:粉红色、圆形、有光泽、边缘整齐、不透明、质地均匀、表面光滑、湿润。借助高倍荧光显微镜观察菌株WD-B5的革兰氏染色为阳性，未见菌丝体，细胞呈卵圆形。
[0031]生理生化特性见表1:
[0032]表1菌株WD-B5的生理生化特性
[0033]
【权利要求】
1.一种胶红酵母，其特征在于:它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号:CCTCCNO:M2014255 的胶红酵母 WD-B5 (Rhodotorula mucilaginosaWD-B5)。
2.一种将苯乙酮转化为(S)-苯乙醇的方法，其特征在于:包括如下步骤: (1)取CCTCC NO:M2014255 的胶红酵母 WD-B5 (Rhodotorula mucilaginosaWD-B5)，加水至菌体细胞的浓度达到0.2~0.3g/ml，调pH为6.8~7.2，加葡萄糖至浓度为I~3%(w/v)； (2)在步骤(1)的溶液中加入底物苯乙酮至浓度为40~60mmol/L，在温度25~35°C的条件下反应至少24h，即可。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤(1)中，所述菌体细胞的浓度为0.25g/ml。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤(1)中，调节pH为7.0。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤⑴中，所述葡萄糖的浓度为2%(w/V)。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤(2)中，所述底物苯乙醇的浓度为SOmmoI /I,η
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于:步骤(2)中，所述底物苯乙醇分两次添加，第一次添加的时间为反应Oh时,添加的量为每IL溶液25mmol,第二次添加的时间为反应后第12h，添加的量为每IL溶液25mmol。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于: 步骤(2)中，所述反应的温度为30°C ； 步骤(2)中，所述反应的时间为36h。
9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤(2)中，在添加底物苯乙酮时，同时添加乙醇至浓度为I~3% (v/v) ο
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于:所述乙醇浓度为2%(v/v) 0
【文档编号】C12N1/16GK104178432SQ201410387866
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年8月8日 优先权日:2014年8月8日
【发明者】王丹, 杨志荣 申请人:成都医学院