一种抗氧化核桃多肽保健品的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种抗氧化核桃多肽的制备方法，包括核桃粕的预处理-核桃粕的均质-核桃蛋白的提取-酶解前处理-酶解反应-分离-脱盐-浓缩干燥得到核桃多肽产品，其中在酶解反应环节采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶四种酶按序、分时段加入，根据这四种酶对蛋白质分解为多肽、氨基酸作用的强弱、功能、协同等综合考虑，并使四种酶在各自最优的酶解条件下进行酶解。本发明所制备的核桃多肽还原能力表现为吸光度在0.4上下浮动，对羟自由基清除率可高达95%，对超氧阴离子自由基清除率可以达到39.5%，蛋白提取率可达到98.71%，核桃多肽的水解度可达到26.37%，与现有技术相比具有较大的提高和改善。
【专利说明】一种抗氧化核桃多肽保健品的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于核桃加工领域，尤其是一种抗氧化核桃多肽的制备方法。
【背景技术】
[0002] 核桃是作为一种可食用坚果，其桃仁中富含油脂、蛋白质、糖类及维生素等营养成 分，其中蛋白质含量约为16%。目前，我国的核桃加工主要以提取核桃油为主，榨油后的核桃 珀中蛋白质含量可高达50%，具有很大的开发潜力，但就目前的应用来看，核桃柏多作为动 物饲料，经济效益极低。
[0003] 科学研究发现，人体摄取蛋白质经消化作用后，并非以氨基酸形式吸收，而是以肽 的形式吸收，因多肽具有参与激素调节，抗衰老，抗氧化，降血压，降血脂，抑菌，美容养颜等 诸多活性功能，被广泛的应用于食品、保健品、医疗、化妆品等行业。目前主要的多肽产品包 括动物类的金钱白花蛇多肽、地龙多肽、蛤蚧多肽、海马多肽，植物类的天花粉多肽、松花粉 多肽、杏仁多肽、大豆多肽、云芝多肽、灵芝多肽等，但对核桃肽的研究较少。
[0004] 众所周知，氧是维持人类生命活动不可缺少的元素，但氧在人体内进行氧化反应 的同时，部分氧会产生过氧化氢、超氧化阴离子和自由基羟基等物质，这些物质会间接的 引发一系列疾病，如何提高抗氧化能力呢？或许获得抗氧化肽或类似抗氧化肽丰富的保健 品是提高抗氧化能力的一个途径，因核桃多肽与抗氧化肽的结构类似，且具有一定的抗氧 化能力，而受到关注，如公布号CN103125735A中是利用AlcaLase酶与木瓜蛋白酶的混合 酶液，对核桃饼进行酶解得到核桃多肽，得到的核桃多肽含量不高，且核桃多肽中营养结 构比较单一，抗氧化性不高。传统工艺的核桃蛋白提取率不超过85%，核桃多肽的水解度不 超过15%，核桃多肽对羟基自由基的清除率在32. 7%左右，对超氧阴离子自由基的清除率在 24. 6%左右，与VC作对比，其还原能力是VC的37. 9%，蛋白质提取率、水解度、对羟基自由 基、超氧阴离子自由基的清除率均不高。
【发明内容】
[0005] 本发明公开了一种抗氧化核桃多肽的制备方法，旨在提供一种具有显著抗氧化性 且肽含量高的核桃多肽的生产工艺。
[0006] 为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是： (1) 核桃柏的预处理：将核桃脱皮、脱油，得到脱脂核桃柏，经粉碎至74 μ m -150μπι; (2) 核桃柏的均质：将粉碎后的核桃柏与水按重量比1:10-20混合，在35MPa-45MPa 条件下均质，重复2-4次，使核桃柏充分均质，得到核桃混悬液，核桃柏经多次均质比单次 均质的效果好，更有利于后续的酶解工艺； (3) 核桃蛋白的提取：先将上述核桃混悬液稀释5-10倍，在85°C -KKTC条件下变性 10 min-15min，再用lmol/L的NaOH溶液将其pH值调整为9-11，在50°C-55°C条件下碱溶 lh-2h，经离心取上清液，用0. 5 mol/L的HCl溶液将上清液的pH值调至5-6,经离心，将收 集的沉淀用NaHCO3溶液调至中性后，可以采用喷雾干燥器进行喷雾干燥，得到核桃蛋白； (4) 酶解前处理：将核桃蛋白与水按重量比1:8-15制备成核桃蛋白混悬液，在 8511C -95 °C条件下保温10min-20min，对蛋白质的结构进行适当处理破坏，有利于下一步的 酶解、水解； (5) 酶解反应：将上述核桃蛋白混悬液冷却至45°C -55°C，先将pH值调节至9-11加入 3000-4000u/g的碱性蛋白酶，酶解30min，然后将pH值调至8-10加入5000-6000u/g木瓜 蛋白酶，继续酶解30min，再将pH值调至7-8. 5加入6000-7000u/g中性蛋白酶，继续酶解 30min，最后将pH值调至6-7. 5加入2000-3000u/g菠萝蛋白酶进行酶解，3h-5h后酶解反应 的水解度基本不变时，迅速将核桃蛋白混悬液的温度调至90°C -KKTC，恒温15min-20min 后，停止酶解反应，酶解反应中上述四种酶的分时段加入，首先利用具有较强分解蛋白质能 力的碱性蛋白酶（内切蛋白酶）对核桃蛋白混悬液初步分解为多肽，再利用其底物特异性， 对蛋白质进行极强的加水分解，分解其中的L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸和L-瓜木瓜蛋白 酶氨酸残基羧基参与形成的肽键；再加入具有食品添加剂性质的中性蛋白酶对蛋白质进一 步酶解的同时改善多肽的风味，最后加入菠萝蛋白酶来增加其中的的PDI值和NSI值； (6) 分离：将步骤（5)得到的酶解液pH值调至5-6经离心取上清液，再将上清液经超滤 膜超滤，得到含小分子多肽的核桃多肽溶液； (7) 脱盐：选用强酸性阳离子树脂和强碱性阴离子树脂分别处理核桃多肽溶液； (8) 浓缩干燥：将步骤（7)得到的核桃多肽溶液浓缩至原溶液的1/4-1/3后，进行喷雾 干燥得到核桃多肽粉。
[0007] 作为一种优选实施方式，步骤（1)中的核桃脱油是通过CO2超临界萃取提油或压榨 脱油实现的。
[0008] 作为一种优选实施方式，步骤（2)中的核桃柏的均质，重复3次。
[0009] 作为一种优选实施方式，步骤（6)中的上清液经分子量为5000的超滤膜，得到分 子量不超过5000的核桃多肽溶液。
[0010] 作为一种优选实施方式，步骤（6)中的上清液经分子量为8000的超滤膜，得到分 子量不超过8000的核桃多肽溶液。
[0011] 作为一种优选实施方式，步骤（8)是在-0. 07 MPa- -0. 09MPa，50°C-60°c的条件 下通过旋蒸浓缩至原溶液的1/4-1/3后，用喷雾干燥器在进口温度70°C -85°C，出口温度 170°C _190°C，流量800mL/h-1200mL/h的条件下进行喷雾干燥，得到核桃多肽粉。
[0012] 与现有技术相比，本发明具有如下优点： (1) 本发明使用CO2超临界萃取提油的核桃柏，核桃柏中脂肪酸含量极少，蛋白质含量 相对较高； (2) 采用的多次均质的技术手段，使蛋白提取率更高，为核桃多肽的高蛋白含量提供 了保证； (3) 四种酶分时段加入，分别控制各时段酶解的pH值，使四种酶都能发挥最大的酶解 作用，综合考虑四种酶的特性，确定四种酶的添加顺序依次为碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中 性蛋白酶、菠萝蛋白酶； (4) 采用超滤膜截流的方法，得到小分子量的核桃多肽； (5) 采用离子交换树脂脱盐的方法，脱除核桃多肽中的无机盐成分，去除核桃多肽中 的咸味。
[0013] 本发明制备的核桃多肽制备过程中，核桃蛋白提取率高，经四种酶分时段酶解得 到分子结构不同的多肽，并对核桃多肽进行了抗氧化试验，对核桃多肽的抗氧化性进行验 证。
[0014] 1.核桃蛋白含量的测定。
[0015] 本发明所得的核桃多肽中核桃蛋白含量的测定采用凯氏定氮法，具体如下：精密 称取0. 5g核桃蛋白，移入定氮瓶中，加入0. 2g硫酸铜，6g硫酸钾及20mL硫酸，稍摇勻后于 瓶口放一小漏斗，将瓶放于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停 止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。 取下放冷,小心加 20mL水，放冷后，移入IOOmL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容 量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸同一方法 做试剂空白试验。通过凯氏定氣装置皮应，2%的硎酸溶液捽收，0. 025mol/L的H2SO4滴定。
[0016] 根据公式蛋白含量
【权利要求】
1. 一种抗氧化核桃多肽的制备方法，其特征在于包括： 核桃柏的预处理：将核桃脱皮、脱油，得到脱脂核桃柏，经粉碎至74 μ m -150 μ m ; 核桃柏的均质：将粉碎后的核桃柏与水按重量比1:10-20混合，在35MPa-45MPa条件 下均质，重复2-4次，使核桃柏充分均质，得到核桃混悬液； 核桃蛋白的提取：先将上述核桃混悬液稀释5-10倍，在85 °C -KKTC下变性10 min-15min，再用lmol/L的NaOH溶液将其pH值调整为9-11，在50°C-55°C条件下碱溶 lh-2h，经离心取上清液，用0. 5 mol/L的HC1溶液将上清液的pH值调至5-6,经离心，将收 集的沉淀用NaHC03溶液调至中性后，经喷雾干燥得核桃蛋白； 酶解前处理：将核桃蛋白与水按重量比1:8-15制备成核桃蛋白混悬液，在85°C -95°C 条件下保温l〇min-20min，破坏蛋白质的结构利于其水解； 酶解反应：将上述核桃蛋白混悬液冷却至45 °C -55°C，先将pH值调节至9-11加入 3000-4000u/g的碱性蛋白酶，酶解30min，然后将pH值调至8-10加入5000-6000u/g木瓜 蛋白酶，继续酶解30min，再将pH值调至7-8. 5加入6000-7000u/g中性蛋白酶，继续酶解 30min，最后将pH值调至6-7. 5加入2000-3000u/g菠萝蛋白酶进行酶解，3h-5h后酶解反应 的水解度基本不变时，迅速将核桃蛋白混悬液的温度调至90°C -KKTC，恒温15min-20min 后，停止酶解反应； 分离：将步骤（5)得到的酶解液pH值调至5-6经离心取上清液，再将上清液经超滤膜 超滤，得到含小分子多肽的核桃多肽溶液； 脱盐：选用强酸性阳离子树脂和强碱性阴离子树脂分别处理核桃多肽溶液； 浓缩干燥：将步骤（7)得到的核桃多肽溶液浓缩至原溶液的1/4-1/3后，进行喷雾干 燥。
2. 如权利要求1所述的抗氧化核桃多肽的制备方法，其特征在于：步骤（1)中的核桃脱 油是通过C02超临界萃取提油或压榨脱油实现的。
3. 如权利要求1所述的抗氧化核桃多的制备方法，其特征在于：步骤（2)中的核桃柏的 均质，重复3次。
4. 如权利要求1所述的抗氧化核桃多肽的制备方法，其特征在于：步骤（6)中的上清液 经分子量为5000的超滤膜，得到分子量不超过5000的核桃多肽溶液。
5. 如权利要求1所述的抗氧化核桃多肽的制备方法，其特征在于：步骤（6)中的上清液 经分子量为8000的超滤膜，得到分子量不超过8000的核桃多肽溶液。
6. 如权利要求1所述的抗氧化核桃多肽的制备方法，其特征在于：步骤（8)是在-0. 07 MPa- -0. 09MPa，50°C -60°C的条件下通过旋蒸浓缩至原溶液的1/4-1/3后，用喷雾干燥器 在进口温度70°C -85°C，出口温度170°C _190°C，流量800mL/h-1200mL/h的条件下进行喷 雾干燥，得到核桃多肽粉。
【文档编号】C12P21/06GK104293870SQ201410495148
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年9月25日 优先权日:2014年9月25日
【发明者】李鹏, 杜美丽, 赵良启, 郝常艳 申请人:汾州裕源土特产品有限公司