一种肺癌tubb3基因的检测试剂盒及探针的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种肺癌TUBB3基因的检测试剂盒及探针，该探针为一组双色FISH探针，所述一组双色探针是(1)标记为红色的TUBB3基因探针(2)标记为绿色的16号染色体中心粒探针；其中TUBB3：Entrez Gene ID:10381。本发明的肺癌TUBB3基因扩增FISH检测方法通过对肺癌组织石蜡切片进行常规预处理，然后采用一组双色探针进行原位杂交，根据检测到的荧光信号判断是否存在所述肺癌相关基因的扩增状态。本法设计周全，操作简单，特异性和敏感性高，可以快速，准确，直观地检测出肺癌相关TUBB3基因的扩增状态。
【专利说明】-种肺癌TUBB3基因的检测试剂盒及探针
【技术领域】
[0001] 本发明涉及疾病相关基因检测【技术领域】，具体是指一种肺癌TUBB3基因扩增的 FISH检测方法和相关检测探针及试剂盒。
【背景技术】
[0002] 肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。 近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率 均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不 完全明确，大量资料表明，长期大量吸烟与肺癌的发生有非常密切的关系。
[0003] 根据肺癌的生长、侵犯及转移速度和范围以及对化疗药物和放射治疗的敏感性， 临床将肺癌分为小细胞肺癌（SCLC)及非小细胞肺癌（NSCLC)，后者占肺癌发病率80%左 右。只有合理应用手术、放疗、化疗、靶向治疗等方法，才能获得较好控制率，延长生存期。
[0004] 在过去的几十年里，虽然科学家们不断地探索非小细胞肺癌（NSCLC)化疗和放疗 的方法，但取得的成果仍不能令人满意，例如晚期肺癌患者的平均生存时间仍未超过一年， 疗效不确定，部分患者会出现一些毒副反应，如恶心、呕吐等胃肠道反应，影响了生活质量， 甚至中断治疗。传统的细胞毒性化学药物可比作是"杀敌一千，自损八百"，因而许多患者对 此是谈之色变，而靶向治疗正是科学家们几十年来致力于分辨癌细胞与正常细胞之间分子 生物学差异的临床研究成果。
[0005] 所谓靶向治疗，就是通过基因或分子的选择，有针对性地杀死恶性肿瘤细胞，而几 乎不影响正常细胞。这一划时代的生物肿瘤疗法的特点可以总结为4个字："高效低毒"。 一方面，祀向治疗大大提1? 了肿瘤治疗的疗效；另一方面，祀向治疗减少患者在治疗中的副 作用，提高生活质量。
[0006] 靶向治疗是指在分子生物学诊断的基础上，利用肺癌细胞和正常细胞之间存在 的差异，有针对性地抑制肺癌细胞生长和增殖，例如，采用拮抗受体、抑制肿瘤生长所需的 血管和阻断肿瘤生长的信号传导通路等方法来抑制肺癌细胞生长和增殖，从而达到治疗目 的。
[0007] 原癌基因（proto-oncogene)是细胞内与细胞增殖相关的基因，是维持机体正常 生命活动所必须的，在进化上高度保守。当原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增 多或活性增强时，使细胞过度增殖，从而形成肿瘤。TUBB3是一种和肺癌发病密切相关的位 于人类16号染色体（16q24. 3)的原癌基因。TUBB3基因的扩增，对于肺癌的靶向治疗具有 重要指导意义。
[0008] 目前，市场上检测TUBB3基因扩增主要用PCR方法，由于检测的是肿瘤和正常细胞 的混合物，因此结果不够准确，而市场上亦迫切需要一种更为准确的检测方法。
【发明内容】
[0009] 本发明的主要目的就是针对以上存在的问题与不足，提供一种肺癌TUBB3基因扩 增的FISH检测方法，探针及试剂盒。该法设计周全，操作简单，特异性和敏感性高，可以快 速，准确，直观地测出肺癌TUBB3基因的扩增，检测结果准确可靠，从而可作为医师对肺癌 进行分子病理分型的参考依据，适用于大规模推广应用。
[0010] 本发明采用的技术方案为：
[0011] 一种肺癌相关TUBB3基因扩增的FISH检测的一组双色FISH探针，所述一组双色 探针是（1)标记为红色的TUBB3基因探针（2)标记为绿色的16号染色体中心粒探针。其 中TUBB3:EntrezGeneID:10381。
[0012] 本发明还提供了一种肺癌相关TUBB3基因扩增的FISH检测试剂盒，包括一组双色 FISH探针，所述一组双色探针是（1)标记为红色的TUBB3基因探针（2)标记为绿色的16号 染色体中心粒探针。其中TUBB3:EntrezGeneID:10381。。
[0013] 本发明还提供了一种肺癌TUBB3基因扩增的FISH检测方法，包括如下步骤：对 肺癌组织石蜡切片进行常规预处理，然后采用一组双色探针进行原位杂交，根据检测到的 荧光信号判断是否存在所述肺癌相关基因的扩增；所述一组双色探针是（1)标记为红色 的TUBB3基因探针（2)标记为绿色的16号染色体中心粒探针；其中TUBB3:EntrezGene ID:10381。
[0014] 本发明的有益效果在于：
[0015] 本发明的肺癌TUBB3基因扩增FISH检测方法通过对肺癌组织石蜡切片进行常规 预处理，然后采用一组双色探针进行原位杂交，根据检测到的荧光信号判断是否存在所述 肺癌相关基因的扩增状态。本法设计周全，操作简单，特异性和敏感性高，可以快速，准确， 直观地检测出肺癌相关TUBB3基因的扩增状态，检测结果准确可靠，从而可作为医师对肺 癌进行精确分子病理分型的参考依据，适于大规模推广应用。
【具体实施方式】
[0016] 为更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例作进一步说明。下列具体实施 例采用的主要试剂，仪器和操作步骤如下：
[0017] 实施例1
[0018] 一、探针DNA的获取
[0019] 1)划线接种：将携带有TUBB3基因和16号染色体中心粒的BAC菌种划线接种于 含有抗生素（氯霉素）的琼脂平板上，37°C培养过夜（约14小时）。
[0020] 2)初始培养：次日挑取生长状态良好的单克隆菌种，接种于2ml含有抗生素（氯 霉素）的LB液体培养基中，放入37°C摇床，设置摇床速度约200rpm，培养6-8小时。
[0021] 3)过夜培养：每Iml菌液转移至200ml培养体系，放置于37°C摇床，转速200rpm， 培养过夜（约14-16小时）。
[0022] 4)次日按照QIAGEN公司质粒大量提取试剂盒操作说明进行DNA大量提取和纯化。
[0023] 二、探针标记
[0024] 1.酶切DNA:
[0025] 1)按照以下反应体系对目的DNA进行酶切
[0026]
【权利要求】
1. 一种肺癌相关TUBB3基因扩增的FISH检测的一组双色FISH探针，其特征在于：所 述一组双色探针是（1)标记为红色的TUBB3基因探针；（2)标记为绿色的16号染色体中心 粒探针；其中 TUBB3:Entrez Gene ID:10381。
2. -种肺癌相关TUBB3基因扩增的FISH检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括一组 双色FISH探针，所述一组双色探针是（1)标记为红色的TUBB3基因探针；（2)标记为绿色 的16号染色体中心粒探针；其中TUBB3 :Entrez Gene ID:10381。
3. -种肺癌TUBB3基因扩增的FISH检测方法，其特征在于：包括如下步骤：对肺癌组 织石蜡切片进行常规预处理，然后采用一组双色探针进行原位杂交，根据检测到的荧光信 号判断是否存在所述肺癌相关基因的扩增；所述一组双色探针是（1)标记为红色的TUBB3 基因探针；（2)标记为绿色的16号染色体中心粒探针；其中TUBB3:Entrez Gene ID: 10381。
【文档编号】C12N15/11GK104278096SQ201410514951
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年9月29日 优先权日:2014年9月29日
【发明者】缪为民 申请人:天津蒙特立医疗科技有限责任公司