本发明涉及采用多穗柯甜茶和武夷山大红袍制成的复配多穗柯甜茶及其提取物的制备方法。本发明还涉及多穗柯甜茶和大红袍所制得的复配多穗柯甜茶及其提取物在降血糖和减肥方面的应用。
背景技术：
乌龙茶中多糖是一种有效的抗氧化剂，能通过直接清除自由基或提高体内抗氧化活性，抑制机体脂质过氧化反应，缓解自由基对细胞的损伤作用；乌龙茶多糖对糖尿病有一定防治作用，其作用机制可能是；(1)通过抑制α－葡萄糖苷酶活性，抑制葡萄糖在小肠的吸收，降低餐后血糖；(2)缓解糖尿病机体胰岛数目减少，胰岛面积碱小的症状，改善胰岛功能，提高机体胰岛素的供给；(3)通过抗氧化作用，减轻自由基对β细胞的损伤。
大红袍是乌龙茶的一个高端品种，其多糖含量是乌龙茶中最多，因此在降血糖，清脂肪，减肥胖；清肠胃，助消化；清血管，降三高；清毒素，护胃、肝、肾等功效也最明显。
多穗柯[lithocarpuslitseifoliusreld]因其叶浸泡后具有很高的甜味，而被称为甜茶。多穗柯多以野生状态主要分布于广西地区。据《全国中草药汇编》等记载：多穗柯甜茶能防治降血糖、高血压、治疗湿热痢疾、皮肤痉痒、拥疽恶疮等症，而且具有滋养肝肾、和胃降逆、润肺止咳、解困醒酒等功效，另外甜茶在抗炎、镇痛、调节免疫、增强抗应撤能力、改善微循环、抗心肌缺血、降血脂、抗脂肪肝、抗ii型糖尿病及糖尿病并发症、协同增进抗肿瘤药物疗效等药理方面也有作用。
在探索多穗柯甜茶提取物在降血糖、降压和抗氧化过程中，本发明人意外地发现，多穗柯甜茶与大红袍复配茶提取物使用时要比多穗柯甜茶提取物和大红袍提取物单独使用在降血糖和减肥方面要好，起到了协同作用。这个研究结果表明，多穗柯甜茶提取物在与钠葡萄糖共转运载体系统(sodium/glucosecotransporters,sglt)靶点作用后能够明显的降低血糖，发明人推测多穗柯甜茶与大红袍复配茶提取物联合使用时，大红袍提取物中有益部分能够促进多穗柯甜茶提取物与sglt的靶点结合，所以降低血糖的效果更为明显(在相同是质量下，比多穗柯甜茶提取物和大红袍提取物单一降糖效果要好)。表明多穗柯甜茶提取物与大红袍提取物联合使用在降血糖和降血脂方面具有重要应用前景。
技术实现要素：
本发明的目的是要提供一种由多穗柯甜茶和大红袍制成的复配多穗柯甜茶及其提取物的制备方法。
本发明的另一个目的是提供了多穗柯甜茶与大红袍复配茶及其提取物在降血糖和减肥方面的应用，特别多穗柯甜茶提取物与大红袍提取物联合使用时要比多穗柯甜茶与大红袍复配茶提取物单独使用在降血糖和减肥方面要好，起到了协同作用。
本发明的目的是这样实现的：采生长15-45天的多穗柯甜茶嫩叶和大红袍嫩叶进行净选，经以下工序加工：杀青：将多穗柯甜茶和大红袍嫩叶按1:0.2-5的比例混合杀青，杀青温度控制在150-180℃；揉捻烘干：杀青后经揉捻机或者人工揉捻、理条、烘干、摊凉，然后在安装有蒸汽生成器和电热风扇的发酵室发酵12h后，用加湿器在使茶叶水分含量为53％，重复两次，烘干或者自然晾干得多穗柯甜茶与大红袍复配茶。
多穗柯甜茶袋泡茶：以重量份计：取多穗柯甜茶与大红袍复配茶3-10份，荷叶0-10份，绞股蓝0-10份混合均匀，粉碎后过10-40目筛，取粉末用灌装机或经手工灌装成袋，加外包装，得到多穗柯甜茶袋泡茶。
多穗柯甜茶浓缩片：以重量份计：取多穗柯甜茶与大红袍复配茶3-10份，荷叶0-10份，绞股蓝0-10份混合，粉碎后过10-40目筛，将混合后的茶叶加入茶叶重10-30倍的30-95％(v/v)乙醇回流提取2-3次，优选茶叶重15倍的65％(v/v)乙醇回流，滤液在常压或减压浓缩得干浸膏、冷冻干燥或者喷雾干燥得到粉末，粉末过50-90目筛，得到茶粉；干燥的茶粉经压片机压制成片，得到多穗柯甜茶浓缩茶片。
一种多穗柯甜茶与大红袍复配茶瓶装饮料加工方法，其特征在于：将多穗柯甜茶与大红袍复配茶和水的比例按照1：20-40，在90-100℃条件下超声提取两次，然后流入过滤器中过滤，使多穗柯甜茶与大红袍复配茶液与多穗柯甜茶与大红袍复配茶原料分离，过滤后的多穗柯甜茶与大红袍复配茶流入保质处理桶内，作保质处理和质量检验，符合标准再流入自动灌瓶机流水线进行灌瓶、封盖、打码、贴标签、包装、入库，多穗柯甜茶与大红袍复配茶保健饮料制作完成。
一种多穗柯甜茶与大红袍复配茶瓶装饮料另一种加工方法，多穗柯甜茶浓缩片和纯净水按照1:60比例溶解，过滤，将滤液流入保质处理桶内，作保质处理和质量检验，符合标准再流入自动灌瓶机流水线进行灌瓶、封盖、打码、贴标签、包装、入库，多穗柯甜茶与大红袍复配茶保健饮料制作完成。
多穗柯甜茶与大红袍复配茶在降血糖和减肥的应用，见具体实施例6。
本发明提供的多穗柯甜茶和大红袍复配茶的制备方法，提供了将多穗柯甜茶与大红袍制成复配茶、泡袋茶以及浓缩片等的方法，得到了多种多穗柯甜茶制品，充分利用了多穗柯甜茶本身的特点。本发明通过对营养性肥胖c57bl/6j小鼠糖脂代谢的的研究，发现多穗柯甜茶与大红袍复配茶提取物能够显著的降低营养性肥胖小鼠的血糖，其体重也显著下降，因此使其在降血糖、减肥方面的应用。本发明的复配茶既有多穗柯甜茶的甘甜，又有大红袍茶的醇厚，甘冽，是一种理想的保健茶。
文献
《多穗柯甜茶的研究进展》、《乌龙茶减肥作用机制的研究》，
具体实施方式
实施例：1
多穗柯甜茶与大红袍复配茶：采生长15-45天的多穗柯甜茶嫩叶和大红袍嫩叶进行净选，经以下工序加工：杀青：将多穗柯甜茶和大红袍嫩叶按1:0.2-5的比例混合杀青，杀青温度控制在150-180℃；揉捻烘干：杀青后经揉捻机或者人工揉捻、理条、烘干、摊凉，然后在安装有蒸汽生成器和电热风扇的发酵室发酵12h后，用加湿器在使茶叶水分含量为53％，重复两次，烘干或者自然晾干得多穗柯甜茶与大红袍复配茶。
实施例：2
多穗柯甜茶袋泡茶：以重量份计：以重量份计：取多穗柯甜茶3-10份，大红袍3-10份，荷叶0-10份，绞股蓝0-10份混合均匀，粉碎后过10-40目筛，取粉末用灌装机或经手工灌装成袋，加外包装，得到多穗柯甜茶袋泡茶。
实施例：3
多穗柯甜茶浓缩片：以重量份计：取多穗柯甜茶3-10份，大红袍3-10份，荷叶0-10份，绞股蓝0-10份混合，粉碎后过10-40目筛，将混合后的茶叶加入茶叶重10-30倍的30-95％(v/v)乙醇回流提取2-3次，优选茶叶重15倍的65％(v/v)乙醇回流，滤液在常压或减压浓缩得干浸膏、冷冻干燥或者喷雾干燥得到粉末，粉末过50-90目筛得到茶粉；干燥的茶粉经压片机压制成片，得到多穗柯甜茶浓缩茶片。
实施例：4
一种复配多穗柯甜茶和大红袍瓶装饮料加工方法，其特征在于：将多穗柯甜茶与大红袍复配茶和水的比例按照1：20-40，在90-100℃条件下超声提取两次，然后流入过滤器中过滤，使多穗柯甜茶与大红袍复配茶液与多穗柯甜茶与大红袍复配茶原料分离，过滤后的多穗柯甜茶与大红袍复配茶流入保质处理桶内，作保质处理和质量检验，符合标准再流入自动灌瓶机流水线进行灌瓶、封盖、打码、贴标签、包装、入库，多穗柯甜茶与大红袍复配茶保健饮料制作完成。
实施例：5
一种多穗柯甜茶和大红袍复配茶瓶装饮料另一种加工方法，多穗柯甜茶浓缩片和纯净水按照1:60比例溶解，过滤，将滤液流入保质处理桶内，作保质处理和质量检验，符合标准再流入自动灌瓶机流水线进行灌瓶、封盖、打码、贴标签、包装、入库，多穗柯甜茶与大红袍复配茶保健饮料制作完成。
实施例：6
多穗柯甜茶与大红袍复配茶提取物对营养性肥胖c57bl/6j小鼠糖脂代谢的影响
1.1实验材料
1.1.1实验动物及饲养环境
c57bl/6j小鼠，雄性，spf级，4周龄，由中山大学实验动物中心提供。许可证号：scxk(粤)2009-0004。饲养条件：温度20-25℃,湿度55±10％,12h/12h光照黑暗循环，24小时自由饮食饮水。
1.1.2主要药物和试剂
辛伐他汀，杭州默沙东制药有限公司，批号：120689；
多穗柯甜茶提取物，由佛山市金骏康健康科技有限公司提供；
大红袍提取物，由佛山市金骏康健康科技有限公司提供；
多穗柯甜茶与大红袍复配茶提取物，由佛山市金骏康健康科技有限公司提供；
标准饲料和高脂饲料，由广东省动物中心提供；
甘油三酯(tg)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司提供，批号：145411；
总胆固醇(tc)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司提供，批号：143211；
直接高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)测定试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号140421；
直接低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)测定试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号140311；
游离脂肪酸微量测定试剂盒，普利莱基因技术有限公司，批号：el000；罗康全优越型血糖试纸，瑞士罗氏制药公司提供。
1.2实验方法
1.2.l动物模型的制备、分组与给药
c57bl/6j雄性小鼠，随机选取10只为正常对照组，喂以普通标准饲料(饲料配方：粗蛋白18.5％,粗脂肪4.5％,碳水化合物61％。能量比：粗蛋白21％,粗脂肪11％,碳水化合物68％,总能最3.5kcal/g),其余小鼠给予高糖高脂饲料(饲料配方：粗蛋白27％,粗脂肪24％,碳水化合物37％；能量比：蛋白23％,脂肪46％,碳水化合物31％,总能量4.7kcal/g)。喂养12周后，参考体重大于正常组的平均体重±1.78倍标准差和大于正常体重的20％的标准，选取合格的肥胖小鼠，按照体质量均一的原则分为模型组，阳性药辛伐他汀组，多穗柯甜茶提取物剂量组，大红袍提取物剂量组，多穗柯甜茶与大红袍复配茶提取物剂量组，每组10只，组间及组内动物分别作标记。正常对照组给予普通饲料，其余各组仍继续给予高糖高脂饲料喂养。多穗柯甜茶提取物的给药剂量：多穗柯甜茶提取物剂量组300mg/kg体重，大红袍提取物剂量组300mg/kg，多穗柯甜茶与大红袍复配茶提取物剂量组共300mg/kg，用蒸馏水配制成所需浓度，现用现配，每天给药1次，连续给药14周。
辛伐他汀药物剂量3mg/kg体重，用研钵研细，蒸馏水配制成所需浓度，现用现配，每天给药1次，连续给药14周。
模型对照组与正常对照组每天灌服等体积的生理盐水，每天给药1次，连续给药14周。
小鼠口服葡萄糖耐量实验(ogtt)和胰岛素糖耐量实验(itt)
小鼠口服葡萄糖耐量实验(ogtt):小鼠禁食12h(不禁水)后，按各药物组相应剂量灌胃给药，正常组和模型组给予溶剂，每组6只。1h后，各组以2.5g/kg葡萄糖溶液灌胃，分别于0、30、60、120、180min后取尾静脉血用血糖仪测定血糖值，绘制血糖曲线并计算曲线下面积(auc)。
小鼠胰岛素耐量实验(itt):于给药结束前1天，在禁食不禁水的情况下，腹腔注射给予各组小鼠0.75units/kg人胰岛素，于给药前(0min)以及给药后30,60,120和180min尾静脉取血，用血糖仪测定血糖值，绘制血糖曲线并计算曲线下面积(auc)。
1.2.2血糖血脂的测定
给药14周后，动物禁食12h,尾静脉取血一滴，用血糖仪测定空腹血糖；然后眼眶静脉丛取血，室温静置30min以上，以3000rpm离心15min,分离血清，采用试剂盒测定血清总胆固醇、甘油三酯、高、低密度脂蛋白、游离脂肪酸水平。
1.3实验结果
1.3.1各组小鼠给药期间体重变化
表1给药期间各组小鼠体重变化
上述结果表明：与正常组比较，模型组小鼠体重显著增加(p<0.01)。从给药第9周开始，辛伐他汀、多穗柯甜茶提取物组、大红袍茶提取物剂量和多穗柯甜茶与大红袍复配茶提取物剂量组小鼠体重均开始下降，给药结束后辛伐他汀、多穗柯甜茶提取物组、大红袍茶提取物剂量和多穗柯甜茶与大红袍茶提取物剂量组小鼠体重，与模型组比较均有显著性降低(p<0.01)。其中多穗柯甜茶与大红袍复配茶提取物剂量组对小鼠体重下降最多，有减肥的作用，而且起到了协同作用。
1.3.2药物对小鼠口服葡萄糖耐量的影响
表2药物对口服葡萄糖耐量的影响
注：与正常对照组比较，#p<0.05,##p<0.01:与模型组比较*p<0.05,**p<0.01
模型组血糖显著大于正常组(p<0.01),给药后各组小鼠对葡萄糖引起的血糖升高均有不同程度的降低作用，并能明显降低血糖曲线下面积(p<0.05),说明辛伐他汀和多穗柯甜茶提取物均能改善肥胖小鼠的葡萄糖耐量异常。特别是多穗柯甜茶与大红袍复配茶提取物剂量组在降低肥胖小鼠葡萄糖耐量异常表现的最为优异，起到了协同的作用，具有作为降血糖药物应用前景。