本发明属于涉及一种鱼类养殖的饵料。
背景技术
如枯草芽孢杆菌等有益菌已经广泛添加在养殖饲料中，但在鱼类养殖中我们发现，进添加枯草芽孢杆菌对现有饲料的改进效果有限。在饵料的蛋白质来源上，常用的豆粕存在着营养成分不全面，具有一定抗营养因子等缺陷，且由于我国的豆粕大量依赖进口，以豆粕为主的鱼类饵料成本拨动大，造成影响养殖的效益。棉粕、花生粕、菜籽粕等杂粕虽然价格较低，但存在着营养不均衡，抗营养因子无法消除的问题。如何在鲤科为主的家鱼养殖中将现有的饲料改性手段综合优化，提供一种能够降低饵料系数，提高鱼体免疫力的新型饵料组合物成为现有技术中亟待解决的问题。
技术实现要素：
蓝色犁头霉(absidiacoeruleaas3.65)于1963年被分离出后，一直广泛用于生产甾体药物，中国专利文献cn101508960a公开了一种根霉菌株(rhizopussp.b1219，cctccno：m209007)并指出该菌株可以用于发酵生产苯基乳酸，但在固态发酵适用菌株筛选过程中，我们发现采用根霉菌株(rhizopussp.b1219，cctccno：m209007)和蓝色犁头霉(absidiacoeruleaas3.65)共同对特定比例的基础日粮进行固态发酵，可以在提高饵料的生长性能的同时，显著提高鱼体的免疫力。基于此，本发明提供了一种多菌种复合的鱼类饵料，其特征是所述饵料，由固态发酵的基础日粮和枯草芽孢杆菌组成，未经固态发酵的基础日粮中含有重量百分比55％～60％的植物油粕，所述植物油粕由重量比为1：0.5～0.7：0.5～7的豆粕、棉粕和菜籽粕组成，所述枯草芽孢杆菌与基础日粮的比例为106～107cfu/g，组成，所述固态发酵的基础日粮的制备方法为：
1)将蓝色梨头霉(absidiacoeruleaas3.65)和根霉((rhizopussp.b1219，cctccno：m209007))分别培养后制成至菌悬液；
2)将植物油粕粉碎后，按照蓝色梨头霉106～107cfu/g和根霉(absidiacoeruleaas3.65)106～107cfu/g的比例将分别将两种菌悬液与植物油粕充分混合，并调节植物油粕的含水量为35％～45％后，置于24℃～26℃下固态发酵60h～72h，将基础日粮其余组分与经固态发酵的植物油粕混合后，再置于20℃～22℃下固态发酵36h～48h。
一种多菌种复合的鱼类饵料，其特征是所述基础日粮由植物油粕和鱼粉、植物油、预混料、面粉、糠麸组成。所述鱼粉、植物油、预混料、面粉和糠麸的比例为7～9:3～5:0.7～1.3:12～18：12～18:1～1.5。所述糠麸为米糠和麦麸，所述植物油为豆油
所述的一种多菌种复合的鱼类饵料，其特征是所述植物油粕由重量比为1：0.6:0.6的豆粕、棉粕和菜籽粕组成。
所述的一种多菌种复合的鱼类饵料，其特征是所述鲤科家鱼优选鲤鱼、鲫鱼和罗非鱼。
本发明提供的一种多菌种复合的鱼类饵料，通过基础日粮和菌种筛选，发现本发明提供采用优选的菌种对特定配比的植物油粕进行固态发酵处理后，与常规加入枯草芽孢杆菌的饵料相比，能够显著提高鲫鱼等鲤科家鱼的生长性能，尤其能够提高实验鱼体的白细胞吞噬与杀菌能力，从而大幅度提高其免疫力，进而提高实验鱼的抗病能力。还可以对棉粕、菜籽粕等杂粕进行充分利用。在方案筛选中我们意外发现，虽然现有技术中认为添加一定量的枯草芽孢杆菌可以提高鲫鱼等家鱼的生长性能和免疫力，但在饲料中添加特定的蓝色犁头霉和根霉菌株并经过优化条件的固态发酵后，再与一定量枯草芽孢杆菌配伍，在提高生长性能基础上，更可以显著提高鲫鱼等家鱼的免疫力。且在研究中我们发现只有采用蓝色犁头霉和根霉菌株并与和特定配比的植物油粕配伍时才能发挥上述作用，改变菌种或者大幅度改变植物油粕的配比均会对饵料的性能产生负面影响，且在进行固态发酵时，优选的发酵条件(温度、湿度)也对饵料的效果产生了较大的影响，在合理的发酵条件下，无需对植物油粕进行灭菌处理，直接进行接种即可完成固态发酵并产生相应效果。
具体实施方式
本发明提供的一种多菌种复合的鱼类饵料，以如下方法配制，
1)取蓝色犁头霉(absidiacoeruleaas3.65)和根霉(rhizopussp.b1219，cctccno：m209007)经培养基培养后分别制成108cfu/g的菌悬液，所述蓝色犁头霉的培养基配方为1l水中加入葡萄糖15g，蛋白胨5g，玉米浆30g，硝酸铵2g，磷酸二氢钾5g，泡敌0.4g，根霉采用pda培养基。
2)将植物油粕粉碎后，按照蓝色梨头霉1107cfu/g和根霉(absidiacoeruleaas3.65)107cfu/g的比例将分别将两种菌悬液与植物油粕充分混合，并调节植物油粕的含水量为40％后，置于24℃～26℃下固态发酵60h得到发酵植物油粕,将基础日粮其余组分与经固态发酵的基础日粮混合后，再置于20℃～22℃下固态发酵36h～48h得到的发酵基础日粮。
3)将步骤2得到的并加入枯草芽孢杆菌菌剂，充分混合后将混合后物料压制成条状即得，枯草芽孢杆菌与基础日粮(不计菌悬液及后续加入水分)的比例为5×106cfu/g。
实施例及对比例配方见下表(配比均为重量份)
所述预混料采用北京博达生物饲料有限公司生产的鲤鱼1％预混料，每g预混料含有以下营养成分：
维生素a≥400iu，维生素d3100～300iu，维生素e≥7mg，维生素k3≥0.2mg，维生素b1≥0.3mg、维生素b2≥0.5mg、维生素b6≥0.22mg，烟酰胺≥2.5mg、泛酸钙≥2mg、叶酸≥0.2mg、维生素c≥8mg，肌醇≥7mg、铁8～75mg、铜0.875～2.5mg、锌7～20mg、锰2～10mg、碘≥0.03mg、硒0.01～0.05mg，钴0.01～0.2mg。
所述枯草芽孢杆菌菌剂采用乳山韩威生物科技有限公司生产的枯草芽孢杆菌粉剂(有效活菌数≥1010)
对比例1～4的蓝色犁头霉和根霉接种量，固态发酵方法及枯草芽孢杆菌加入量与实施例相同。
对比例6
按照实施例3的基础日粮配方，仅加入蓝色犁头霉不加入根霉，枯草芽孢杆菌的加入量调节同实施例3。
对比例7
按照实施例3的基础日粮配方，仅加入根霉不加入蓝色犁头霉，枯草芽孢杆菌的加入量调节同实施例3。
对比例8
按照实施例3的配方，区别在于将基础日粮其余组分与经固态发酵的基础日粮混合后不进行固态发酵。
对比例9
按照实施例4的基础日粮配方，不加入枯草芽孢杆菌，也不加入蓝色犁头霉进行固态发酵。
饲养效果对比例
试验塘为86cm×56cm×48cm的塑料池，试验鲫鱼先在试验塘内暂养，以对比例6(基础日粮)饵料投喂l周后开始正式试验。每天分别在09：00～10：00、16：30～17：00投喂1次，按试验鱼体重4.5％投喂饵料(按基础日粮计算投喂量)。饲养前用强氯精进行消毒。试验期间使用空气压缩24h不间断增氧：试验用水使用经曝气处理后的自来水，ph6.8-7.5，溶氧8-10mg/l，水温20～24℃；硫化物、非离子氨、重金属hg、cd、cu、pb、as符合渔业水质标准(gbl1607-89)；每3d换水1次，每次换水1/3。连续饲养42d，检测正式饲养开始前后的鲫鱼体重变化(初、末体重)，增重率、血清sod活力、白细胞吞噬活性和白细胞
增重倍数＝(平均末质量-平均初质量)/平均初质量
样品采集
每个实验组取鲫鱼5尾。用一次性无菌注射器分别于鱼尾部静脉抽血，将5尾鱼的血液充分混合后分为2份，其中l份以肝素抗凝，制备抗凝血，供检测白细胞吞噬活性；将另1份血液首先在室温下静置lh待其凝固，置4℃冰箱保持4h后，于4℃条件下以4000r/min离心10min，收集上层血清，保存在4℃冰箱中，备用。
血清sod活力测定采用sod试剂盒测定，方法参照试剂盒说明书进行。
白细胞吞噬活性测定
取每尾鱼的白细胞悬液25μl，细胞悬液中加入0.5mlhank’s液和100ul浓度为108cfu/ml的ahydrophila活菌液，混匀。置于25"c下孵育40min后，取出以2000r/min离心10min，以分离白细胞和胞外细菌，弃去上层液，下层即为吞噬细菌的细胞层，用hank’s液洗涤两次后，加入1.ml2％的tween20水溶解细胞和lmlmem，置于25℃温箱孵育16h。之后再加入90μlmtt(四甲基偶氮唑盐)溶液，轻度振荡15min后，用721分光光度计于600nm处比色，得到od值。
白细胞杀菌活性测定
每尾实验鱼的白细胞悬液中吸取50μl，加入1mlhank’s液和200μl浓度为108cfu/ml的ahydrophila活菌液，混匀。置于25℃下孵育60min后，2000r/min离心10min，弃上清液0.5ml，用hank’s液将沉淀清洗一次，加0.5mlhank’s液重悬，分装成两管，每管装0.5ml，再置于25℃下分别孵育至0，80min，定时取出，加2.5ml2％的tween20溶解细胞，再加入1.25mlmem，培养和比色方法同白细胞吞噬活性测定方法所述。杀菌性能用杀菌指数(bacterialindex)依下式判定，即：
杀菌指数(bi)＝t0时间还原的mtt的od值/t80时间还原的mtt的od值
bi<1.0为具有杀菌能力；bi值升高，杀菌活能力降低；bi>1.0，则无杀菌能力。
分组及实验数据情况见下表(n＝5，means±s)：
实验结果表明，采用实施例1～3饵料饲喂的鲫鱼的生长性能显著高于各对比例(p＜0.05)，在各实施例中实施例3鲫鱼的增重率也明显高于实施例1～2。此外血清sod检测、白细胞吞噬和杀菌活性检测也表明，采用实施例1～3饵料饲喂的实验组1～3鲫鱼的血清sod含量和白细胞吞噬活性均高于采用对比例的各实验组，说明实施例1～3的饵料在通过优选处方与制备工艺，显著提高鲫鱼了的免疫力。此外，在各对比例中，仅饲喂基础日粮的对比例9其增重率，血清sod含量、白细胞吞噬与杀菌活性等免疫力指标均最低。其余对比例1～5的各项指标虽优于对比例9，但也低于各实验组，说明本发明优选的植物油粕配比和菌种、发酵工艺，产生的协同效果，能够明显提高实验鲫鱼的生长性能和免疫力。