本发明属于鱼类饵料。
背景技术
传统的鱼类养殖饵料多采用植物油粕作为蛋白质源，植物油粕中使用量最大的为豆粕，但豆粕的营养物质并不均衡，且由于我国的豆粕大量依赖进口，豆粕的价格随国际市场波动较大，造成鱼类养殖中的饵料成本波动较大，对鱼类养殖，尤其传统经济类家鱼的养殖造成不良影响。在饲料中添加益生菌或者对部分饲料成分进行生物发酵是现有的改进饵料的手段。如枯草芽孢杆菌等已经被批准作为饲料添加剂使用，但在鲤科为主的经济类家鱼的养殖中如何将现有的饲料改性手段综合优化，提供一种能够改善生长特性，提高鱼体免疫力的饵料成为现有技术中亟待解决的问题。
技术实现要素：
中国专利文献cn101508960a公开了一种根霉菌株(rhizopussp.b1219，cctccno：m209007)并指出该菌株可以用于发酵生产苯基乳酸，但在固态发酵适用菌株筛选过程中，我们发现采用根霉菌株(rhizopussp.b1219，cctccno：m209007)与特定的植物油粕配比固态发酵后可以显著提高饵料饲喂经济类家鱼的生长特性，并且对免疫力也有所提高。，
基于上述发现，为解决前述技术问题，本发明提供了一种经过固态发酵处理的鱼类养殖复合饵料，其特征是所述饵料组合物，由经过固态发酵处理的基础日粮和枯草芽孢杆菌组成，未经固态发酵的基础日粮配方中含有重量百分比55％～60％的植物油粕，所述枯草芽孢杆菌与基础日粮的比例为5～10×106cfu/g，所述植物油粕由重量比为1：0.2～0.3:0.6～0.8的豆粕、花生粕和棉粕组成，固态发酵处理基础日粮的的方法为：
1)将根霉菌株(rhizopussp.b1219，cctccno：m209007)培养后制成至菌悬液；
2)将植物油粕粉碎后并混合后，按照106～107cfu/g的比例将菌悬液与植物油粕充分混合，并调节植物油粕的含水量为35％～45％后，置于24～26℃下固态发酵60h～72h。
所述的一种经过固态发酵处理的鱼类养殖复合饵料，所述基础日粮由植物油粕和鱼粉、植物油、预混料、面粉、糠麸组成，所述鱼粉、植物油、预混料、面粉、糠麸，所述鱼粉、植物油、预混料、面粉和糠麸的比例为7～9:3～5:0.7～1.3:12～18：12～18:1～1.5。所述糠麸为米糠和麦麸，所述植物油为豆油。
所述的一种经过固态发酵处理的鱼类养殖复合饵料，其特征是所述植物油粕由重量比为1：0.25:0.7的豆粕、花生粕、棉粕组成。
所述的一种经过固态发酵处理的鱼类养殖复合饵料，其特征是所述鲤科家鱼优选鲤鱼、鲫鱼和罗非鱼，特别优选为鲫鱼和罗非鱼。
本发明提供的种经过固态发酵处理的鱼类养殖复合饵料，通过配方筛选发现本发明复合饵料，采用优选的菌株对特定配比的植物油粕进行固态发酵处理后，与常规加入枯草芽孢杆菌的饵料相比，能够显著提高鲫鱼等鲤科家鱼的生长性能和免疫力。在方案筛选中我们意外发现，采用特定菌株的根霉对基础日粮中的植物油粕进行低温(24℃～26℃)固态发酵后，再与一定量枯草芽孢杆菌配伍，可以显著提高经济类家鱼的生长性能和免疫力。虽然现有技术中公开了该菌株用于生产苯基乳酸的用途，但在研究中我们发现，该根霉菌株只有和特定配比的植物油粕配伍时才能发挥上述改善饵料性能的作用，改变菌株、培养条件或者大幅度改变植物油粕的配比均会对饵料的性能产生负面影响。
具体实施方式
本发明提供的一种经过固态发酵处理的鱼类养殖复合饵料，以如下方法配制，
1)取一种根霉菌株(rhizopussp.b1219，cctccno：m209007)经pda培养基28℃培养后制成108cfu/g的菌悬液。
将植物油粕粉碎后，按照107cfu/g的比例将菌悬液与植物油粕充分混合，并调节植物油粕的含水量为40％后，置于24℃～26℃下固态发酵72h得到发酵植物油粕。
2)将步骤1)得到的发酵植物油粕与基础日粮中其余组分混合，并加入枯草芽孢杆菌菌剂，充分混合后将混合后物料压制成条状即得，枯草芽孢杆菌与基础日粮(不计菌悬液及后续加入水分)的比例为5×106cfu/g。
实施例及对比例配方见下表(配比均为重量份)
所述预混料采用北京博达生物饲料有限公司生产的鲤鱼1％预混料，每g预混料含有以下营养成分：
维生素a≥400iu，维生素d3100～300iu，维生素e≥7mg，维生素k3≥0.2mg，维生素b1≥0.3mg、维生素b2≥0.5mg、维生素b6≥0.22mg，烟酰胺≥2.5mg、泛酸钙≥2mg、叶酸≥0.2mg、维生素c≥8mg，肌醇≥7mg、铁8～75mg、铜0.875～2.5mg、锌7～20mg、锰2～10mg、碘≥0.03mg、硒0.01～0.05mg，钴0.01～0.2mg。
所述枯草芽孢杆菌菌剂采用乳山韩威生物科技有限公司生产的枯草芽孢杆菌粉剂(有效活菌数≥1010)
对比例1～3的根霉接种量，固态发酵方法及枯草芽孢杆菌加入量与实施例相同。
对比例4
按照实施例4的配方与工艺，区别在于将固态发酵的条件改为在28℃～30℃条件下发酵48h、
对比例5
按照实施例4的基础日粮配方，不加入根霉，将枯草芽孢杆菌的加入量调节为107cfu/g。
对比例6
按照实施例4的基础日粮配方，不加入枯草芽孢杆菌，也不加入蓝色犁头霉进行固态发酵。
饲养效果对比例
试验塘为86cm×56cm×48cm的塑料池，试验鲫鱼先在试验塘内暂养，以对比例6(基础日粮)饵料投喂l周后开始正式试验。每天分别在09：00～10：00、16：30～17：00投喂1次，按试验鱼体重4.5％投喂饵料(按基础日粮计算投喂量)。饲养前用强氯精进行消毒。试验期间使用空气压缩24h不间断增氧：试验用水使用经曝气处理后的自来水，ph6.8-7.5，溶氧8-10mg/l，水温20～24℃；硫化物、非离子氨、重金属hg、cd、cu、pb、as符合渔业水质标准(gbl1607-89)；每3d换水1次，每次换水1/3。连续饲养42d，检测正式饲养开始前后的鲫鱼体重变化(初、末体重)，增重率、血清sod活力以及白细胞白细胞吞噬活性
增重倍数＝(平均末质量-平均初质量)/平均初质量
样品采集
每个实验组取鲫鱼5尾。用一次性无菌注射器分别于鱼尾部静脉抽血，将5尾鱼的血液充分混合后分为2份，其中l份以肝素抗凝，制备抗凝血，供检测白细胞吞噬活性；将另1份血液首先在室温下静置lh待其凝固，置4℃冰箱保持4h后，于4℃条件下以4000r/min离心10min，收集上层血清，保存在4℃冰箱中，备用。
血清sod活力测定采用sod试剂盒测定，方法参照试剂盒说明书进行。
白细胞吞噬活性测定
取每尾鱼的白细胞悬液25μl，细胞悬液中加入0.5mlhank’s液和100ul浓度为108cfu/ml的ahydrophila活菌液，混匀。置于25"c下孵育40min后，取出以2000r/min离心10min，以分离白细胞和胞外细菌，弃去上层液，下层即为吞噬细菌的细胞层，用hank’s液洗涤两次后，加入1.ml2％的tween20水溶解细胞和lmlmem，置于25℃温箱孵育16h。之后再加入90μlmtt(四甲基偶氮唑盐)溶液，轻度振荡15min后，用721分光光度计于600nm处比色，得到od值。
分组及实验数据情况见下表(n＝5，means±s)：
实验结果表明，采用实施例1～4饵料饲喂的鲫鱼的生长性能显著高于各对比例(p＜0.05)，且实施例4的增重率较其他实施例高。血清sod检测和白细胞吞噬活性检测表明，采用实施例1～4饵料饲喂的实验组1～4鲫鱼的血清sod含量和白细胞吞噬活性均高于采用对比例的各实验组，说明实施例1～4的饵料能够提高鲫鱼的免疫力。此外，在各对比例中，仅饲喂基础日粮的对比例6其增重率、血清sod含量和白细胞吞噬活性免疫力均最低。对比例1～5的上述三项指标虽高于对比例6，但也低于各实验组，且对比例4虽然仅有固态发酵工艺与实施例不同，但其效果也低于实验组4，说明本发明优选的植物油粕配比通过与特定菌株和优选的固态发酵工艺结合能够产生协同效果，明显提高实验鲫鱼的生长性能和免疫力。