非洲猪瘟病毒和经典猪瘟病毒的化学缓疫的制作方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年3月2日提交的题为“用中链脂肪酸灭活非洲猪瘟病毒(asfv)和经典猪瘟病毒(csfv)(inactivationofvirusessuchasafricanswinefevervirus(asfv)andclassicalswinefevervirus(csfv)withmediumchainfattyacids)”的美国临时专利申请序列号62/637,825和于2018年12月17日提交的题为“非洲猪瘟病毒的化学缓疫(chemicalmitigationofafricanswinefevervirus)”的美国临时专利申请序列号62/780,740的优选权权益，每个申请均通过援引整体并入本文。

发明背景

发明领域

本发明广泛地涉及在动物饲料、饲料成分和宠物食品中抑制非洲猪瘟病毒和/或经典猪瘟病毒的方法。

相关技术描述

已经显示中链脂肪酸对特定的国内病原体，猪流行性腹泻病毒(pedv)和沙门氏菌属菌种(salmonellasp.)有效(于2017年12月14日公开的第2017/0354167号美国专利申请公开，其通过援引整体并入本文)。

非洲猪瘟病毒和经典猪瘟病毒是已知通过口服途径传播的外来动物疾病。具体地，非洲猪瘟病毒(asfv)是非常大的复杂dna病毒，它在世界中最大的猪肉生产国(中国)迅速蔓延。asfv引起猪的高死亡率，并且目前对北美和大多数欧洲国家是外来动物疾病。目前没有有效的疫苗，并且已知病毒通过口服途径传播。asfv能够在经历模拟跨洋运输的各种环境条件的饲料和饲料成分中存活。asfv是非常独特的双链dna病毒，并且是非洲猪瘟病毒科(asfarviridae)和非洲猪瘟病毒属(asfivirus)中的唯一病毒。重要地，asfv没有合适的替代病毒。经典猪瘟病毒(csfv)是黄病毒科(flaviviridae)中的单链rna病毒。猪流行性腹泻病毒(pedv)与任一种病毒无关，并且属于冠状病毒科(coronaviridae)。这三种病毒的基因组的大小非常不同，与csfv的12.3kb和asfv的190kb相比，pedv为28kb。众所周知，病毒在环境中的稳定性和对消毒剂的敏感性方面差异很大。即使同科内的病毒也可以在灭活率方面具有不同的特性，而这三种病毒均不属于同科。公开的研究比较了引起外来动物疾病的几种病毒之间的稳定性，表明存在明显变化。另外，其它先前公开的工作表明在pedv、asfv和牛病毒性腹泻病毒(bvdv，同科中的病毒并且用作csfv的替代物)之间在饲料成分中的稳定性方面的明显变化。饲料成分稳定性方面的可变性将预测对mcfa的敏感性和缓疫方面的差异。因此，在没有针对病毒本身的缓疫剂的直接证据的情况下，针对其它病毒或细菌的缓疫剂的效果不能延伸或转化至asfv或csfv。

需要的是有效缓疫(例如，灭活)动物饲料和饲料成分中的asfv和csfv，同时对猪和其它动物的口服给药也是安全的治疗。

技术实现要素：

本申请描述了用于抑制动物饲料或动物饲料成分中的非洲猪瘟病毒和/或经典猪瘟病毒的方法。方法包括将化学缓疫剂引入到饲料或饲料成分中。化学缓疫剂包括(基本上由以下组成为或甚至由以下组成)：中链脂肪酸和/或精油，并且基于视为100重量％的动物饲料或饲料成分的总重量，化学缓疫剂以小于2重量％(但通常至少约0.125重量％)的包含率引入到饲料或饲料成分中。

在另一个实施方式中，提供了化学缓疫剂，用于抑制动物饲料或动物饲料成分中的非洲猪瘟病毒和/或经典猪瘟病毒的用途。化学缓疫剂包含中链脂肪酸和/或精油。

本文还描述了对非洲猪瘟病毒和/或经典猪瘟病毒具有抗性的经处理的动物饲料和/或动物饲料成分。基于视为100重量％的动物饲料或饲料成分的总重量，饲料或饲料成分包括约0.125重量％至小于2重量％的化学缓疫剂。化学缓疫剂包括中链脂肪酸和/或精油。用于本发明的用途的示例性的经处理的动物饲料或动物饲料成分包括完全猪饲料、血粉、猪肉骨粉(mbm)、喷雾干燥的动物血浆、羽毛粉、禽血粉、家禽副产品粉、维生素d、赖氨酸盐酸盐、氯化胆碱、大豆粉、干宠物粗粮及其混合物。

附图说明

本专利或申请文件含有至少一个彩色绘制的附图。经要求且支付必要的费用，专利局将提供具有彩色附图的本专利或专利申请公开的副本。

图(fig.)1是显示暴露于不同浓度的1:1:1mcfa共混物的asfv(菌株ba71v)的剂量响应灭活曲线的图，其中数据显示为暴露于0.125％至2.0％的mcfa浓度之后的滴度，以及与阳性对照相比病毒浓度降低的百分比；

图2是显示在30天跨境模型的过程中asfvgeorgia2007基因组的检测的系列图，其中数据显示为在接种后1、8、17和30天时一式两份的平均循环阈值(ct)值；以及

图3是显示在30天跨境模型结束时通过qpcr测量的在未处理的对照(空心条)和用mcfa在28dpi时处理的样品(黑色条)中asfvdna的量的图；

图4是显示暴露于不同浓度的1:1:1mcfac6:c8:c10共混物的csfv(brescia分离株)的剂量响应灭活曲线的图，其中数据显示为暴露于0.125％至2.0％的mcfa浓度之后的滴度，以及与阳性对照相比病毒浓度降低的百分比；以及

图5a是来自暴露于或未暴露于mcfa的猪肾细胞上的csfvbrescia的间接荧光抗体检测的实验的阳性对照图像；

图5b是来自用0.625％mcfa处理的猪肾细胞上的csfvbrescia的间接荧光抗体检测的实验的图像；以及

图5c是来自暴露于或未暴露于mcfa的猪肾细胞上的csfvbrescia的间接荧光抗体检测的实验的阴性对照图像。

优选实施方式的详细描述

本发明总体上涉及抑制在动物饲料、饲料成分和宠物食品中的非洲猪瘟病毒(asfv)和/或经典猪瘟病毒(csfv)的方法。更具体地，本发明涉及化学缓疫剂，用于抑制各种类型的动物和宠物食品成分，以及完全饲料膳食和宠物食品产品中的asfv和/或csfv的用途。总体上，化学缓疫剂包括中链脂肪酸和/或精油。如本文使用，“抑制”或“抑制”是指与未处理的对照相比，目标微生物(即，asfv或csfv)的可测量水平的降低或微生物生长速率的减小。在一种或多种实施方式中，根据本发明的方法使用有效量的化学缓疫剂以抑制动物饲料或动物饲料成分中的asfv和/或csfv，例如抑制至低于通过rt-pcr和/或细胞培养中的病毒分离的检测水平的浓度。如本文使用，“有效量”是指能够提供足以实现所需性能改善的生物可利用水平的活性化合物(例如，中链脂肪酸和/或精油)的量。在优选实施方式中，根据本发明的方法有利地适用于动物饲料成分的运输和储存。

用于本发明的一种或多种实施方式中的化学缓疫剂可以包括中链脂肪酸和/或精油。在一种或多种实施方式中，化学缓疫剂包括(基本上由以下组成为或甚至由以下组成)：中链脂肪酸，并且更具体地至少一种中链脂肪酸。中链脂肪酸是具有6个至12个碳原子的脂肪族尾部的酸。在一种或多种实施方式中，用于本发明的中链脂肪酸包括己酸、辛酸、癸酸和/或月桂酸。因此，在某些实施方式中，化学缓疫剂选自由以下组成的组：己酸、辛酸、癸酸、月桂酸及其混合物。然而，在某些其它实施方式中，化学缓疫剂不含月桂酸。因此，在此类实施方式中，化学缓疫剂可以选自由以下组成的组：己酸、辛酸、癸酸及其混合物。在一种或多种实施方式中，可以使用中链脂肪酸的共混物。例如，在一种或多种实施方式中，可以将两种或更多种中链脂肪酸的共混物引入到饲料或饲料成分中。在一种或多种实施方式中，将己酸、辛酸和癸酸的共混物以约1:1:1(等份)的重量比引入到饲料或饲料成分中。这种组合增加了中链脂肪酸的溶解度，并且在口服给药时有效地灭活病毒以及改善猪的生长。然而，在本发明的范围内，可以使用包含其它重量比的己酸、辛酸和癸酸的共混物。

在一种或多种实施方式中，化学缓疫剂包括(基本上由以下组成为或甚至由以下组成)：精油，并且更具体地至少一种精油。精油是含有源生自植物的挥发性芳香族化合物的浓缩疏水液体。存在可用于本发明的一个或多个实施方式的多种不同的精油。这些精油的非排他性列表包括：琼脂油、ajwain油、当归根油、茴香油、阿魏、秘鲁香脂、罗勒油、月桂油、佛手柑油、黑胡椒、布枯油、桦树、樟树、大麻花精油、蒿子油、小豆蔻籽油、胡萝卜籽油、雪松油、春黄菊油、菖蒲根、肉桂油、岩蔷薇属物种、香橼、香茅油、鼠尾草、丁香油、咖啡、芫荽、艾菊油(艾菊叶油)、木香根、蔓越莓籽油、荜澄茄、小茴香油/黑籽油、柏树、莎草、咖喱叶、茚蒿油、莳萝油、土木香、桉树油、小茴香籽油、胡芦巴油、枞木、乳香油、高良姜、枫子香、香叶油、姜油、麒麟草、西柚油、指甲花油、蜡菊属、山核桃坚果油、山葵油、牛膝草、爱达荷州艾菊、茉莉油、杜松浆果油、月桂(laurusnobilis)、薰衣草油、杜香、柠檬油、柠檬草、青柠、山苍子(litseacubeba)油、沉香(linaloe)、柑橘、马郁兰、白千层见茶树油(melaleucaseeteatreeoil)、蜂花油(蜂蜜叶)、野薄荷(menthaarvensis)油/薄荷油、辣木油、冬季香薄荷(mountainsavory)、艾蒿油、芥子油(精油)、没药油、桃金娘、印度楝油或印度楝树油、橙花油、肉豆蔻、橙油、牛至油、鸢尾草油、圣檀木、洋芹油、广藿香油、紫苏精油、胡薄荷油、椒样薄荷油、苦橙叶、松油、罗文莎叶、红刺柏、罗马洋甘菊、玫瑰油、玫瑰果油、迷迭香油、红木油、鼠尾草油、檀香油、黄樟油、香薄荷油(savoryoil)、五味子油、绿薄荷油、甘松、云杉、八角茴香油、柑橘、龙蒿叶油、茶树油、百里香油、铁杉、姜黄、缬草、香根草油(岩兰草油)、西红雪松、冬青、蓍草油、依兰依兰和莪术。在一种或多种实施方式中，化学缓疫剂选自由以下组成的组：大蒜油树脂、姜黄油树脂、辣椒油树脂、迷迭香提取物、野生牛至精油及其混合物。在一种或多种实施方式中，可以使用精油的共混物。例如，在一种或多种实施方式中，可以将两种或更多种精油的共混物引入到饲料或饲料成分中。在一种或多种实施方式中，将包含等份的大蒜油树脂、姜黄油树脂、辣椒油树脂、迷迭香提取物和野生牛至精油的精油的共混物引入到饲料或饲料成分中。然而，在本发明的范围内，可以使用包含其它重量比的大蒜油树脂、姜黄油树脂、辣椒油树脂、迷迭香提取物和野生牛至精油的共混物。

在一种或多种实施方式中，可以将包括(基本上由以下组成或甚至由以下组成)：中链脂肪酸和精油，并且更具体地一种或多种中链脂肪酸和一种或多种精油的共混物，用作化学缓疫剂。然而，在某些其它实施方式中，除了中链脂肪酸之外，不使用精油或其它类型的缓疫剂。另外，本发明的实施方式避免使用毒性化学品，例如甲醛，其没有被引入动物饲料、饲料成分或宠物食品中。因此，在一种或多种实施方式中，化学缓疫剂基本上由以下组成(或甚至由以下组成)：一种或多种中链脂肪酸。在某些优选实施方式中，化学缓疫剂基本上由以下组成(或甚至由以下组成)：己酸、辛酸和癸酸的共混物。

虽然可以使用任何有效量的化学缓疫剂，但在一种或多种实施方式中，基于视为100重量％的饲料或饲料成分的总重量，化学缓疫剂以约0.01重量％至约10重量％，优选约0.05重量％至约5重量％，更优选约0.1重量％至约2重量％，并且最优选约0.5重量％至约0.9重量％的包含率被引入动物饲料(包括宠物食品)或饲料成分。有利地，本文描述的化学缓疫剂，并且特别是中链脂肪酸在低至0.6重量％(对于asfv)和0.5重量％(对于csfv)的包含率下是asfv和csfv的有效灭活剂(即，4-log减少)，该量远低于现有技术中对其它微生物显示为有效的剂量。因此，在一种或多种实施方式中，基于视为100重量％的饲料或饲料成分的总重量，化学缓疫剂以小于2重量％、小于1.5重量％、小于1重量％、小于0.9重量％、小于0.8重量％、小于0.7重量％或小于0.6重量％的包含率被引入动物饲料或饲料成分。在一种或多种实施方式中，还可以使用更低剂量，例如当不需要asfv或csfv的4-log减少时。在一种或多种此类实施方式中，基于视为100重量％的饲料或饲料成分的总重量，化学缓疫剂可以以约0.125重量％至约0.5重量％的包含率被引入动物饲料(包括宠物食品)或饲料成分。因此，在某些其它实施方式中，基于视为100重量％的饲料或饲料成分的总重量，化学缓疫剂以至少0.125重量％、至少0.25重量％、至少0.5重量％、至少0.6重量％、至少0.7重量％、至少0.8重量％、至少0.9重量％或至少1重量％的包含率被引入动物饲料或饲料成分。

在一种或多种实施方式中，除了中链脂肪酸和/或精油之外，还可以将硫酸氢钠添加到动物饲料或饲料成分中。硫酸氢钠是被fda认为是“一般认为安全”(gras)且“天然产物”的酸式盐。在一种或多种实施方式中，硫酸氢钠可以溶解在溶液中并且施加于动物食品或食品成分的表面以防止或减少细菌生长。在一种或多种实施方式中，将硫酸氢钠溶液施加于干宠物食品或宠物食品成分的表面。例如，可以将溶液施加于干狗粮(粗粮)或干猫粮的表面。在一种或多种实施方式中，基于视为100重量％的饲料或饲料成分的总重量，可以将溶液施加于饲料或成分的表面，以便以约0.1重量％至约2重量％，更优选约0.15重量％至约1.5重量％，甚至更优选约0.2重量％至约1重量％的包含率提供硫酸氢钠。

根据本发明使用的化学缓疫剂可以用于处理多种动物饲料或动物饲料成分。然而，在一种或多种实施方式中，根据本发明的方法特别适合用于猪饲料和饲料成分。在此类实施方式中，动物饲料或动物饲料成分可以选自由以下组成的组：完全猪日粮、血粉、猪肉骨粉(mbm)和喷雾干燥的动物血浆。在一种或多种实施方式中，动物饲料成分可以包括选自由以下组成的组的成分：维生素d、赖氨酸盐酸盐、氯化胆碱和大豆粉。在其它实施方式中，化学缓疫剂可以与宠物食品和宠物食品成分一起使用。在一种或多种实施方式中，宠物食品和宠物食品成分包括干狗粮(粗粮)和/或猫粮。术语“宠物食品”意指任何旨在被宠物食用的组合物，并且“干”食品在本领域中通常是指水分含量为约小于20％(优选小于约15％，更优选小于约10％)的宠物食品。术语“粗粮(kibble)”在本领域中用于指干宠物食品的颗粒。

根据本发明一个或多个实施方式的方法可以用于生产动物或宠物饲料。因此，在本发明的一个实施方式中，提供了动物饲料或宠物食品，基于视为100重量％的饲料的总重量，其包含约0.01重量％至约10重量％，更优选约0.05重量％至约5重量％，甚至更优选约0.1重量％至约2重量％，并且最优选约0.5重量％至约0.9重量％的化学缓疫剂或化学缓疫剂的共混物(例如本文描述的化学缓疫剂和共混物)。在一种或多种实施方式中，提供了动物饲料或宠物食品，基于视为100重量％的饲料的总重量，其包含小于2重量％、小于1.5重量％、小于1重量％、小于0.9weight％,小于0.8重量％、小于0.7重量％或小于0.6重量％的化学缓疫剂或化学缓疫剂的共混物(例如本文描述的化学缓疫剂和共混物)。在一种或多种实施方式中，提供了动物饲料或宠物食品，基于视为100重量％的饲料的总重量，其包含约0.125重量％至约0.5重量％的化学缓疫剂或化学缓疫剂的共混物(例如本文描述的化学缓疫剂和共混物)。在一种或多种实施方式中，提供了动物饲料或宠物食品，基于视为100重量％的饲料的总重量，其包含至少0.5重量％、至少0.6重量％、至少0.7重量％、至少0.8重量％、至少0.9重量％或至少1重量％的化学缓疫剂或化学缓疫剂的共混物(例如本文描述的化学缓疫剂和共混物)。

本发明的实施方式特别适合用于饲料和饲料成分的运输，特别是国际运输和储存。在本发明之前，尚未显示中链脂肪酸是对美国工业而言外来的疾病，特别是病毒的有效缓疫剂。饲料或成分可能在加工时被asfv和/或csfv污染。有利地，本发明的实施方式特别适于灭活和抑制这些污染物的扩散。因此，在一种或多种实施方式中，根据本发明的方法包括在加工之后将化学缓疫剂引入到饲料或饲料成分中。化学缓疫剂可以与饲料或饲料成分混合足够的时间以提供均匀的混合物。在一种或多种实施方式中，根据本发明的方法可以在加工后至少约90天的运输和储存、加工后至少约60天的运输和储存、加工后至少约40天的运输和储存，或者加工后至少约30天的运输和储存中防止或降低饲料和/或成分中的asfv和/或csfv。

本发明的实施方式有利地提供了预防或降低动物或宠物饲料和成分中的asfv和/或csfv的安全替代方法。使用有害化学品的现有方法已经显示出对动物的蛋白质和氨基酸代谢的负面影响。与现有方法不同，本发明以发现实现asfv和/或csfv的有效缓疫的剂量使用基本上无害的化学缓疫剂。根据本发明使用的化学缓疫剂是天然替代品，其基本上不会对工人或环境的安全造成风险。

在阅读本文中的公开内容和以下可行性实施例之后，本发明的各种实施方式的其它优点对于本领域技术人员将是显而易见的。将理解的是，除非本文另外指出，否则本文描述的各种实施反式不一定相互排斥。例如，在一个实施方式中描述或描绘的特征也可以被包括在其他实施方式中，但是不是必须被包括。因此，本发明涵盖本文描述的具体实施方式的各种组合和/或集成。

如本文使用，短语“和/或”当用于两个或更多个项目的列表中时，意指可以单独采用所列项目中的任一个或可以采用所列项目中的两个或更多个的任何组合。例如，如果组合物被描述为含有或排除组分a、b和/或c，则组合物可以含有或排除单独的a；单独的b；单独的c；a和b的组合；a和c的组合；b和c的组合；或a、b和c的组合。

本说明书还使用数值范围来量化与本发明的各种实施方式相关的某些参数。应该理解的是，当提供数值范围时，这些范围将被解释为为仅陈述该范围的较低值的权利要求限定以及仅陈述该范围的较高值的权利要求限定提供文字支持。例如，公开的约10至约100的数值范围为列举“大于或等于约10”(没有上限)的权利要求和列举“小于或等于约100”(没有下限)的权利要求提供文字支持。

实施例

以下实施例阐述了对饲料和饲料成分中的asfv和csfv的化学缓疫策略的有效性。然而，应理解，这些实施例仅作为举例说明而提供，且其中的任何内容均不应视为对本发明总体范围的限制。

开发了用于稀释和混合各种浓度的中链脂肪酸共混物(mcfa)与asfv(ba71v分离株)和csfv(brescia分离株)的方案和程序。这项工作已经在它们各自的细胞培养物，绿猴肾细胞(verocells)和猪肾细胞中进行。作为第一步，通过以1:1:1的体积比混合等体积的c6:c8:c10(己酸：辛酸：癸酸)制备mcfa。然后，以10％至0.625％的浓度制备mcfa处理物，并且与标准高浓度的病毒(10⁶tcid50/ml)混合。已经证实mcfa不破坏用于这些实验的细胞培养物，并且在每个测试中包括阳性和阴性对照。初步结果表明，mcfa在10％至0.625％的所有测试剂量下均能有效地灭活csfv和asfv二者。

实施例i

非洲猪瘟病毒测试

使用特定方案和程序来稀释并混合20％dmso中的各种浓度的中链脂肪酸共混物与在vero细胞中的asfv(ba71v分离株)。作为第一步，通过在20％dmso中以1:1:1的体积比等体积混合c6:c8:c10来制备中链脂肪酸。然后，以2％至0.125％的浓度制备中链脂肪酸，并且与标准高浓度的asfv(10⁶tcid50/ml)混合。在每个测定中包括阳性对照以确定病毒的剂量响应灭活。

结果(表1，图1)表明在0.7％至2.0％的所有测试剂量下，中链脂肪酸处理有效地将asfv灭活至通过间接荧光抗体测试不可检测的水平。在0.6％至0.125％的中链脂肪酸浓度下观察到asfv的剂量依赖性降低。在细胞培养物中测试的中链脂肪酸的最低浓度(0.125％中链脂肪酸)下，存在约0.75log10tcid50/ml的病毒滴度的降低。在0.25％中链脂肪酸包含率时，病毒滴度降低了约98.2％。在0.6％中链脂肪酸包含率时，可以看到约4-log的病毒滴度的降低。4-log的病毒滴度的降低是世界动物健康组织(oie)描述的病毒灭活的标准。总之，我们已经证明中链脂肪酸是细胞培养物中asfv的有效灭活剂，并且约4-log降低所需的剂量是0.6％，该剂量远低于标准的1％包含率。

还使用asfvgeorgia2007分离株在模拟变化的环境温度和湿度条件的30个跨境模型中测试了在9种高危成分中的1％(重量％)中链脂肪酸包含率的asfv存活。asfvgeorgia2007是目前中国流通的高毒性asfv分离株。高风险饲料成分包括传统的大豆粉、有机大豆粉、大豆油饼、胆碱、潮湿的猫粮、潮湿的狗粮、干狗粮、猪肉香肠肠衣和完全饲料。通过qpcr进行asfvdna的检测和定量，并且在未处理的接种饲料与中链脂肪酸处理的接种饲料之间进行比较。在第一项研究中，在0接种后天数(dpi)、在asfv接种之前立即用包含以1:1:1的比例的c6:c8:c10的1％中链脂肪酸处理饲料。pcr结果表明所有未处理的对照样品和0dpimcfa处理的样品在第1、8、17和30天时asfvdna呈阳性(图2)。在图2中，显示了未处理的对照(空心方块)和在0dpi、在asfv-接种之前立即用mcfa处理的样品(黑色方块)的数据。所有样品在30天跨境模型结束时均具有可检测的asfvdna。ct值>40被认为是阴性的。注：pcr检测病毒dna但不检测其感染性。

在第二项研究中，比较了未处理的接种饲料与已经在28dpi时用1:1:1的1％中链脂肪酸处理的中链脂肪酸处理的接种饲料之间的asfvdna的检测和定量。结果表明所有未处理的和28dpi中链脂肪酸处理的样品在30dpi时的asfvdna呈阳性(图3)。在图3中，数据被显示为一式两份的平均循环阈值(ct)。所有样品在跨境模型结束时均为asfvdna阳性。ct值>40被认为是阴性的。

然后通过在猪肺泡巨噬细胞上的病毒分离测试未处理的接种饲料和在0dpi和28dpi时用1％中链脂肪酸处理的接种饲料，以确定通过pcr检测的asfvdna是否是感染性的。病毒分离确定感染性病毒存在于所有未处理的阳性对照中，而在0dpi或28dpi时用中链脂肪酸处理的任何样品中的感染性病毒为不可检测的(表2)。使用抗asfvp30蛋白的单克隆抗体在阳性未处理的样品中检测到感染性病毒。

然后在幼猪生物测定模型中进一步测试在0dpi或28dpi时用中链脂肪酸处理的样品以评估感染性病毒的存在。肌内注射来自中链脂肪酸处理的饲料的样品，因为这是检测感染性asfv的最灵敏的方法。用1或2个样品注射猪以减少所用的猪的数量。基于定量pcr结果合并样品。在猪生物测定中，在0dpi时用中链脂肪酸处理的所有饲料样品均为感染性asfv阴性(表3)。在猪生物测定中，在28dpi时用中链脂肪酸处理的除了两个的所有饲料样品为感染性asfv阴性(表3)。该两个饲料样品(其中一个或两个可能已经存在感染性asfv)是有机大豆粉和干狗粮。将这两个样品注射到单个猪中，该猪在脾的病毒分离时检测到asfv。总的来说，我们的数据支持中链脂肪酸是细胞培养物和饲料成分中感染性asfv的有效缓疫剂。

实施例ii

经典猪瘟病毒检测

mcfa对细胞培养物中csfv的影响显示于表4，以及图4和图5a至图5c。测试不同水平的中链脂肪酸处理(1:1:1比率的c6:c8:c10)在细胞培养模型中灭活或降低csfvbrescia分离株的病毒滴度的效力。10％至0.5％测试的mcfa水平将csf病毒滴度降低至低于通过对猪肾细胞的间接荧光抗体测试可检测到的水平。如图5b中显示，在mcfa处理之后没有可检测到的csfv。在暴露于0.4％至0.125％水平的mcfa之后显示csfv病毒滴度的剂量依赖性降低。当与未缓疫的阳性对照相比时，测试的最低mcfa包含率(0.125％)导致病毒滴度82.2％的降低。

还测试了mcfa对经历跨境环境条件的饲料成分中csfv存活的影响。测试了1％mcfa共混物(1:1:1比率的c6:c8:c10)灭活在支持在模拟运输的37天跨境模型内csfv存活的两种饲料成分中的csfv的能力。测试的两种成分包括传统大豆粉和猪肉香肠肠衣。在csfv接种(10⁵tcid50)之前，在0接种后天数(dpi)，将mcfa共混物加入到饲料成分中并且涡旋以将mcfa混合在整个饲料成分中。对于传统大豆粉和猪肉香肠肠衣，早在1dpi时，用mcfa处理的样品在病毒分离和滴定时呈阴性，而阳性对照分别具有10^4.3tcid50和10^3.7tcid50的可检测的csfv滴度。在不超过37dpi时，所有样品(包括未处理的阳性对照)在病毒分离和滴定时呈阴性。在37天跨境模型结束时收集来自经和未经mcfa处理的传统大豆粉样品的上清液，并且通过肌内注射在3周龄猪生物测定中进行测试。未处理的大豆粉样品在猪生物测定时呈csfv阳性，而用mcfa处理的大豆粉样品在猪生物测定时呈csfv阴性，证明了mcfa消除在经历跨境运输条件的大豆粉中csfv感染性的功效。