一种防治牛蛙腹水病的饲料添加剂及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及一种饲料添加剂，尤其涉及一防治牛蛙腹水病的饲料添加剂及其制备方法和应用。


背景技术：

2.牛蛙(rana catesbeian)隶属两栖纲、无尾目、蛙科，因其鸣声如牛而得名，是一种大型食用蛙。牛蛙原产于北美洲和墨西哥等地，1959年从古巴引入我国，是一种高蛋白、低脂肪和低胆固醇的肉食品，其味道鲜美、生长速度快，环境适应能力强，在国内外均具有广阔的消费市场。2019年，我国牛蛙养殖产量接近50万吨，直接销售产值超过50亿元/年，牛蛙已成为我国水产养殖重要的名特品种。
3.在牛蛙养殖过程中，高温季节容易发生腹水病，特别是在水质恶化、放养密度过高、管理不善的条件下腹水病非常普遍。牛蛙腹水病的主要症状为：腹部膨大，解剖有大量腹水，肝脏肿大；疾病严重时，病蛙四肢无力、厌食，有大量淡黄色或红色腹水，肠、胃壁充血发炎。牛蛙腹水病病原主要为嗜水气单胞菌，感染性强，易全池暴发，在短时间内引起牛蛙大量死亡，造成严重的经济损失。
4.通常，养殖户会使用磺胺类或沙星类药物进行防治，尽管如此，现有药物对腹水病并无特效，同时由于存在耐药性、药物残留影响肉质、用药成本高、操作不便等问题，行业亟需一种能替代抗生素使用的绿色饲料添加剂以解决上述问题。


技术实现要素：

5.针对以上不足，本发明提供一种饲料添加剂，防治养殖过程中的牛蛙腹水病，减少发病率和死亡率，提高养殖效益。
6.本发明通过以下方案达到上述目的：
7.第一方面，本发明提供一种防治牛蛙腹水病的饲料添加剂，包括以下重量份数的组分：连翘15
‑
30份、柴胡15
‑
30份、大蒜素1
‑
2份，胆汁酸2
‑
4份、嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)冻干粉15
‑
25份、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)冻干粉15
‑
25份、玉米淀粉10
‑
20份。
8.在一个优选的实施例中，一种防治牛蛙腹水病的饲料添加剂，包括以下重量份数的组分：连翘15份、柴胡30份、大蒜素2份，胆汁酸2份、嗜酸乳杆菌冻干粉15份、枯草芽孢杆菌冻干粉25份、玉米淀粉11份。
9.在一个优选的实施例中，一种防治牛蛙腹水病的饲料添加剂，包括以下重量份数的组分：连翘30份、柴胡15份、大蒜素1份，胆汁酸4份、嗜酸乳杆菌冻干粉25份、枯草芽孢杆菌冻干粉15份、玉米淀粉10份。
10.在一个优选的实施例中，一种防治牛蛙腹水病的饲料添加剂，包括以下重量份数的组分：连翘20份、柴胡20份、大蒜素1份，胆汁酸2份、嗜酸乳杆菌冻干粉20份、枯草芽孢杆菌冻干粉20份、玉米淀粉17份。
11.优选的，所述胆汁酸中含有重量百分比为20％的猪胆酸，60％的猪去氧胆酸，20％的鹅去氧胆酸。
12.优选的，所述嗜酸乳杆菌冻干粉复苏后活菌数不少于1
×
109cfu/g。
13.优选的，所述枯草芽孢杆菌冻干粉复苏后活菌数不少于1
×
109cfu/g。
14.本发明中所使用的连翘和柴胡是传统中草药，具有广谱抑菌作用，可有效防控细菌感染，且不产生耐药性，无残留，不影响牛蛙肉质。并且，牛蛙腹水病往往并发肝脏病变，连翘和柴胡均有显著的保肝作用，能减轻肝细胞变性、坏死，并能促进肝糖原含量恢复正常；
15.本发明使用的大蒜素具有广泛的药理活性，抗菌谱广，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌都具有较好的抑制作用，与中草药连翘、柴胡进行合理配伍，可增强药效；同时大蒜素对水产动物有较好的诱食作用，可促进含有中草药的饲料的摄入。
16.胆汁酸是动物内源性胆汁的主要成分，可以疏通胆道，有效分解和清除肝脏和肠道内蓄积的细菌内毒素、霉菌毒素等，可修复肝胆损伤；胆汁酸与保肝中草药连翘、柴胡同用可有效改善肝脏功能，减少肝脏病变概率。
17.嗜酸乳杆菌进入肠道后能释放乳酸和抗菌素如嗜酸乳菌素、嗜酸杆菌素和乳酸菌素，可对肠道致病菌产生拮抗作用；同时嗜酸乳杆菌通过粪便排泄入水体形成优势菌后，可竞争性抑制水体中的致病菌。
18.枯草芽孢杆菌也具有竞争性抑制其它外来病原微生物在消化道内定植或增殖的作用；此外，枯草芽胞杆菌在动物肠道内生长繁殖，能产生多种营养物质如维生素、氨基酸、促生长因子等促进动物生长，同时枯草芽胞杆菌还具有较强的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活性，能够促进动物对营养物质的吸收，提高饲料的转化效率。
19.第二方面，本发明提供一种制备上述防治牛蛙腹水病的饲料添加剂的方法，包括以下步骤：
20.(1)将连翘、柴胡分别粉碎，过筛；
21.(2)将过筛后的连翘、柴胡与大蒜素、胆汁酸、嗜酸乳杆菌冻干粉、枯草芽孢杆菌冻干粉及玉米淀粉混合，搅拌均匀后得到混合物；
22.(3)将步骤(2)得到的混合物进行二次粉碎，过筛，将过筛后的混合物搅拌均匀得到饲料添加剂。
23.在一个优选的实施例中，一种制备上述防治牛蛙腹水病的饲料添加剂的方法，包括以下步骤：
24.(1)将连翘、柴胡分别粉碎，过40目筛；
25.(2)将过40目筛后的连翘、柴胡与大蒜素、胆汁酸、嗜酸乳杆菌冻干粉、枯草芽孢杆菌冻干粉及玉米淀粉混合，搅拌均匀后得到混合物；
26.(3)将步骤(2)得到的混合物进行二次粉碎，过100目筛，将过筛后的混合物搅拌均匀得到饲料添加剂。
27.第三方面，本发明提供上述制备方法制备得到的饲料添加剂。
28.第四方面，本发明提供上述防治牛蛙腹水病的饲料添加剂的应用，以重量百分比计，所述添加剂在牛蛙配合饲料中的添加量为0.5％
‑
2％。
29.在一个优选的实施例中，一种防治牛蛙腹水病的饲料添加剂的应用，以重量百分
比计，所述添加剂在牛蛙配合饲料中的添加量为1％。
30.上述防治牛蛙腹水病的饲料添加剂的应用，用于预防牛蛙腹水病，和/或，治疗牛蛙腹水病，和/或提高牛蛙增重率，和/或降低饲料系数，和/或降低死亡率包括腹水病引起的死亡率。
31.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
32.本发明的采用保肝作用的连翘和柴胡，具有抗菌作用和诱食的大蒜素，并且将大蒜素与连翘和柴胡配伍，增强其药效，胆汁酸与连翘和柴胡合用更加有效改善肝脏功能、减轻肝脏病变概率；另一方面，本发明采用嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌，不仅有助于肠道等消化道中菌群的调节抑制，而且抑制水体致病菌，促进动物对营养物质吸收提高饲料转化率；最后，本发明采用中药和有益菌的结合，无副作用，不仅能够预防和治疗腹水病，而且降低饲料系数，提高增重率等，它们的结合使得这些效果显著增强，大大提高经济收益。
附图说明
33.图1为对比试验例2中平均日死亡量的对比图。
34.图2为对比试验例3中平均日死亡量的对比图。
具体实施方式
35.以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
36.本发明中使用的普通牛蛙配合饲料的配方如下(重量份数计)：国产半脱脂鱼粉16份，美国鸡肉粉10份，国产猪肉粉8份，大豆浓缩蛋白5份，豆粕30份，高筋面粉23份，精炼鱼油1份，豆油3份，磷酸二氢钙2份，维生素和矿物盐预混物1.5份，氯化胆碱0.4份，抗氧化剂0.05份，防霉剂0.05份。
37.该普通牛蛙配合饲料粗蛋白含量42.7％，粗脂肪含量8.8％，可利用能值19.5kj/g。
38.其中，抗氧化剂采用乙氧基喹啉。
39.其中，防霉剂采用丙酸型防霉剂。
40.其中，维生素和矿物盐预混物每kg含有以下成分：维生素a，3.2g；维生素d3，0.5g；维生素e，24g；维生素k3，1g；维生素b1，2.5g；核黄素(80％)，4.5g；吡哆醇，2g；维生素b12(1％)，1g；维生素c(35％)，200g；泛酸钙，6g；烟酸，20g；肌醇，80g；生物素(2％)，6g；叶酸，2g；氯化胆碱(50％)，250g；feso4·
h2o，8g；znso4·
h2o，5g；cuso4·
5h2o，1g；mnso4·
h2o，4.5g；ki，6g；cocl2·
6h2o(1％)，5g；na2seo3(1％)，2g；mgso4·
7h2o，120g；nacl，100g；丙酸钙，100g，纤维素，45.8g。
41.实施例1
42.一种防治牛蛙腹水病的饲料添加剂，以重量份数计，其组成为：连翘15份、柴胡30份、大蒜素2份，胆汁酸2份、嗜酸乳杆菌冻干粉15份、枯草芽孢杆菌冻干粉25份、玉米淀粉11份。
43.使用方法：取配制好的添加剂1份与99份普通牛蛙配合饲料混合均匀后进行膨化制粒，经烘干、冷却、筛分后包装备用。
44.实施例2
45.一种防治牛蛙腹水病的饲料添加剂，以重量份计，其组成为：连翘30份、柴胡15份、大蒜素1份，胆汁酸4份、嗜酸乳杆菌冻干粉25份、枯草芽孢杆菌冻干粉15份、玉米淀粉10份。
46.使用方法：取配制好的添加剂1份与99份普通牛蛙配合饲料混合均匀后进行膨化制粒，经烘干、冷却、筛分后包装备用。
47.实施例3
48.一种防治牛蛙腹水病的饲料添加剂，以重量份计，其组成为：连翘20份、柴胡20份、大蒜素1份，胆汁酸2份、嗜酸乳杆菌冻干粉20份、枯草芽孢杆菌冻干粉20份、玉米淀粉17份。
49.使用方法：取配制好的添加剂1份与99份普通牛蛙配合饲料混合均匀后进行膨化制粒，经烘干、冷却、筛分后包装备用。
50.对比试验例1
51.养殖试验于2019年6月20日至2019年10月18日在广东省省汕尾市陆丰市南塘镇某养殖场进行。选取表观健康、规格均匀的牛蛙16万尾，分别转入16个试验池(15m
×
4m
×
1.0m，水深：0.8m)中，每池10000尾，暂养一周。暂养期间，每天用普通牛蛙配合饲料投喂2次(7:00、17:00)，使其适应养殖环境和饲料。之后随机分成4组，每组4个重复，分别投喂对比例1(普通牛蛙配合饲料)、实施例1、实施例2及实施例3的饲料，每天7:00、17:00定时人工投喂，使牛蛙表观饱食。记录每池每天的摄食量、死蛙数、腹水病死蛙数以及死蛙重量。试验为期120天，试验结束时对每个池里的蛙称重，试验结果见表1。
52.表1：对比试验例1中牛蛙死亡率及生长性能数据
[0053] 实施例1实施例2实施例3对比例1初始均量(g)23.5
±
0.323.1
±
0.223.2
±
0.223.7
±
0.4终末均量(g)249.1
±
3.7a256.1
±
4.5a253.2
±
3.6a224.6
±
2.8b增重率(％)960.0
±
14.3a1008.7
±
17.7a991.4
±
14.1a847.7
±
10.6b饲料系数(计算时含死蛙重量)0.93
±
0.01a0.90
±
0.02a0.92
±
0.02a1.02
±
0.01b斤蛙饲料成本(元/斤蛙)3.82
±
0.04ab3.70
±
0.06a3.78
±
0.08ab3.92
±
0.03b总死亡率(％)1.7
±
0.2a1.3
±
0.2a1.5
±
0.1a4.6
±
0.6b腹水病死亡率(％)0.8
±
0.0a0.6
±
0.1a0.7
±
0.1a3.3
±
0.5b
[0054]
注：1、表中同行数据后不同小写字母者表示差异显著(p<0.05)；2、实施例1
‑
3饲料价格按8200元/吨计算，对比例1饲料价格按7700元/吨计算。
[0055]
由表1可知，实施例1
‑
实施例3的终末体重、增重率均显著高于对比例1，而饲料系数、总死亡率及腹水病死亡率均显著低于对比例1；而以上各项指标在实施例1
‑
实施例3之间的差异均不显著。实施例2的斤蛙饲料成本显著低于对比例1，但实施例1和实施例3与对比例1无显著差异，且实施例1
‑
实施3之间也无显著差异。
[0056]
本对比试验的结果说明，使用本发明的饲料添加剂可显著降低牛蛙的总死亡率、腹水病死亡率以及饲料系数，同时显著提高牛蛙的生长速度，总体经济效益显著。
[0057]
对比试验例2
[0058]
养殖对比试验于2019年8月6日至2019年8月20日在广东省汕头市澄海区盐鸿镇某养殖场进行。该养殖场有6个相同规格的养殖池(20m
×
6m
×
1m，水深：0.8m，每池放蛙18000尾，之前无损耗)，7月底发现每池均有少量牛蛙患有腹水病，之后每日加大换水量并全池消毒，到8月5日仍不见好转，且发病率和死亡率持续上升。8月6日开始对比治疗方案，将6个养殖池随机分为2组，每组3个重复，第一组使用诺氟沙星拌料投喂(对比例2)，用量为2g/kg饲
料，第二组使用实施例2中的饲料投喂，每天7:00和17:00定时人工投喂，使牛蛙表观饱食。对比为期15天，每天记录每池的死亡数，并在对比开始、结束及第7天时收集每池的水样，检测水体中嗜水气单胞菌的数量。试验结果见图1和表2。
[0059]
表2：对比试验例2中水体中嗜水气单胞菌的数量
[0060][0061]
注：表中同行数据后不同小写字母者表示差异显著(p<0.05)
[0062]
由图1可知，实施例1中平均每日死亡量显著低于对比例1，在8月19日时，已停止死亡，而对比例1中死亡量在8月14日之后无明显变化，且持续居于高位。
[0063]
由表2可知，对比期间，实施例2在对比第7天及对比结束时的水体中嗜水气单胞菌的数量也显著低于对比例2。
[0064]
本试验的结果说明饲料中添加本发明的添加剂可有效防治牛蛙腹水病，且效果明显好于诺氟沙星。
[0065]
对比试验例3
[0066]
养殖对比试验于2019年9月9日至2019年9月19日在广东省汕头市澄海区溪南镇某养殖场进行。该养殖场有10个相同规格的养殖池(15m
×
6m
×
1m，水深：0.8m，每池放蛙10000尾，之前无损耗)，9月初发现每池均有少量牛蛙患有腹水病，之后每日加大换水量并全池消毒，到9月8日仍不见好转，且发病率和死亡率持续上升。9月9日开始对比治疗方案，将10个养殖池随机分为2组，每组5个重复，第一组使用复方新诺明拌料投喂(对比例3)，用药量为3g/kg饲料，第二组使用实施例3中的饲料投喂，每天7:00和17:00定时人工投喂，使牛蛙表观饱食。对比为期11天，每天记录每池的死亡数，并在对比开始、结束及第7天时收集每池的水样，检测水体中嗜水气单胞菌的数量。试验结果见图2和表3。
[0067]
表3：对比试验例3中水体中嗜水气单胞菌的数量
[0068][0069]
注：表中同行数据后不同小写字母者表示差异显著(p<0.05)
[0070]
由图2可知，实施例3中平均每日死亡量显著低于对比例3，在9月19日时，已停止死亡，而对比例3中死亡量在9月15日之后无明显变化，且持续居于高位。
[0071]
由表3可知，对比期间，实施例3在对比第7天及对比结束时的水体中嗜水气单胞菌
的数量也显著低于对比例3。
[0072]
本试验的结果说明饲料中添加本发明的添加剂可有效防治牛蛙腹水病，且效果明显好于复方新诺明。
[0073]
对比试验例4
[0074]
为表明本发明的添加剂中组分具有协同作用，在实施例1的基础上制备了6种单一组分缺失的添加剂。第1种缺失连翘，第2种缺失柴胡，第3种缺失胆汁酸，第4种缺失大蒜素，第5种缺失嗜酸乳杆菌冻干粉，第6种缺失枯草芽孢杆菌冻干粉。此6种单一组分缺失的添加剂配方见表4。
[0075]
表4：实施例1及缺失例配方
[0076][0077]
养殖试验于2019年6月20日至2019年10月18日在广东省省汕尾市陆丰市南塘镇某养殖场进行。选取表观健康、规格均匀的牛蛙28万尾，分别转入28个试验池(15m
×
4m
×
1.0m，水深：0.8m)中，每池10000尾，暂养一周。暂养期间，每天用普通牛蛙配合饲料投喂2次(7:00、17:00)，使其适应养殖环境和饲料。之后随机分成7组，每组4个重复，分别投喂实施例1和缺失例1
‑
6的饲料，每天7:00、17:00定时人工投喂，使牛蛙表观饱食。记录每池每天的摄食量、死蛙数、腹水病死蛙数以及死蛙重量。试验为期120天，试验结束时对每个池里的蛙称重，试验结果见表5。
[0078]
表5：对比试验4中牛蛙死亡率及生长性能数据
[0079][0080][0081]
由表5可知，实施例1的终末体重、增重率和饲料系数与缺失例1和缺失例2无显著差异，但实施例1的终末体重和增重率均显著高于缺失例3
‑
缺失例6，而饲料系数显著低于缺失例3
‑
缺失例6；实施例1的总死亡率和腹水病死亡率均显著低于缺失例1
‑
缺失例6。
[0082]
本对比试验的结果说明，使用本发明的饲料添加剂可显著降低牛蛙的总死亡率、
腹水病死亡率以及饲料系数，同时显著提高牛蛙的生长速度，且本发明的饲料添加剂各组分之间存在协同作用。
[0083]
此外，发明人还进一步采用相似的试验研究了本发明申请的饲料添加剂中各组分之间重量配比的效果，证实采用本发明中的重量配比，其死亡率、腹水病死亡率等效果都更好，说明本发明的重量配比使饲料添加剂效果具有显著进步。
[0084]
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。