一种具有保护胃黏膜作用的猴头菇组合物的制备方法与应用与流程

本发明属于食品
技术领域：
，具体涉及一种具有保护胃黏膜作用的猴头菇组合物的制备方法与应用。
背景技术：
：中国专利cn109601624a“一种凝固型猴头菇酸奶制备工艺”采用猴头菇菌丝发酵液添加到牛乳中，经乳酸菌发酵而成，只是利用猴头菇代谢物的药用作用，其食用效果并没有猴头菇提取物好，制取猴头菇发酵液时加入了冰糖，使其含糖量增加，并不适用于所有体质；中国专利cn106172767a“一种猴头菇酸奶及其制备方法”采用鲜牛奶进行发酵，扩大了影响因素，而且不好把控质量。再者采用向酸奶中加入3#5％质量比的猴头菇液，猴头菇液味苦加入发酵不仅影响口感且没有猴头菇提取物的作用效果；中国专利cn108812894a“凝固型猴头菇酸奶及其加工方法”通过磨浆过程对猴头菇多糖进行了破坏，使其不能发挥原有的功效，且猴头菇多糖对酸奶发酵剂并无抑制作用，反而为发酵提供了能量，使发酵进行更充分。技术实现要素：本发明的目的是为了提供一种具有保护胃黏膜作用的猴头菇组合物，为了解决如何提高猴头菇的保护胃黏膜功效的技术问题，本发明提供了一种具有保护胃黏膜作用的猴头菇组合物，所述猴头菇组合物由以成分组成：复配益生菌0.2g、猴头菇提取物质量分数0.4％-2％、新西兰进口乳粉25g和纯净水250ml。进一步地限定，所述猴头菇组合物由以成分组成：复配益生菌0.2g、猴头菇提取物质量分数0.4％、新西兰进口乳粉25g和纯净水250ml。进一步地限定，所述猴头菇组合物由以成分组成：复配益生菌0.2g、猴头菇提取物质量分数1.2％、新西兰进口乳粉25g和纯净水250ml。进一步地限定，所述猴头菇组合物由以成分组成：复配益生菌0.2g、猴头菇提取物质量分数2％、新西兰进口乳粉25g和纯净水250ml。本发明提供了上述具有保护胃黏膜作用的猴头菇组合物的制备方法，所述制备方法的步骤如下：(1)猴头菇多糖的提取：将猴头菇烘干粉碎过20目筛，按照1g:20g的料液比加水，在100℃下提取3次，每次提取3次，将多次提取的液体过滤后混合，进行浓缩然后冻干喷粉，即得所需的猴头菇提取物；(2)将步骤(1)得到的猴头菇提取物和新西兰进口乳粉进行调配，用纯净水进行溶解定容，25mpa均质3次后，95℃水浴加热5min，然后冷却至42℃，得到混合液；(3)在混合液中接入复配益生菌，搅拌均匀后灌入分装瓶中，放入42℃恒温水浴发酵罐中进行发酵；将发酵好的猴头菇复合物置于2℃-7℃的冰箱进行冷藏。本发明还提供了一种上述具有保护胃黏膜作用的猴头菇组合物在制备保护胃黏膜的保健品中的应用。有益效果：猴头菇为齿菌科真菌猴头菌的子实体，因菌伞表面长有1～3cm长的毛绒状肉刺，形似猴子脑袋，故而得名。猴头菇味鲜美，兼有药食两用的功效。其成分中除多糖、氨基酸和无机元素外，还含有多肽、萜类、甾醇、多酚和腺苷等多种生物活性物质。猴头菇具有保肝、健脾、养胃、助消化、抗肿瘤、抗溃疡、抗辐射和抗衰老等多种功效。酸奶能够维持肠道菌群平衡、抑制致病菌、改善便秘、缓解乳糖不耐症、降低胆固醇含量、预防衰老、提高人体对钙、铁等矿物质的吸收。本发明利用猴头菇提取物和新西兰进口乳粉为主要原料，研制了猴头菇提取物与酸奶两者的优点，提高了酸奶的营养保健功能，丰富了酸奶的花色种类，也为猴头菇资源的利用开辟了新途径。本发明制得的猴头菇复合物口感爽滑、质地均匀、表面平整光洁，制品兼具了酸奶和猴头菇的营养，且没有添加任何甜味剂和增稠剂，不会引起血糖的急剧升高，食用更安全。附图说明图1为猴头菇提取物对乙醇致胃黏膜损伤模型大鼠溃疡面积的影响，其中，横坐标为组别，纵坐标为胃黏膜溃疡面积；图2为两种益生菌生长曲线，其中，横坐标是培养时间(h)，纵坐标是od600nm；图3为猴头菇多糖对两种益生菌生长的影响，其中，横坐标是猴头菇多糖添加量，纵坐标是菌落总数(cfu/ml)。具体实施例复配益生菌是郑州和合生物的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌以1:1的比例混合而成，新西兰进口乳粉无品牌商业购买即可。实施例1.一种具有保护胃黏膜作用的猴头菇组合物，所述猴头菇组合物由以成分组成：复配益生菌0.2g、猴头菇提取物质量分数0.4％、新西兰进口乳粉25g和纯净水250ml。制备方法如下：(1)猴头菇多糖的提取：挑选成熟、无霉烂的猴头菇，将其烘干粉碎过20目筛，按照1:20的料液比加水，在100℃下提取3次，每次提取3次，将多次提取的液体过滤后混合，进行浓缩然后冻干喷粉，即得所需的猴头菇提取物。(2)猴头菇复合物的工艺：将猴头菇提取物和新西兰进口乳粉按照比例进行调配，用纯净水进行溶解定容，25mpa均质3次后，95℃水浴加热5min，然后冷却至42℃。(3)接种、灌装、发酵：按照比例在混合液中接入菌种，搅拌均匀后灌入分装瓶中，放入42℃恒温水浴发酵罐中进行发酵。将发酵好的酸奶置于2℃-7℃的冰箱进行冷藏。实施例2.一种具有保护胃黏膜作用的猴头菇组合物，所述猴头菇组合物由以成分组成：复配益生菌0.2g、猴头菇提取物质量分数1.2％、新西兰进口乳粉25g和纯净水250ml。制备方法参考实施例1。实施例3.一种具有保护胃黏膜作用的猴头菇组合物，所述猴头菇组合物由以成分组成：复配益生菌0.2g、猴头菇提取物质量分数2％、新西兰进口乳粉25g和纯净水250ml。制备方法参考实施例1。用以下实验验证实验效果：一、产品的评定方法：选取10名有酸奶品评经验的人，根据产品的口感、色泽、风味和组织状态进行综合评审，然后打分，评分标准如表1所示：表1酸奶感官评价表根据表1评价酸奶的感官可以看出，发明是从口感、色泽、风味和组织状态4个方向来进行评分，其中口感分数占据40％、色泽分数占据10％、风味分数占据20％、组织状态分数占据30％。每个方向分为3个状态评分标准和分数线，根据此表格进行打分评价出最佳发明。二、酸奶感官评分结果如表2所示：表2猴头菇提取物添加量对感官的影响由表3可以看出，猴头菇复合物的乳酸菌数随着猴头菇提取物添加量的增加而增加，证明了猴头菇提取物对发酵剂有促进作用；当猴头菇提取物的添加量为1.2％时，感官评分最高，添加量为0.4％和2％时产品的口感相对较差，因此选着猴头菇提取物的添加量为1.2％。即当新西兰进口乳粉添加量为25g、复配益生菌为0.2g、猴头菇提取物添加量为1.2％时产品质量最好。三、猴头菇保护胃黏膜实验研究：以实施例2的组合物为例，通过观察猴头菇组合物对无水乙醇所致大鼠胃黏膜损伤的作用，验证猴头菇多糖是否具有保护胃黏膜的作用。实验动物：健康sd大鼠，体重160-180g，雄性。实验大鼠处理：spf级sd大鼠饲养环境温度为25±1℃，采用12h:12h昼夜交替照明，自由饮水，每周换水3次，换垫料3次。猴头菇组合物(实施例2)剂量设置：h1：17mg/kg；h2：136mg/kg。猴头菇组合物抗无水乙醇致大鼠急性胃黏膜损伤的作用：spf级sd大鼠，雄性，体重180-220g，实验分为模型对照组、猴头菇组合物各剂量组。动物每天灌胃给药1次，连续10天，模型对照组给予等体积蒸馏水。末次给药前大鼠禁食24小时，自由饮水，在末次给药1h后，动物灌胃无水乙醇1ml/只，同时禁水。1h后处死动物，取出全胃，沿胃大弯剪开胃壁，先用生理盐水冲洗干净，再将其平辅于两块玻璃板之间，进行拍照，用imagej图像分析软件测量溃疡面积。抑制率(％)＝(对照组溃疡面积一给药组溃疡面积)/对照组溃疡面积×100％。实验结果：猴头菇组合物对无水乙醇致急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜溃疡面积的影响结果如表3和图1所示，与模型对照组相比，h1、h2均可明显减轻胃黏膜损伤，抑制率分别为41.39％、27.28％；均能显著改善无水乙醇造成的黏膜上皮细胞脱落，黏膜内出血、细胞水肿，炎症细胞浸润，腺体受损，核固缩等病理结构。表3猴头菇提取物对乙醇致胃黏膜损伤模型大鼠溃疡面积的影响组别剂量(mg/kg)动物数n溃疡面积(mm2)抑制率(％)模型对照组——10116.20±7.17——h1组171068.10±11.16**41.39h2组1361084.50±9.88*27.28注：与模型对照组比较，**p<0.01，*p＜0.05。四、猴头菇多糖对益生菌生长的影响1、菌种活化与稀释梯度确定将保存的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌分别称取1g溶解于100ml无菌水中，取1ml菌液稀释，稀释梯度为10-1～10-8，分别取1ml的菌液于相应平板中涂布。经培养后计数，记录菌落数在30～300cfu的平板和相应的稀释倍数，为正式平板计数确定合适的三个稀释度。2、体外胃模拟液的制备按2015版《中国药典》配制体外胃模拟液：以磷酸缓冲盐溶液(pbs,0.1mol/l，ph＝7.4)替换配制试验培养基中的水，用37％的盐酸溶液调节实验培养基ph至3.0。于高压灭菌锅(121℃，15min)中灭菌，用无菌水将一定量经紫外灭过菌的胃蛋白酶溶解，添加到冷却至室温的培养基中，配制成含0.5％胃蛋白酶的试验培养基，体外模拟胃环境。3、益生菌生长曲线的检测取1ml活化的液体菌种，接种于39个装有20ml基础培养基大试管中，编号分别为0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h，每个编号设置3个试管，于37℃培养箱中培养。然后测定每个培养时间点的菌液在600nm处的吸光值，取三个试管吸光值的平均值绘制生长曲线。测得的保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌单个菌株的生长至稳定期的时间分别为t1、t2。4、猴头菇多糖对益生菌体外生长影响实验分别取1ml的保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌接种至20ml的基础培养基(ck)与分别添加质量分数为0.4％、0.8％、1.2％、2.0％猴头菇多糖的基础培养基中。再将保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的上述培养基分别于37℃培养箱中培养t1、t2时间后，各取1ml菌液根据预实验测定结果进行相应的稀释，每个稀释液各取1ml，涂布于平板上，于37℃培养48h后计算菌落数。每组试验重复三次。4.1添加猴头菇多糖对两种益生菌在模拟胃液培养基中的耐受性试验在模拟胃液试验培养基中加入5％猴头菇多糖提取物代替葡萄糖，再以不含猴头菇多糖胃液培养基为对照组(ck)，分别接种1ml两种益生菌菌液，混匀后立即取1ml稀释，在平板培养皿中涂布，经37℃培养48h培养后计数，为0h的菌数。将试验培养基放入37℃培养箱中培养。3h后取出试验培养基，取1ml稀释，进行涂布，经37℃恒温箱中培养48h后计数，其为3h平板菌落数，每组试验重复三次。然后分别计算存活率。5、结果分析5.1益生菌的生长曲线保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌生长曲线如图2所示，两种益生菌在0-4h内都处于休眠期，4h以后两种益生菌渐渐开始进入生长期。保加利亚乳杆菌在18h后进入稳定期，嗜热链球菌在10h后进入稳定期，所以在研究猴头菇多糖对益生菌体外生长影响的试验和模拟胃液试验中，两种益生菌的最佳培养时间为18h(保加利亚乳杆菌)、10h(嗜热链球菌)。5.2猴头菇多糖对两种益生菌体外生长影响实验结果在不同猴头菇多糖添加量的培养基中培养3h后，分别取样进行平板计算，对照组为未添加猴头菇多糖的培养基，实验结果如表4和图3所示。保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌分别以10-6、10-5和10-7为有效稀释度，随着在培养基中添加猴头菇多糖量的增加，两种益生菌的生长量均明显增加。由此可见猴头菇多糖对益生菌体外生长具有显著的促进效果。表4不同稀释度的三种菌在猴头菇多糖平板上生长菌落数情况5.3添加猴头菇多糖对两种益生菌在模拟胃液中的耐受性影响分别用含1.2％猴头菇多糖、ph为3.0的模拟胃液培养基对两种菌进行培养3h后，对照组为未添加猴头菇多糖的培养基，取样计算平板菌落数。结果如表5所示，两种益生菌的有效稀释梯度为10-3，未添加猴头菇多糖的培养基在培养3h后，保加利亚乳杆菌的存活率为61.68％，添加1.2％猴头菇多糖的培养基在培养3h后，保加利亚乳杆菌存活率为72.77％，存活率提升了11.09％。未添加猴头菇多糖的培养基在培养3h后，保加利亚乳杆菌的存活率为67.90％，添加1.2％猴头菇多糖的培养基在培养3h后，保加利亚乳杆菌的存活率为74.39％，存活率提升了6.49％。因此猴头菇多糖能够显著增强保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌对胃液的耐受性。多糖是食用菌生长的重要生物活性物质，不仅作为胃肠道益生菌的重要能源物质，还可以促进益生菌对肠道细胞的吸附作用，从而保护胃黏膜的免疫系统。结果如表5所示，猴头菇多糖可增强益生菌对胃液的耐受力，使该发明中益生菌的效果得到了显著的提升，而且不仅促进了胃肠内原有的益生菌生长，更使发酵剂中的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌得到了充分的能源从而促进其生长。表5不同稀释度的两种菌在猴头菇多糖的模拟胃液平板上菌落数注：/表示数量较多，无法计算。当前第1页12